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2022-2023年山东省A(H1N1)pdm09流感病毒HA、NA基因变异特征分析
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作者 吴巨龙 张淑 +4 位作者 何玉洁 孙林 宋绍霞 孙文魁 刘倜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期471-477,共7页
目的 了解山东省2022-2023流感监测年度分离的A(H1N1)pdm09亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的变异特征,为流感的防控提供科学依据。方法 从流感监测网络实验室分离的流感毒株中按地市随机选取1... 目的 了解山东省2022-2023流感监测年度分离的A(H1N1)pdm09亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的变异特征,为流感的防控提供科学依据。方法 从流感监测网络实验室分离的流感毒株中按地市随机选取14株A(H1N1)pdm09亚型流感毒株,以WHO推荐的当季疫苗株为参考进行全基因组测序,并采用荧光法开展神经氨酸酶抑制(neuraminidase inhibition,NI)实验以评估药物敏感性。结果 山东省2022-2023年度分离的A(H1N1)pdm09流感病毒属于6B.1A分支中的5a.2a进化簇,核苷酸序列比对分析显示,HA和NA基因与2021-2023年度北半球疫苗株A/Victoria/2570/2019的亲缘关系较为接近,同源性分别为98.5%~98.7%和98.8%~99.1%。氨基酸序列分析显示,HA蛋白有20个位点发生了氨基酸序列变异,并发现1株病毒可能发生抗原漂移,有3株病毒发生了HA蛋白糖基化位点的缺失。NA酶相关重要位点未发生变异。NI实验显示,所测流感毒株均对抗流感病毒药物敏感。结论 所监测毒株与疫苗株整体同源性很高,但氨基酸存在一定程度变异,今后有必要持续开展流感病毒基因变异特征监测以了解流感流行的风险,以及评价基因变异对流感疫苗和治疗药物效果的影响。 展开更多
关键词 甲型H1n1pdm09流感 ha基因 nA基因 基因变异
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H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化
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作者 屈小天 王雅楠 +4 位作者 许倩茹 李雪洋 张申立 张二芹 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2024年第3期125-132,共8页
为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将... 为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将重组质粒pCAMBIA1300-HA通过电转化法导入根癌农杆菌EHA105中,筛选出阳性菌落并侵染水稻愈伤组织。经过暗培养、潮霉素筛选、分化、生根、成苗,采用CTAB法提取水稻叶片DNA,PCR鉴定结果显示,HA基因已插入到水稻基因组中,重组HA基因大小为4660 bp。将阳性植株移植到大田中,4个月后收获水稻种子,提取水稻胚乳蛋白,Western blot鉴定结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达。重组HA蛋白通过Q阴离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析三步分离纯化,其纯度达到90%以上。最后将纯化后的重组HA蛋白与ISA 50V佐剂混合并乳化制成疫苗,免疫小鼠,小鼠血清具有较高的特异性抗体水平,表明重组HA蛋白免疫原性较好。综上,成功构建了H5N1亚型禽流感病毒HA重组蛋白的水稻表达系统,并分离纯化获得了高纯度和免疫原性良好的重组HA蛋白。 展开更多
关键词 H5n1亚型禽流感病毒 ha蛋白 水稻胚乳表达 蛋白质纯化
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共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒的构建及免疫效果评价
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作者 吕亚迪 杨洁 +2 位作者 谢文婷 徐婷 陈瑞爱 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2123-2134,共12页
