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气肿疽梭菌NanA基因核酸疫苗的免疫效果评价
被引量:
2
1
作者
陈竞
张皓
+3 位作者
马玉腾
于成东
齐强
金鑫
《动物医学进展》
北大核心
2019年第12期68-73,共6页
为了检测气肿疽梭菌NanA基因核酸疫苗的免疫效果,在成功构建pVAX1-NanA真核表达重组质粒的基础上将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光鉴定其表达,并将成功构建的pVAX1-NanA质粒大量提取后免疫Balb/c小鼠,设置pVAX1-NanA核酸疫苗组、pV...
为了检测气肿疽梭菌NanA基因核酸疫苗的免疫效果,在成功构建pVAX1-NanA真核表达重组质粒的基础上将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光鉴定其表达,并将成功构建的pVAX1-NanA质粒大量提取后免疫Balb/c小鼠,设置pVAX1-NanA核酸疫苗组、pVAX1空载体组和PBS对照组。对小鼠采血并分离血清,用ELISA测定血清中的IgG、IgG1、IgG2a抗体水平和IFN-γ、IL-4细胞因子水平;第3次免疫2周后,用流式细胞仪测定小鼠脾脏中的CD4^+和CD8^+T细胞水平。结果表明,pVAX1-NanA核酸疫苗免疫Balb/c小鼠后,小鼠血清中IgG、IgG1、IgG2a的抗体水平极显著高于pVAX1空载体组和PBS对照组(P<0.01);IFN-γ和IL-4细胞因子水平极显著高于pVAX1空载体组和PBS对照组(P<0.01);CD4^+、CD8^+T细胞分析表明,pVAX1-NanA免疫组的CD4^+和CD8^+T细胞水平显著高于pVAX1组和PBS对照组(P<0.05),pVAX1-NanA核酸疫苗组的CD4^+/CD8^+T细胞比值高于pVAX1空载体组与PBS对照组(P<0.05),pVAX1空载体组和PBS对照组之间无显著差异(P>0.05)。试验成功制备了pVAX1-NanA核酸疫苗,且pVAX1-NanA核酸疫苗可刺激Balb/c小鼠产生体液免疫和细胞免疫。
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关键词
气肿疽梭菌
nana基因
核酸疫苗
免疫原性
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职称材料
气肿疽NanA基因真核表达质粒的构建与鉴定
被引量:
1
2
作者
马玉腾
罗永仁
+3 位作者
姜永越
于成东
张皓
金鑫
《延边大学农学学报》
2019年第3期53-58,共6页
为构建气肿疽NanA基因真核表达质粒,根据GenBank中已发表的气肿疽梭菌NanA基因序列,设计合成了1对特异性引物,以气肿疽梭菌基因组DNA为模板,扩增出NanA目的基因并克隆至pMD 18-T simple载体,将连接后的pMD 18-T-NanA进行鉴定分析。将克...
为构建气肿疽NanA基因真核表达质粒,根据GenBank中已发表的气肿疽梭菌NanA基因序列,设计合成了1对特异性引物,以气肿疽梭菌基因组DNA为模板,扩增出NanA目的基因并克隆至pMD 18-T simple载体,将连接后的pMD 18-T-NanA进行鉴定分析。将克隆质粒pMD 18-T-NanA进行双酶切后,与pVAX1真核表达质粒连接。结果表明:构建的重组克隆质粒pMD 18-T-NanA和重组表达质粒pVAX1-NanA经PCR鉴定和酶切鉴定正确。该试验成功构建了气肿疽NanA基因真核表达质粒,为气肿疽核酸疫苗的制备奠定了基础。
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关键词
气肿疽梭菌
nana基因
真核表达质粒
鉴定
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职称材料
气肿疽梭菌NanA基因克隆及生物信息学分析
被引量:
1
3
作者
于成东
罗永仁
+6 位作者
姜永越
马玉腾
张皓
陈竞
李成辉
方程
金鑫
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第7期96-100,共5页
为了对气肿疽梭菌NanA基因进行克隆及生物信息学分析,试验根据GenBank中已发表的气肿疽梭菌NanA基因序列设计并合成1对特异性引物,以气肿疽梭菌总DNA为模板,扩增出NanA目的基因并克隆至pMD18-T载体中,对测序正确的NanA基因进行序列对比...
