PSD-95/nNOS相互作用抑制剂通过上调Sirt3减轻高糖诱导的神经元损伤

目的观察突触后密度蛋白95(postsynaptic density-95,PSD-95)/神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)相互作用抑制剂IC87201和ZL006对高糖诱导的神经元损伤的影响并探讨其可能的分子作用机制。方法从新生SD乳鼠中分离并培养海马神经元细胞。为了研究PSD-95/nNOS相互作用抑制剂IC87201和ZL006对高糖(HG)诱导的神经元损伤的影响,将海马神经元分为:常糖(normal glucose,NG)组、HG组(150 mmol/L D-葡萄糖诱导高糖损伤)、HG+DMSO组(DMSO预处理30 min再进行高糖处理)、HG+IC87201组(IC87201预处理30 min,再进行高糖处理)和HG+ZL006组(ZL006预处理30 min,再进行高糖处理);采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测试剂盒检测神经元损伤,采用原位末端标记法(terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)检测神经元凋亡,采用活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光探针检测ROS水平,采用丙二醛(malondialdehyde,MDA)检测试剂盒测量MDA含量,采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)检测试剂盒测量SOD活性,采用Western blot方法检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平。为了研究沉默信息调节因子3(silent information regulator 3,Sirt3)基因敲除对PSD-95/nNOS相互作用抑制剂IC87201和ZL006介导的高糖保护作用的影响,将海马神经元分为:NG组、HG+DMSO组、HG+IC87201+sh-scrambled组(sh-scrambled转染48 h,IC87201预处理30 min,再进行高糖处理)、HG+IC87201+sh-Sirt3组(sh-Sirt3转染48 h,IC87201预处理30 min,再进行高糖处理)、HG+ZL006+sh-scrambled组(sh-scrambled转染48 h,ZL006预处理30 min,再进行高糖处理)和HG+ZL006+sh-Sirt3组(sh-Sirt3转染48 h,ZL006预处理30 min,再进行高糖处理);采用Western blot方法检测Sirt3蛋白表达水平,采用TUNEL检测神经元细胞凋亡,采用ROS荧光探针检测ROS水平。结果与NG组比较,HG组和HG+DMSO组神经元损伤显著升高(P<0.01),凋亡神经元数量显著增加(P<0.01),促凋亡蛋白Bax表达水平显著升高(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平显著降低(P<0.01),ROS产生水平显著提高(P<0.01),MDA含量显著增加(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),Sirt3蛋白表达水平显著减少(P<0.01)。与HG组和HG+DMSO组比较,HG+IC87201组和HG+ZL006组神经元损伤显著降低(P<0.01),凋亡神经元数量显著下降(P<0.01),Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.01),ROS产生水平显著下降(P<0.01),MDA含量显著减少(P<0.01),SOD活性显著升高(P<0.01),Sirt3蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与HG+IC87201+sh-scrambled组比较,HG+IC87201+sh-Sirt3组Sirt3蛋白水平显著降低(P<0.01),凋亡神经元数量显著增加(P<0.01),ROS产生水平显著提高(P<0.01)。与HG+ZL006+sh-scrambled组比较,HG+ZL006+sh-Sirt3组Sirt3蛋白水平显著降低(P<0.01),凋亡神经元数量显著增加(P<0.01),ROS产生水平显著提高(P<0.01)。结论PSD-95/nNOS相互作用抑制剂IC87201和ZL006可以减少高糖诱导的神经元损伤,其机制可能与上调Sirt3蛋白表达相关。

出生前后铝暴露对大鼠学习记忆及海马NO、nNOS的影响

目的研究出生前后不同浓度慢性铝暴露后年轻大鼠海马NO含量和nNOS表达的变化,探讨铝损害学习记忆的突触机制。方法对照组、低剂量和高剂量组大鼠从孕期开始分别自由饮用蒸馏水15mmol.L-1和30mmol.L-1的A1C13水溶液;采用原子吸收石墨炉法测定血铝和脑铝含量;跳台法测试学习记忆能力;硝酸还原酶法检测NO含量;免疫组化方法观察nNOS阳性细胞表达。结果与对照组相比,两铝暴露组大鼠血铝和脑铝含量明显升高,学习记忆能力明显下降,海马NO含量明显降低且nNOS阳性神经元表达明显减少。结论出生前后慢性铝暴露损害了大鼠的学习记忆行为,可能与海马NO含量减少及nNOS神经元表达降低有关。