旨在构建能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒,有望开发抗新城疫和H9N2亚型禽流感病毒的二联疫苗,为控制H9N2 AIV和NDV提供新的防御思路,对NDV疫苗载体的构建和优化有重要的参考意义。利用反向遗传技术,以rDHN3-mF... 旨在构建能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒,有望开发抗新城疫和H9N2亚型禽流感病毒的二联疫苗,为控制H9N2 AIV和NDV提供新的防御思路,对NDV疫苗载体的构建和优化有重要的参考意义。利用反向遗传技术,以rDHN3-mF为骨架,在病毒基因组的P和M之间的非编码区插入全长膜结合HA和另外一个带有截短跨膜结构域的可溶性HA蛋白,获得了能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的基因Ⅶ型NDV减毒株重组病毒rDHN3mF-HA和rDHN3mF-2HA。通过鸡胚接种、Western blot、血凝效价(HA)及平均鸡胚致死时间(MDT)等试验来检测重组病毒的稳定性以及生物学特性,将重组病毒以10~6 EID_(50·)只^(-1)剂量免疫7日龄SPF鸡并测定血凝抑制(HI)抗体,在免疫后28 d对各组进行攻毒保护试验。结果显示:重组病毒在鸡胚中连续传至十五代后HA基因无突变发生;Western blot证明重组病毒可稳定高效地表达特异性的HA蛋白;重组病毒的生长曲线说明了重组病毒与亲本毒株具有相似的复制特性和低毒力特征;重组病毒免疫组的SPF鸡均能产生针对NDV或者H9N2 AIV的特异性HI抗体;攻毒保护试验结果:重组病毒均能对攻毒后的鸡产生100%保护效果;喉、肛拭子检测结果说明重组病毒可显著减少NDV与H9N2 AIV的体外排毒;气管与肺qPCR检测结果显示攻毒后3 d, rDHN3mF-2HA较rDHN3mF-HA更显著地降低了脏器中H9N2 AIV含量。本研究成功构建了共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感HA蛋白的基因Ⅶ型重组NDV,为H9N2 AIV和NDV的一种新型重组基因工程二联活载体疫苗的研制与应用奠定了基础。 展开更多
关键词 H9n2亚型禽流感病毒 ha蛋白 新城疫病毒 免疫原性 载体疫苗 免疫保护效率
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长春市2016—2020监测年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征分析 被引量:3
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作者 崔薇 初秋 +5 位作者 李晨光 龚云伟 赵春艳 孙宇 隋天卓 孙炳欣 《中国实验诊断学》 2023年第6期690-695,共6页
目的分析长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征,了解其变异情况及遗传进化特征。方法选取2016—2020年度甲型H1N1流感病毒分离株109株,PCR扩增HA基因并进行序列测定;利用生物信息学软件对分离株的HA基因进行进化和... 目的分析长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征,了解其变异情况及遗传进化特征。方法选取2016—2020年度甲型H1N1流感病毒分离株109株,PCR扩增HA基因并进行序列测定;利用生物信息学软件对分离株的HA基因进行进化和变异分析。结果长春市109株分离株与疫苗株A/California/07/2009的HA蛋白相比均有S84N、S162N和I216T共同的氨基酸位点变异,且有1株发生了HA蛋白D222N位点突变,提示此毒株可引起患者下呼吸道症状。109株病毒株的HA基因之间核苷酸同源性为96.9%~100%,氨基酸同源性为97.2%~100%。在进化树分析上,都属于6B.1大分支,并且随着时间的推移,HA在基因进化树上离早期疫苗株A/California/7/2009越来越远,同一年份里也有毒株位于不同的小分支内。结论长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因在不断的变异中,应持续进行监测,为预防甲型H1N1流感大流行提供参考。 展开更多
关键词 甲型H1n1流感病毒 血凝素(ha) 基因特征
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H7N9亚型禽流感病毒HA基因mRNA的构建
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作者 杨佳欣 刘文宇 +4 位作者 李炯颉 陈普成 柳金雄 陈化兰 姜永萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期771-778,共8页