为了对气肿疽梭菌NanA基因进行克隆及生物信息学分析,试验根据GenBank中已发表的气肿疽梭菌NanA基因序列设计并合成1对特异性引物,以气肿疽梭菌总DNA为模板,扩增出NanA目的基因并克隆至pMD18-T载体中,对测序正确的NanA基因进行序列对比分析,对NanA蛋白进行理化性质分析与二级结构预测,同时使用在线软件预测NanA蛋白三级结构。结果表明:成功扩增出气肿疽梭菌Nan A基因,与参考序列相比,共存在3处核苷酸突变,核苷酸序列和氨基酸序列与NCBI公布的JF4135 NanA基因序列的同源性均为99.8%。NanA蛋白分子质量约为71 ku,具有较高的抗原指数,二级结构以β-折叠和无规则卷曲为主,有多个抗原表位区域。
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关键词
气肿疽梭菌
nana基因
基因
扩增
克隆
理化性质分析
同源性比对
原文传递
气肿疽梭菌不同靶基因检测方法的比较
被引量:
1
4
作者
云巾宴
任春宇
+4 位作者
车达
金清洙
段雪岩
司唯
金鑫
《江苏农业科学》
北大核心
2015年第11期278-280,共3页
为检测牛、羊等反刍动物的气肿疽梭菌,筛选出更为特异、敏感的PCR检测方法,分别以fli A(C)、nan A、cct A为靶基因进行PCR检测,并对其敏感性、特异性等方面进行比较。结果表明,以cct A为靶基因的PCR检测方法敏感性最高,最小检测DNA量为1...
为检测牛、羊等反刍动物的气肿疽梭菌,筛选出更为特异、敏感的PCR检测方法,分别以fli A(C)、nan A、cct A为靶基因进行PCR检测,并对其敏感性、特异性等方面进行比较。结果表明,以cct A为靶基因的PCR检测方法敏感性最高,最小检测DNA量为12.30×10^(-5)pg/μL;以fli A(C)、nan A为靶基因的PCR检测方法敏感性较低,最小检测DNA量为0.123 ng/μL;3种靶基因引物菌未扩增出D型产气荚膜梭菌、E型产气荚膜梭菌、腐败梭菌、巴氏杆菌等基因片段,具有较好的特异性。本试验为气肿疽的快速诊断提供了更为敏感、特异的检测技术。
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关键词
气肿疽梭菌
fliA(C)
基因
nana基因
cctA
基因
PCR方法
下载PDF
职称材料
题名
气肿疽梭菌NanA基因核酸疫苗的免疫效果评价
被引量:
2
1
作者
陈竞
张皓
马玉腾
于成东
齐强
金鑫
机构
延边大学农学院
延边大学珲春校区
出处
《动物医学进展》
北大核心
2019年第12期68-73,共6页
文摘
为了检测气肿疽梭菌NanA基因核酸疫苗的免疫效果,在成功构建pVAX1-NanA真核表达重组质粒的基础上将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光鉴定其表达,并将成功构建的pVAX1-NanA质粒大量提取后免疫Balb/c小鼠,设置pVAX1-NanA核酸疫苗组、pVAX1空载体组和PBS对照组。对小鼠采血并分离血清,用ELISA测定血清中的IgG、IgG1、IgG2a抗体水平和IFN-γ、IL-4细胞因子水平;第3次免疫2周后,用流式细胞仪测定小鼠脾脏中的CD4^+和CD8^+T细胞水平。结果表明,pVAX1-NanA核酸疫苗免疫Balb/c小鼠后,小鼠血清中IgG、IgG1、IgG2a的抗体水平极显著高于pVAX1空载体组和PBS对照组(P<0.01);IFN-γ和IL-4细胞因子水平极显著高于pVAX1空载体组和PBS对照组(P<0.01);CD4^+、CD8^+T细胞分析表明,pVAX1-NanA免疫组的CD4^+和CD8^+T细胞水平显著高于pVAX1组和PBS对照组(P<0.05),pVAX1-NanA核酸疫苗组的CD4^+/CD8^+T细胞比值高于pVAX1空载体组与PBS对照组(P<0.05),pVAX1空载体组和PBS对照组之间无显著差异(P>0.05)。试验成功制备了pVAX1-NanA核酸疫苗,且pVAX1-NanA核酸疫苗可刺激Balb/c小鼠产生体液免疫和细胞免疫。
关键词
气肿疽梭菌
nana基因
核酸疫苗
免疫原性
Keywords
Clostridium chauvoei
nana
gene
nucleic acid vaccine
immunogenicity
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
气肿疽NanA基因真核表达质粒的构建与鉴定
被引量:
1
2
作者
马玉腾
罗永仁
姜永越
于成东
张皓
金鑫
机构
延边大学农学院
珲春边境经济合作区综合服务站
图们市农业农村局畜牧管理总站
敦化市民政局
出处
《延边大学农学学报》
2019年第3期53-58,共6页
基金
吉林省教育厅“十二五”科学技术重点项目(吉教科合字[2014]第6号)
文摘