酸枣仁汤对慢性睡眠剥夺老年失眠大鼠视交叉上核c-fos及nNos表达的影响

目的:研究酸枣仁汤对慢性睡眠剥夺老年失眠大鼠视交叉上核c-fos及nNos表达的影响。方法:利用"多平台水环境法"建立老年大鼠慢性睡眠剥夺模型,将实验大鼠随机分为4组,环境对照组、慢性睡眠剥夺模型组、舒乐安定组以及酸枣仁汤组。用透射电镜方法观察大脑下丘脑视交叉上核部位形态学改变,免疫组织化学方法观察睡眠剥夺21 d后各组大鼠视交叉上核c-fos、nNos表达的变化,采用RT-PCR法检测大鼠视交叉上核c-fos、nNos的表达。结果:与环境对照组相比较,慢性睡眠剥夺模型组c-fos活性明显升高(P<0.05),nNos明显升高(P<0.05),脂褐素(Lipo)增多增大,扩张肿胀的高尔基体(Golgi)囊泡明显增多;与慢性睡眠剥夺模型组比较,酸枣仁汤组c-fos的表达显著下降(P<0.05),nNos明显下降(P<0.05),脂褐素显著减少减小。结论:酸枣仁汤能够调控大脑视交叉上核c-fos、nNos的表达,有效调节老年睡眠剥夺大鼠的昼夜节律。

超短波影响神经源性疼痛时nNOS和NMDA受体表达的实验研究

目的:研究神经源性疼痛时兔背根神经节(dorsalrootganglia,DRG)和脊髓后角内神经元型一氧化氮合酶(neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)与N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartatereceptor,NMDA受体)阳性表达的特点以及超短波对其的影响,从而探讨超短波治疗的分子作用机制。方法:新西兰纯种成年兔45只,随机分为空白对照组(n=15),损伤模型组(n=15)和超短波治疗组(n=15)。采用免疫组化法结合图像分析,定量观察损伤后不同时间(10d、30d和90d)DRG和脊髓后角内nNOS和NMDA受体阳性表达的分布特点。结果:术后10d时模型组和治疗组手术侧DRG和脊髓后角内nNOS阳性表达增多,NMDA受体阳性表达在DRG内降低;90d时治疗组nNOS和NMDA受体表达已基本接近正常,而模型组nNOS和NMDA受体仍未恢复正常。结论:超短波治疗可改变神经源性疼痛时DRG和脊髓内神经元表达上调的nNOS和表达下调的NMDA受体水平,提示其可能通过影响NMDA受体—NO系统发挥缓解疼痛的满意疗效。

耳针改善血管性痴呆大鼠记忆与nNOS表达的关系

目的 探讨耳针对血管性痴呆大鼠 (VD)学习记忆的改善及与 n NOS蛋白表达的关系。 方法 采用 4-血管阻断的方法 ,建立大鼠 VD模型 ,然后进行耳穴肾、脑针刺治疗 ,用免疫组化法检测海马n NOS蛋白的变化 ;并用 Nissl染色方法 ,结合图象分析统计海马神经元丢失比率 ;同时采用 Y型迷宫 ,进行行为学检测 ,定量测定其学习记忆成绩。 结果 耳针治疗后 VD大鼠海马 CA1 区 n NOS蛋白表达减少 ,海马 CA1 区神经元丢失比率较 VD模型组减少 ,与学习记忆成绩呈负相关。 结论 耳针改善了VD大鼠学习记忆 ,这可能是针刺抑制脑缺血后 n NOS的过量增加 ,达到对 VD大鼠海马神经元的保护作用。

银杏叶提取物联合盐酸文拉法辛对抑郁大鼠海马nNOS蛋白表达及NO水平的影响

目的 :探讨抑郁症脑损伤的机制 ,研究银杏叶提取物 (EGb)及合成抗抑郁药盐酸文拉法辛(Venlafaxine)对抑郁大鼠的抗脑损伤及神经元保护作用。方法 :慢性应激建立大鼠抑郁模型。将 84只雄性大鼠分为正常对照组、抑郁模型组和不同治疗组。快速断头法处死 ,取海马后一侧进行免疫组化反应 ,观察海马CA3区nNOS蛋白的表达 ;另一侧检测NO含量 ;同时测定血清中NO含量。结果 :抑郁模型组海马nNOS表达增加 ,海马及血清中NO含量增加 ,P <0 0 1;联合用药组海马nNOS表达下降 ,海马及血清中NO含量减少 ,P <0 0 1。结论 :慢性应激增加海马nNOS表达 ;EGb有减轻神经元损伤 ,保护神经元的作用 ,其与Venlafaxine合用可能会达到对抑郁进行多靶点、多层次的治疗 ,弥补单一用药的不足。