H7N9亚型禽流感病毒(AIV)持续给家禽及人类健康造成威胁。为构建H7N9亚型AIV(简称H7N9 AIV)mRNA疫苗,本研究以AIV分离株A/chicken/Yunnan/SD024/2021(H7N9)(简称CK/YN/SD024/2021)的HA基因为目的基因、选择来自人β-球蛋白和非洲爪蟾β... H7N9亚型禽流感病毒(AIV)持续给家禽及人类健康造成威胁。为构建H7N9亚型AIV(简称H7N9 AIV)mRNA疫苗,本研究以AIV分离株A/chicken/Yunnan/SD024/2021(H7N9)(简称CK/YN/SD024/2021)的HA基因为目的基因、选择来自人β-球蛋白和非洲爪蟾β-球蛋白的不同编码基因序列作为HA基因的非翻译区(UTR),构建了中间转录质粒pGEM-YN和pXT7-YN,以2个质粒为模板通过体外转录制备了mRNA mH7-YN-pGEM和mH7-YN-pXT7;将2种mRNA转染HEK293T细胞,western blot鉴定结果显示2种mRNA转染的细胞均可检测到约为70 ku的HA蛋白条带和50 ku的HA1蛋白条带;通过间接免疫荧光试验(IFA)确定最适转染剂量和HEK293T细胞中HA蛋白的动态表达,结果显示,3μg mRNA转染106个细胞并于转染24 h后荧光信号强度均最强;将2种mRNA转染鸡胚成纤维细胞(CEF),均可通过IFA检测到HA蛋白的表达。以上结果表明,本研究正确构建了2种含H7N9 AIV HA基因的mRNA,且其均能够在HEK293T细胞和CEF中正确表达HA蛋白,3μg mRNA转染HEK293T细胞可获得最佳的蛋白表达水平,转染24 h后HA蛋白的表达水平达到最高。本研究基于UTR序列的差异首次正确构建了两种能在哺乳动物细胞和禽类细胞中高效表达H7N9 AIV HA蛋白的mRNA,为禽流感mRNA疫苗的研发和免疫效力评估奠定了良好的物质和技术基础。 展开更多
关键词 H7n9 禽流感病毒 MRnA UTR ha基因
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14株H9N2亚型禽流感病毒分离株的HA和NA基因序列分析
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作者 冯肖肖 赵灵燕 +1 位作者 刘霞 徐辉 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期1-11,共11页
为了解浙江省H9N2亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的分子特征和遗传变异情况,本试验对2012—2021年分离到的14株H9N2亚型AIV分离株进行HA和NA基因序列测定和分析。结果显示:14株分离株的HA和NA基因均属于Y280分支,H... 为了解浙江省H9N2亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的分子特征和遗传变异情况,本试验对2012—2021年分离到的14株H9N2亚型AIV分离株进行HA和NA基因序列测定和分析。结果显示:14株分离株的HA和NA基因均属于Y280分支,HA核苷酸同源性为91.5%~99.4%,NA核苷酸同源性为89.0%~98.7%,其与疫苗株CK/SS/94、CK/F/98、CK/6/96和CK/1/00的HA核苷酸同源性为86.0%~91.1%。14株分离株HA蛋白裂解位点氨基酸组成均为RSSR↓GLF;受体结合位点主要表现为K141N、A142T、T155N、H183N和V190T突变,其中第226位和第228位全部为L和G,可与α-2,6唾液酸受体结合,具有感染人的特性;蛋白潜在糖基化位点均为6个,主要变异表现在第200~202位1个位点缺失和第295~297位1个位点增加;抗原相关位点主要表现为G82E、S137D、D145G、N159G、A160D、T192R和N193D突变,此外,有5株出现D160N突变。14株分离株NA蛋白存在6个潜在糖基化位点,其中1株发生N86H突变,缺失1个潜在糖基化位点;均出现第61~63位颈部氨基酸缺失。结果表明,浙江省H9N2亚型AIV流行毒株不断变异,与疫苗株存在抗原性差异,需加强病毒变异监控和新疫苗研发。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9n2亚型 ha基因 nA基因 基因分析
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广东地区H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因生物学特征分析 被引量:2
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作者 曾庆航 刘杨 +5 位作者 孙敏华 胡鑫宇 谢梓民 张敏霞 袁朝霞 廖明 《广东农业科学》 CAS 2023年第5期103-111,共9页