为构建气肿疽NanA基因真核表达质粒,根据GenBank中已发表的气肿疽梭菌NanA基因序列,设计合成了1对特异性引物,以气肿疽梭菌基因组DNA为模板,扩增出NanA目的基因并克隆至pMD 18-T simple载体,将连接后的pMD 18-T-NanA进行鉴定分析。将克隆质粒pMD 18-T-NanA进行双酶切后,与pVAX1真核表达质粒连接。结果表明:构建的重组克隆质粒pMD 18-T-NanA和重组表达质粒pVAX1-NanA经PCR鉴定和酶切鉴定正确。该试验成功构建了气肿疽NanA基因真核表达质粒,为气肿疽核酸疫苗的制备奠定了基础。
关键词
气肿疽梭菌
nana基因
真核表达质粒
鉴定
Keywords
Clostridium chauvoei
nana
gene
eukaryotic expression vector
identification
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
气肿疽梭菌NanA基因克隆及生物信息学分析
被引量:
1
3
作者
于成东
罗永仁
姜永越
马玉腾
张皓
陈竞
李成辉
方程
金鑫
机构
延边大学农学院
珲春市边境经济合作区综合服务站
图们市农业农村局
出处
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第7期96-100,共5页
基金
吉林省教育厅“十二五”科学技术重点项目(吉教科合字〔2014〕第2号)。
文摘
为了对气肿疽梭菌NanA基因进行克隆及生物信息学分析,试验根据GenBank中已发表的气肿疽梭菌NanA基因序列设计并合成1对特异性引物,以气肿疽梭菌总DNA为模板,扩增出NanA目的基因并克隆至pMD18-T载体中,对测序正确的NanA基因进行序列对比分析,对NanA蛋白进行理化性质分析与二级结构预测,同时使用在线软件预测NanA蛋白三级结构。结果表明:成功扩增出气肿疽梭菌Nan A基因,与参考序列相比,共存在3处核苷酸突变,核苷酸序列和氨基酸序列与NCBI公布的JF4135 NanA基因序列的同源性均为99.8%。NanA蛋白分子质量约为71 ku,具有较高的抗原指数,二级结构以β-折叠和无规则卷曲为主,有多个抗原表位区域。
关键词
气肿疽梭菌
nana基因
基因
扩增
克隆
理化性质分析
同源性比对
分类号
S852.616.3 [农业科学—基础兽医学]
Q785 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
气肿疽梭菌不同靶基因检测方法的比较
被引量:
1
4
作者
云巾宴
任春宇
车达
金清洙
段雪岩
司唯
金鑫
机构
延边大学农学院动物医学系
吉林省延边州畜牧总站
吉林省延边州动物疫病预防控制中心
吉林省延吉市动物卫生监督所
出处
《江苏农业科学》
北大核心
2015年第11期278-280,共3页
基金
吉林省教育科学技术研究项目[编号:吉教科合字(2014)第6号]
文摘
为检测牛、羊等反刍动物的气肿疽梭菌,筛选出更为特异、敏感的PCR检测方法,分别以fli A(C)、nan A、cct A为靶基因进行PCR检测,并对其敏感性、特异性等方面进行比较。结果表明,以cct A为靶基因的PCR检测方法敏感性最高,最小检测DNA量为12.30×10^(-5)pg/μL;以fli A(C)、nan A为靶基因的PCR检测方法敏感性较低,最小检测DNA量为0.123 ng/μL;3种靶基因引物菌未扩增出D型产气荚膜梭菌、E型产气荚膜梭菌、腐败梭菌、巴氏杆菌等基因片段,具有较好的特异性。本试验为气肿疽的快速诊断提供了更为敏感、特异的检测技术。
关键词
气肿疽梭菌
fliA(C)
基因
nana基因
cctA
基因
PCR方法
分类号
S855.1 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
气肿疽梭菌NanA基因核酸疫苗的免疫效果评价
陈竞
张皓
马玉腾
于成东
齐强
金鑫
《动物医学进展》
北大核心
2019
2
下载PDF
职称材料
2
气肿疽NanA基因真核表达质粒的构建与鉴定
马玉腾
罗永仁
姜永越
于成东
张皓
金鑫
《延边大学农学学报》
2019
1
下载PDF
职称材料
3
气肿疽梭菌NanA基因克隆及生物信息学分析
于成东
罗永仁
姜永越
马玉腾
张皓
陈竞
李成辉
方程
金鑫
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020
1
原文传递
4
气肿疽梭菌不同靶基因检测方法的比较
云巾宴
任春宇
车达
金清洙
段雪岩
司唯
金鑫
《江苏农业科学》
北大核心
2015
1
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职称材料
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