银杏平颤方对帕金森病模型小鼠脑内nNOS mRNA表达的影响

目的探讨中药复方银杏平颤方(GBPR)抗实验性帕金森病(PD)的疗效及作用机制。方法取雄性C57/BL6J小鼠分为正常对照组、模型对照组和中药组。以1-甲基4-苯基-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射制作的PD模型小鼠,并给予GBPR灌胃治疗。用地高辛标记的nNOScDNA寡核苷酸探针进行原位杂交,观察GBPR治疗对小鼠脑组织纹状体、黑质中的nNOSmRNA的表达的影响。结果MPTP腹腔注射PD模型小鼠脑纹状体和黑质中可见大量nNOSmRNA的表达;中药GBPR能显著降低脑纹状体、黑质中的nNOSmRNA的表达。结论提示本药有良好的抗NO毒性作用,其作用机制可能与降低脑组织神经型一氧化氮合成酶(nNOS)合成,达到抗氧化损伤效应。

长时间应用L-精氨酸增强大鼠学习记忆功能和大脑皮质、海马nNOS或c-fos的表达及神经元数目的增加(英文)

为探讨长时间应用一氧化氮(NO)对学习记忆功能和神经系统可塑性的影响,以及NO与c-fos基因表达的关系,分别给初断乳的大鼠灌胃NO前体左旋-精氨酸(L-Arg)或一氧化氮合酶抑制剂L-NAME,用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆功能,用免疫组化技术和HE染色检测大脑皮质和海马CA1、CA3、DG区的神经元型一氧化氮合酶(nNOS)和c-fos基因的表达以及神经细胞数目的变化。将大鼠随机分成L-Arg组、L-NAME组和对照组。大鼠断乳后分别每天用L-Arg[200mg/(kg.d)]、L-NAME[50mg/(kg.d)]和等剂量的蒸馏水灌胃,持续3个月。结果显示:长期应用NO前体L-Arg可明显缩短大鼠的寻台潜伏期,促进nNOS和c-fos基因的表达,同时大脑皮质和海马CA1、CA3、DG区的神经元数目增加;而长期应用一氧化氮合酶抑制剂L-NAME可抑制大鼠寻台潜伏期的缩短和nNOS、c-fos基因的表达,同时大脑皮质和海马CA1、CA3、DG区的神经元数目减少。因此我们认为长时间应用NO可促进神经系统c-fos基因的表达和幼鼠神经系统的发育,即可塑性的变化,继而影响大鼠的学习记忆功能。

氯喹对戊四氮慢性致痫大鼠海马GluR2及nNOS表达的影响

目的：观察氯喹对戊四氮慢性致痫大鼠海马α-氨基羟甲基异恶唑丙酸（amino-3-hydroxy-5-methylisox-azole-4-propionic acid,AMPA）受体（GluR2）及神经型一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,nNOS）表达的影响,探讨氯喹在癫痫发生发展中的作用。方法：30只健康雄性SD大鼠,随机分为3组：对照组（10只）、戊四氮致痫组（10只）、氯喹干预组（10只）,观察大鼠行为表现和脑电图的改变。应用Western Blot检测大鼠海马GluR2含量的改变,免疫组化检测nNOS的变化。结果：对照组无癫痫发作,戊四氮致痫组癫痫发作严重（III~Ⅴ级）,氯喹干预组痫样发作与戊四氮致痫组相比较轻（Ⅰ~III级,P〈0.05）;戊四氮致痫组脑电记录呈频发高幅的痫样波,氯喹干预组痫样波幅低且缓;与对照组相比,癫痫组GluR2表达减弱（P〈0.05）,氯喹干预组与对照组比较差异有显著性（P〈0.05）;nNOS在戊四氮致痫组表达强,以海马为著,与对照组比较差异有显著性（P〈0.05）,氯喹干预组与对照组比较无显著性差异（P〉0.05）。结论：氯喹可以通过调节GluR2的含量和抑制nNOS的表达,表明氯喹可能是预防和治疗癫痫的理想药物。