【目的】监测广东地区H9N2亚型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)的遗传变异和分子进化趋势,为我国H9N2亚型AIV的防控提供参考。【方法】对2022年广东地区3株H9N2亚型AIV的HA和NA基因进行扩增、克隆、测序,使用DNAStar、PhyloSuit... 【目的】监测广东地区H9N2亚型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)的遗传变异和分子进化趋势,为我国H9N2亚型AIV的防控提供参考。【方法】对2022年广东地区3株H9N2亚型AIV的HA和NA基因进行扩增、克隆、测序,使用DNAStar、PhyloSuite软件进行序列拼接和比对,再运用MEGA、Megalign、NetNGlyc 1.0Server等软件,对其核苷酸和氨基酸序列进行遗传进化、核苷酸同源性分析,以及受体结合、蛋白活性、耐药性和糖基化等关键位点分析。【结果】系统发育树和核苷酸同源性分析结果显示,3株分离株的HA和NA基因分别属于h9.4.2.5分支和1分支,与早期毒株的核苷酸同源性分别为81.6%~91.7%和88.2%~91.2%,分别命名为h9.4.2.5c分支和1.2分支;核苷酸和氨基酸序列分析发现,HA裂解位点为PSRSSR↓GLF,受体结合位点产生I155T、H183N、A190T/V、T212I、Q226L、Q227M突变,糖基化位点产生218N非糖基化和新增313N糖基化突变;NA茎部缺失187~195位9个核苷酸(ACAGAGATA),导致缺失63~65位3个氨基酸(TEI);NA红细胞结合位点产生K/E/S368N、D369N突变,与NA蛋白活性,耐药性的相关位点E119、D151、R152、R224、E276、R292、R371均未发生突变。【结论】2022年广东地区分离的3株H9N2亚型AIV已经进化成新的亚群,部分突变可能增强了对哺乳动物的适应性,且其抗原性发生改变,但尚未获得对奥司他韦和扎那米韦等抗流感病毒药物的耐药性。 展开更多
关键词 H9n2 禽流感 ha基因 nA基因 遗传进化 生物学特征
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稳定表达H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白的293T细胞株构建及应用 被引量:2
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作者 曹永忠 邓婧 +2 位作者 黄雅 薄宗义 胡增垒 《中国家禽》 北大核心 2023年第10期59-64,共6页
为获得用于评价H7N9亚型禽流感疫苗诱导的抗体Fc免疫效应的靶细胞,研究采用慢病毒包装与感染技术构建一株稳定表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)HA蛋白的细胞株,并以该细胞株为靶细胞建立H7N9亚型禽流感疫苗免疫血清补体介导的细胞毒(AD... 为获得用于评价H7N9亚型禽流感疫苗诱导的抗体Fc免疫效应的靶细胞,研究采用慢病毒包装与感染技术构建一株稳定表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)HA蛋白的细胞株,并以该细胞株为靶细胞建立H7N9亚型禽流感疫苗免疫血清补体介导的细胞毒(ADCML)活性的检测方法。结果显示成功包装了一株重组慢病毒,滴度可达108 FU/mL;构建了稳定表达H7N9 AIV HA蛋白的293T细胞株,HA蛋白主要在细胞膜上表达。基于新城疫病毒(NDV)载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫鸡后,诱导产生的HA结合性IgG抗体滴度为2180。以稳定细胞株为靶细胞,载体疫苗血清诱导的细胞死亡水平显著高于空载体与未免疫鸡血清(P<0.001);补体灭活后,载体疫苗血清诱导的细胞死亡水平显著降低(P<0.001)。研究表明,基于NDV载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫鸡血清具有较强的ADCML活性,稳定表达H7N9 AIV HA蛋白的细胞株可作为评价H7N9亚型禽流感疫苗免疫血清Fc免疫效应的靶细胞。 展开更多
关键词 H7n9亚型禽流感 ha蛋白 稳定细胞株 疫苗 Fc免疫效应 补体 抗体保护
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2022年山东地区商品肉鸡15株H9N2亚型禽流感病毒HA基因的遗传演化分析
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作者 邵明辰 董伟峰 刘兆洁 《家禽科学》 2023年第12期38-42,共5页
