红车轴草中nNOS-PSD-95解偶联剂的高效发现和快速筛选

以ZL006为模板分子，丙烯酰胺（AA）为功能单体，乙腈为致孔剂，制备磁性分子印记聚合物（MMIPs），并且通过傅立叶红外光谱仪（FT-IR）和场发射扫描电子显微镜（sEM）对其进行形态和结构表征；将制备的磁性分子印记聚合物作为人工受体从红车轴草中直接分离提取新的nNOS-PSD-95解偶联剂，并且通过细胞神经保护作用和免疫共沉淀实验对所筛选化合物进行活性评价。结果表明，成功合成的MMIPs具有较好的分散性、适宜的粒径大小和良好的吸附性能，并从红车轴草中分离富集得到刺芒柄花素、樱黄素、鹰嘴豆芽素A，细胞神经保护作用和免疫共沉淀结果显示鹰嘴豆芽素A具有较好的细胞保护作用和解偶联活性。

nNOS-PSD-95解耦联剂和加巴喷丁、普瑞巴林孪药的设计合成

目的:设计合成nNOS-PSD-95解耦联剂和加巴喷丁、普瑞巴林的孪药,获得新型神经病理性疼痛治疗药物。方法:将nNOS-PSD-95解耦联剂及其类似物与加巴喷丁、普瑞巴林以酰胺连接,用神经病理性疼痛模型评价目标化合物的镇痛作用。结果:所有目标化合物具有程度不同的神经病理性疼痛的镇痛作用,nNOS-PSD-95解耦联剂和加巴喷丁、普瑞巴林的孪药对神经病理性疼痛的镇痛作用强于单靶点药物。结论:nNOS-PSD-95解耦联剂和加巴喷丁、普瑞巴林的孪药比单靶点药物对神经病理性疼痛具有更好的镇痛作用。

2-[(1H-苯并[d][1,2,3]三氮唑-5-胺基)甲基]-4,6-二氯苯酚的合成

目的:合成神经元型一氧化氮合成酶-谷氨酸能突触后致密度蛋白-95(neuronal nitric oxide synthase with postsynapticdensity protein-95,nNOS-PSD-95)解偶联剂2-[(1H-苯并[d][1,2,3]三氮唑-5-胺基)甲基]-4,6-二氯苯酚。方法:以4-硝基-1,2-苯二胺为原料,经重氮化反应和还原反应后得到5-氨基-1H-苯并[d][1,2,3]三氮唑。5-氨基-1H-苯并[d][1,2,3]三氮唑和3,5-二氯水杨醛缩合形成亚胺,经还原制得目标化合物。结果:目标物结构经核磁共振氢谱(1H-NMR)和核磁共振碳谱(13C-NMR)确证,收率20.3%。结论:该合成方案能简便快速地合成2-[(1H-苯并[d][1,2,3]三氮唑-5-胺基)甲基]-4,6-二氯苯酚。

以nNOS和PSD-95相互作用为靶标的解耦联剂筛选模型的建立

复合物神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase, nNOS)-突触后密度蛋白-95 (postsynaptic density protein-95, PSD-95)形成的增加在缺血性脑卒中引发的神经损伤中起着重要作用,本研究以nNOS和PSD-95相互作用为靶点,建立nNOS-PSD-95解耦联剂筛选模型。模型采用转染的方式将质粒pCDH-Flag-nNOS和pcDNA3.1-PSD-95分别转染入人胚胎肾-293T (human embryonic kidney-293T, HEK-293T)细胞,通过真核表达的方式富集Flag-nNOS和PSD-95。随后,通过nNOS和PSD-95体外共孵育获得nNOS-PSD-95复合物,以ZL006为阳性药干预nNOS-PSD-95的结合,考察ZL006在该系统的解耦联效率,并对解耦联模型进行优化。结果表明,在该模型中, ZL006显示出较明显的解耦联效果,并通过戊二醛法获得抗体耦联磁珠,从而优化筛选模型,提高了筛选效率,降低了成本。最后运用该模型对另一个已知的nNOS-PSD-95解耦联化合物IC87201及候选ZL006结构类似物进行了解耦联活性评价,发现IC87201在该模型中同样具有解耦联活性,并且在候选化合物中也筛选出了潜在的解耦联化合物。

基于NMDAR信号通路的神经保护剂的研究进展

病理状态下的N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)过度激活导致脑缺血后神经损伤。非选择性的NMDAR拮抗剂难以兼顾药物的安全性和有效性。NR2B拮抗剂以及DAPK1/NR2BR解偶联剂、NMDAR/PSD-95解偶联剂、PSD-95/n NOS解偶联剂等选择性的作用于NMDAR下游信号通路的相关蛋白-蛋白相互作用的药物显示出更好的安全性,具有良好的发展前景。