大鼠局灶性脑缺血再灌注中nNOS源性NO对Bcl-2、Bax表达的影响

为研究大鼠局灶性脑缺血再灌注早期神经元型一氧化氮合酶(nNOS)来源的一氧化氮(NO)和过氧亚硝基阴离子(ONOO-)对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,本实验闭塞大鼠左侧大脑中动脉造成局灶性脑缺血模型,给予选择性nNOS抑制剂-7硝基吲唑,应用免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果表明:50mg/kg、25mg/kg剂量的7-硝基吲唑可使Bcl-2蛋白表达升高,Bax表达降低。提示:局灶性脑缺血再灌注早期,nNOS来源的NO可能通过下调Bcl-2、上调Bax促进细胞凋亡的发生。

nNOS抑制剂在大鼠海马缺氧损伤的保护作用

目的为进一步证实缺血、缺氧时神经原性ＮＯ的神经毒性作用。方法在大鼠离体海马脑片上，应用微电极记录技术，研究ｎＮＯＳ抑制剂７－ＮＩ对缺氧所致神经元损害的保护作用。结果ｎＮＯＳ抑制剂７－ＮＩ对海马脑片缺氧后群峰电位（ＰＳ）变化较对照组显著减小。结论７－ＮＩ对海马脑片缺氧损伤有明确保护作用。作用机理可能是７－ＮＩ抑制ｎＮＯＳ活性降低缺氧后海马神经原性ＮＯ的过多形成，从而提高海马脑片抗缺氧损伤的能力，更加明确了缺氧早期神经原性ＮＯ的神经毒性作用。

酒精对大鼠胚胎发育及脑nNOS表达的影响

采用整体动物模型观察器官形成期酒精暴露对宫内胚胎发育影响 ,结合酶组织化学和免疫组织化学技术 ,探讨酒精对脑组织中海马区NOS(nirticoxidesynthase活性和nNOS(neuronalnitricoxidesynthase)表达影响。结果显示 1 0g/kg/d组即可出现FAS形态特征 ;酒精能导致脑海马区NOS活性和nNOS表达增强 ,提示NO产量增高。结果说明酒精具有发育毒性 。

不同剂量氯喹对戊四氮慢性致痫大鼠脑内nNOS表达的影响

目的:观察不同剂量氯喹对戊四氮慢性致痫大鼠脑内神经型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,nNOS)表达的影响,探讨氯喹在癫痫发生发展过程中的作用。方法:健康雄性SD大鼠50只,随机分为对照组(10只)、戊四氮致痫组(10只);氯喹干预1组(10只);氯喹干预2组(10只);氯喹干预3组(10只)。观察大鼠行为学表现,应用免疫组织化学和Western Blot方法观察不同剂量氯喹对慢性致痫大鼠脑内nNOS表达的影响。结果:戊四氮致痫组nNOS明显增多,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05);氯喹可抑制nNOS的表达,氯喹干预2、3组与对照相比差异无显著性(P>0.05)。结论:氯喹能够剂量依赖性的抑制nNOS的表达,提示氯喹可通过其对nNOS的抑制作用达到抗癫痫效应。

宫内缺氧对新生小鼠额叶皮质神经元内nNOS表达及对成年小鼠学习记忆能力的影响

为探讨孕鼠宫内缺氧对新生小鼠发育时期额叶皮质神经元内nNOS表达及对成年小鼠学习记忆能力的影响,本研究采用Tapanainen建立的缺氧模型致胎龄13、15、17d小鼠宫内缺氧,然后采用Nissl染色观察新生鼠发育时期P1、P7、P14、P28、P90额叶皮质内神经元的数量和形态变化;免疫组织化学染色方法观察新生鼠发育时期P1、P7、P14、P28、P90脑组织内nNOS阳性神经元的表达;Morris水迷宫实验检测P90小鼠的学习和记忆能力。结果显示:与正常组比较,宫内缺氧组小鼠额叶皮质神经元数量明显减少,额叶皮质神经元内nNOS的表达明显减弱。宫内缺氧组小鼠逃避潜伏期延长及穿环次数明显减少。以上结果提示宫内缺氧可导致新生鼠额叶皮质神经元数量明显减少及nNOS的表达也明显减弱,并引起成年小鼠学习记忆能力降低。

大鼠坐骨神经受压和解压后背根节和脊髓内神经元nNOS表达的变化

目的 :观察坐骨神经受压及解压后大鼠腰段背根节和脊髓内神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)表达的变化 ,借以探讨外周神经源性痛的发病和影响机制。方法 :大鼠随机分为压迫组、解压组和对照组 ,采用聚乙烯管压迫坐骨神经的动物模型 ,用免疫细胞化学方法并结合计算机图像分析进行研究。结果 :与对照组比较 ,压迫组和解压组腰4～ 6背根节中nNOS的表达显著增加 ,相应节段脊髓背角的表达则明显降低 ;解压组与压迫组比较 ,背根节中nNOS的表达明显减少 ,而脊髓背角的已经下调的nNOS表达则回升 ,但仍然低于对照组水平。结论 :NO可能与神经源性痛时在中枢和外周的痛觉敏感性形成和神经系统长时程改变有关。