为了解2022年商品肉鸡H9N2亚型禽流感病毒在山东地区的流行情况,选取了15株分离鉴定的H9N2亚型禽流感毒株,对其HA基因进行序列测定和分子特征分析,并应用软件Mega6.0绘制HA基因进化树,进行遗传进化分析。结果表明,15株H9N2分离毒的HA裂... 为了解2022年商品肉鸡H9N2亚型禽流感病毒在山东地区的流行情况,选取了15株分离鉴定的H9N2亚型禽流感毒株,对其HA基因进行序列测定和分子特征分析,并应用软件Mega6.0绘制HA基因进化树,进行遗传进化分析。结果表明,15株H9N2分离毒的HA裂解位点氨基酸均为RSSR/GLF,具有典型低致病性AIV HA基因的特征;其第234位氨基酸均为亮氨酸(L),因此就具有了结合人流感受体的分子特性。进化树分析表明,2022年山东地区15株H9N2流行毒株HA基因属于4.2.5分支,细分为近几年在中国鸡群中流行的4.2.5a和4.2.5.c亚分支。 展开更多
关键词 H9n2亚型 禽流感病毒 ha基因 遗传演化分析
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Melt-Spinning of Nano-Hydroxyapatite/Poly(ε-caprolactone)Composite Fibers for Potential Application in Bone Tissue Engineering
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作者 陈培峰 王富军 +2 位作者 王璐 丁雯 赵健安 《Journal of Donghua University(English Edition)》 EI CAS 2017年第6期726-729,共4页
Nano-hydroxyapatite/poly(e-caprolactone) (nHA/PCL) composite materials are among the best candidates for application in bone tissue engineering. As the main technique to fabricate porous scaffolds, electrospilming... Nano-hydroxyapatite/poly(e-caprolactone) (nHA/PCL) composite materials are among the best candidates for application in bone tissue engineering. As the main technique to fabricate porous scaffolds, electrospilming produce scaffolds with unsatisfactory mechanical strength and limited pore size for cdi infiltration. Micron-sized fiber assembly with higher mechanical strength is qualified to structure hybrid scaffolds. In this study, nHA/PCL monofilament fibers with different mass ratios were fabricated through melt-spinning. Transmission electron microscope (TEM) was used to observe the aggregation between nHA parfides. Other characterizations including scanning electron microscopy (SEM), attenuated total reflection Fourier transform infrared spectroscopy (ATR.FTIR) and X-ray diffraction (XRD) were done to discuss the morphology, components and crystallization of the nHA/PCL composite fibers, respectively. The influence of nHA/PCL mass ratio on the tensile properties and water contact angle of composite fibers was also studied. The SEM images show the homogeneous dispersion of nano partides in the polymer matrix. Besides, nHA content increases the tensile strength, initial modulus and hydrophillcity of the composite fibers under the premise of spinnability. This kind of fibers is strong enough to fabricate fiber assembly which may have potential application in bone tissue engineering. 展开更多
