红麻线粒体基因NAD3和COB的RNA编辑与表达分析

以红麻细胞质线粒体近等基因系UG93A(不育系)、UG93B(保持系)及UG93A×福红992(恢复系)的F1代为材料,研究花药线粒体基因NAD3和COB的转录与表达。结果发现,在3种供试材料中,基因NAD3的CDS区在DNA水平和RNA编辑水平上均无差异;不育系与保持系的COB基因DNA编码序列无差异,但在RNA水平上发生了编辑,8个位点的编辑均发生于密码子的第一或第二位碱基,且导致氨基酸种类变化,主要为亲水性氨基酸转变为疏水性氨基酸;COB基因在UG93A中的RNA编辑频率低于UG93B;NAD3和COB基因在3种材料中的转录本大小基本相同,但在表达水平上表现为不育系显著低于保持系和F1代。由此推测NAD3和COB基因在红麻花药发育过程中有着重要的作用。

牛裂体吸虫线粒体DNA序列和基因排序分析

目的为探讨牛裂体吸虫(Schistosoma bovis)在裂体属内的系统发生位置,测定牛裂体吸虫线粒体基因部分序列,并分析该编码区域的基因序列和基因排序。方法以GNT-K法抽提牛裂体吸虫成虫基因组DNA,用兼并和特异引物扩增目的基因。扩增产物经纯化后克隆于pGEM1T质粒载体,并转化大肠埃希菌。抽提和纯化阳性质粒DNA,并测序。以纯化后的阳性质粒DNA为模板,根据已获得的序列设计内部特异引物,采用引物步移法获得全长目的片段。在GenBank中查找曼氏血吸虫等相关血吸虫线粒体基因序列,作基因排序及比较分析后,以邻接法绘制系统发生树。结果测定了牛裂体吸虫线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基Ⅳ～Ⅰ基因序列(nicotinamide adeninedinucleotide dehydrogenase subunit4-1gene,nad4-nad1),其长度为2214bp。分析该编码区基因排序为nad4-trnQ(Gln)-trnK(Lys)-nad3-trnD(Asp)-nad1。牛裂体吸虫在该区域的线粒体基因排序与非洲支系血吸虫相似,与亚洲支系血吸虫有很大的不同;根据牛裂体吸虫与其他8种吸虫部分nad4,nad3,部分nad1和部分nad4+nad3+nad1基因序列比对结果,分别构建系统发生树。结果表明,牛裂体吸虫与埃及血吸虫位于同一簇,归属于非洲血吸虫支系,这与由基因排序推测的牛裂体吸虫的系统发生位置结果相一致。结论牛裂体吸虫属于非洲支系而非亚洲支系血吸虫。

NAD依赖性蛋白脱乙酰酶Sirtuin-3对糖尿病心肌病影响及机制

目的 探讨NAD依赖性蛋白脱乙酰酶Sirtuin-3(Sirt3)对糖尿病心肌病(DCM)的影响及其相关机制。方法 将6只8周龄雄性C57BL/6J小鼠分入正常组和DCM模型组,每组各3只。DCM模型组高脂饮食4周后连续5 d腹腔注射链脲菌素;正常组正常饮食,腹腔注射等量的柠檬酸缓冲液5 d。用300μmol/L的棕榈酸(PA)刺激H9C2细胞24 h构建心肌细胞脂毒性模型,将PA处理过的细胞纳入PA组,未处理过则纳入对照组。对细胞进行Sirt3的干扰RNA(si-Sirt3)和对照试剂(si-con)转染,转染24 h后给予PA刺激24 h并收集细胞。将细胞按照处理方式不同分入4组:si-con组,si-Sirt3组,si-con+PA组,si-Sirt3+PA组。采用Western blot检测正常组和DCM模型组小鼠心肌组织中Sirt3蛋白水平,以及对照组和PA组细胞中Sirt3蛋白水平。采用Western blot检测H9C2细胞中超氧化物歧化酶2(SOD2)乙酰化水平。采用DHE染色检测活性氧产生情况。结果 与正常组比较,DCM模型组小鼠心肌组织中Sirt3蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,PA组细胞中Sirt3蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-con组比较,si-con+PA组ac-SOD2/SOD2水平和活性氧水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与si-con+PA组比较,si-Sirt3+PA组ac-SOD2/SOD2水平和活性氧水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Sirt3可通过SOD2的去乙酰化消除心肌细胞中的活性氧,减少心肌细胞氧化应激损伤,在DCM的发生和发展中发挥重要作用。