一氧化氮合酶抑制剂L-NNA对福尔马林大鼠脑nNOS、iNOS表达的影响

目的 探讨一氧化氮合酶抑制剂L NNA对福尔马林实验大鼠脑一氧化氮合酶表达的影响。方法 应用免疫组织化学ABC法研究了nNOS、iNOS在福尔马林大鼠脑内的表达。结果 在福尔马林实验大鼠不同脑区 ,nNOS和iNOS表达较强。一氧化氮合酶抑制剂L NNA可抑制福尔马林实验大鼠脑nNOS、iNOS的表达 ,NO生成减少。结论 一氧化氮合酶抑制剂L NNA可通过抑制一氧化氮合酶作用 ,参与伤害性痛觉调制。一氧化氮在脑的痛觉调制过程中起重要作用。

人慢性胃炎粘膜内CD3^+细胞,S-100^+树突状细胞和nNOS表达的意义

采用免疫细胞化学方法探讨胃粘膜内 CD3+细胞 ,S- 10 0 +树突状细胞和 n NOS的表达与慢性胃炎的关系及意义。检测标本均取自胃窦部活检的胃粘膜组织。结果显示 CD3+细胞主要分布于粘膜上皮、腺上皮和固有膜内 ,而 S- 10 0 +树突状细胞则主要位于固有膜内 ,正常组与浅表性胃炎组和萎缩性胃炎组 ,浅表性胃炎组与萎缩性胃炎组细胞数量有显著性差异(P<0 .0 1) ,n NOS阳性反应主要位于粘膜上皮和腺上皮的基底部 ,但各组之间 n NOS的表达程度不同 ,特别是萎缩性胃炎与浅表性胃炎有显著性差异 (P<0 .0 1) ,我们认为 ,对 CD3+细胞 ,S- 10 0 +树突状细胞和 n NOS的检测 ,不仅有助于判断胃炎的病变程度和临床疗效 。

艾灸对类风湿性关节炎大鼠海马CA1～CA3区及齿状回nNOS表达的影响

目的探讨艾灸对类风湿性关节炎（RA）大鼠海马及齿状回一氧化氮合酶（nNOS）表达的影响。方法选用健康SD大鼠15只，随机分为对照组、RA模型组、艾灸治疗组，每组5只。RA模型组，艾炙治疗组以福氏完全佐剂（FCA）造模。造模后第7天，对艾炙治疗组进行艾灸“肾俞”、“足三里”治疗，免疫组化法测定海马及齿状回nNOS的表达。结果①RA模型组与对照组比较，RA大鼠海马CA2-CA3区nNOS的含量显著升高，有显著差异（P〈0．01）；艾炙治疗组与模型组比较，nNOS的含量显著降低，有显著差异（P〈0．01）。②RA模型组与对照组比较，RA大鼠海马CA1区nNOS的含量显著升高，有显著差异（P〈0．01）；RA模型组与艾炙治疗组比较，无显著差异（P〉0．05）。③RA模型组，对照组，艾炙治疗组RA大鼠齿状回nNOS的含量无显著差异（P〉0．05）。结论艾灸干预能降低RA大鼠海马CA2～CA3 nNOS的含量，海马在艾灸治疗实验性RA中具有重要作用。

转录因子CREB激活介导吗啡依赖SK-N-SH细胞的nNOS及fosB基因表达的调控机制

目的 探讨吗啡依赖的SK- N -SH细胞表达神经元型一氧化氮合酶 (neuronalnitricoxidesynthase ,nNOS)及fosB基因的调控机制。方法 建立吗啡依赖及戒断细胞模型 ,体外合成含cAMP反应元件 (cAMPresponseelement ,CRE)序列的寡核苷酸 ,经硫代磷酸化修饰 ,作为单链寡核苷酸 (CRE transcriptionfactordecoyoligodeoxynucleotide ,CRE decoyODN)。分别采用电泳迁移率改变分析 (electrophoresismobilityshiftassay ,EMSA)及RT -PCR技术 ,检测CRE decoyODN对吗啡依赖及纳络酮急性戒断诱导的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosBmRNA表达的影响。结果 吗啡依赖及纳络酮急性戒断使SK- N- SH细胞的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosBmRNA明显升高 ,CRE decoyODN可特异抑制上述指标升高。结论 CREB的激活介导了吗啡依赖SK- N