关键词 nano-hydroxyapatite nha poly 6-caprolactone PCL melt sDinninf tensile vroverties
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加工工艺对n-HA/PA66复合材料结晶行为和力学性能的影响 被引量:8
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作者 张翔 李玉宝 +1 位作者 左奕 吕国玉 《复合材料学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期72-77,共6页
采用X射线衍射、差示量热分析和常规力学性能等测试方法研究了纳米羟基磷灰石增强聚酰胺66(n-HA/PA66)复合材料在不同加工条件和后处理工艺下的结晶行为和力学性能。结果表明,提高样品的退火温度会降低纯PA66及其复合材料中PA66的结晶... 采用X射线衍射、差示量热分析和常规力学性能等测试方法研究了纳米羟基磷灰石增强聚酰胺66(n-HA/PA66)复合材料在不同加工条件和后处理工艺下的结晶行为和力学性能。结果表明,提高样品的退火温度会降低纯PA66及其复合材料中PA66的结晶峰强度。在n-HA/PA66复合材料中,基体树脂PA66的α晶体中只有α2的结晶峰存在,α1的结晶峰基本消失。提高复合材料的注射压力,PA66结晶峰的强度降低,结晶度增加;退火温度对材料的结晶度没有明显的影响。复合材料的结晶行为与其力学性能之间有着紧密的联系。 展开更多
关键词 nha/PA66 结晶行为 力学性能 注塑 退火
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多孔n-HA/PA-6复合材料的制备及性能 被引量:7
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作者 李鸿 李玉宝 +3 位作者 严永刚 王华楠 王明波 程琳 《复合材料学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第1期64-68,共5页
采用注塑方法制备了多孔纳米磷灰石/聚酰胺-6(n—HA/PA-6)复合材料,采用SEM、XRD、IR、力学性能测试考察了多孔材料的性能。结果发现:多孔纳米磷灰石/聚酰胺-6复合材料的孔隙分布均匀,贯通性良好,孔的尺寸约为100~700μm,平... 采用注塑方法制备了多孔纳米磷灰石/聚酰胺-6(n—HA/PA-6)复合材料,采用SEM、XRD、IR、力学性能测试考察了多孔材料的性能。结果发现:多孔纳米磷灰石/聚酰胺-6复合材料的孔隙分布均匀,贯通性良好,孔的尺寸约为100~700μm,平均孔径约300~500μm,大孔壁上有丰富的微孔;所得多孔复合材料的孔隙率可控,总孔隙率最高可达88.6%;多孔材料的总孔隙率降低,则开孔率随之降低;多孔纳米磷灰石/聚酰胺-6复合材料的抗压强度为1.1~15.6MPa,压缩模量为0.4~1.4GPa;在总孔隙率相近的条件下,多孔材料的抗压强度随n—HA质量分数增加而升高;发泡剂和发泡过程对组成纳米磷灰石/聚酰胺-6复合材料的两组元材料的性质和结构无影响。这种多孔材料可望作为人体非承重部位的植入骨修复体和组织工程支架使用。 展开更多
关键词 nha/PA-6复合材料 多孔材料 孔结构 孔隙率 压缩性能
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不同H9N2亚型禽流感病毒分离株致病力研究及HA抗原性变异分析 被引量:21
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作者 陈陆 刘守川 +2 位作者 赵军 王川庆 王泽霖 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第24期5100-5107,共8页
【目的】了解近年来中国H9N2亚型禽流感病毒毒力变化和抗原性变异的特点,【方法】对分离于1998—2008年间的25株H9N2亚型禽流感病毒分离株进行了EID50、ELD50、MDT、ICPI、IVPI和8周龄SPF鸡人工感染排毒试验,测定了部分分离株与抗H9N2... 【目的】了解近年来中国H9N2亚型禽流感病毒毒力变化和抗原性变异的特点,【方法】对分离于1998—2008年间的25株H9N2亚型禽流感病毒分离株进行了EID50、ELD50、MDT、ICPI、IVPI和8周龄SPF鸡人工感染排毒试验,测定了部分分离株与抗H9N2亚型禽流感病毒Hp参考株HA蛋白单抗2A4和F6的血凝抑制(HI)和中和反应特性,对具有不同反应特性分离株的HA基因进行了序列分析。【结果】不同分离株呈现致病力差异,具多态性特征,3#、12#和14#分离株致病力偏强,能引起部分SPF鸡发病和死亡,人工感染8周龄SPF鸡排毒时间更早,排毒期更长。3#和12#分离株与单抗2A4和F6呈现特殊的反应特性,单抗不能抑制3#和12#的血凝特性,也不能中和病毒感染CEF细胞。HA蛋白氨基酸序列分析表明,3#和12#分离株145位氨基酸发生漂变(S→N),导致与单抗的血凝抑制反应特性丢失,说明该位点(S145)为H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的一个抗原表位,是血凝抑制抗体结合位点。S145N的漂变导致在145—147位氨基酸多出一个糖基化位点NGT,可能是分离株毒力增强的原因。【结论】本研究结果表明,H9N2亚型禽流感病毒呈现变异趋势,出现了有致病力和抗原性变异流行毒株。S145为H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的一个抗原表位,但有该位点漂变导致的抗原变异毒株出现,并可逃避免疫作用,对该病的防控提出了新的挑战。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9n2亚型 ha蛋白 致病力 抗原变异
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H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白S145N变异株致病性及抗原特性 被引量:12
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作者 陈陆 郑鹿平 +2 位作者 赵军 王川庆 王泽霖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期82-89,共8页
为确定近年来H9N2亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白S145N点突变对病毒毒力变化和抗原性变异的影响,笔者对从全国不同地区分离的12株H9N2亚型AIV HA蛋白S145N变异株和HP疫苗参考株进行了半数鸡胚感染量(EID50)、半数鸡胚致死量(ELD50)、平均鸡... 为确定近年来H9N2亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白S145N点突变对病毒毒力变化和抗原性变异的影响,笔者对从全国不同地区分离的12株H9N2亚型AIV HA蛋白S145N变异株和HP疫苗参考株进行了半数鸡胚感染量(EID50)、半数鸡胚致死量(ELD50)、平均鸡胚致死时间(MDT)、雏鸡脑内致病指数(ICPI)、鸡静脉致病指数(IVPI)和8周龄SPF鸡感染排毒试验,并与抗H9N2亚型AIV HP参考株HA蛋白单抗2A4和F6的血凝抑制(HI)和中和反应特性进行测定。结果发现,H9N2亚型AIV HA蛋白S145N变异株毒力偏强,能引起部分SPF鸡发病和死亡,感染8周龄SPF鸡排毒时间更早,排毒期更长。单抗2A4和F6不能抑制H9N2亚型AIV HA蛋白S145N变异株的血凝特性,也不能中和病毒感染CEF细胞。研究结果表明,H9N2亚型AIV呈现变异趋势,有毒力增强和抗原性变异毒株出现。S145为H9N2亚型AIV HA蛋白的1个抗原位点,是血凝抑制抗体结合的位点,但有该位点漂变导致抗原变异毒株出现,并可逃避免疫作用。这提示该病的防控面临着新的挑战。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9n2亚型 ha蛋白 S145n 致病性 抗原变异
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新型n-HA增强复合生物材料的结构与性能 被引量:3
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作者 左奕 李玉宝 +4 位作者 张翔 杨维虎 李吉东 吕国玉 牟元华 《高分子材料科学与工程》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期212-215,共4页
在双螺杆挤出机上制备了新型纳米羟基磷灰石增强聚酰胺66/高密度聚乙烯(n-HA/PA 66/HDPE)复合生物材料,研究了不同配比复合材料的微观结构、相界面作用对力学性能和吸水性能的影响及作用机理。分析表明,通过n-HA粒子与极性PA相界面的结... 在双螺杆挤出机上制备了新型纳米羟基磷灰石增强聚酰胺66/高密度聚乙烯(n-HA/PA 66/HDPE)复合生物材料,研究了不同配比复合材料的微观结构、相界面作用对力学性能和吸水性能的影响及作用机理。分析表明,通过n-HA粒子与极性PA相界面的结合,减少了酰胺基与水分子的结合,实现了复合体系强韧性的提高和吸水率的下降。PE在PA基体中微观形态的不同导致了复合材料性能的差异,球状分布有利于材料的韧性增加,但吸水率降低很少;网状分布时,PE/PA两相间空隙较多,材料力学性能降低,但吸水率却大幅下降。 展开更多
关键词 纳米生物材料 nha增强PA66/HDPE 微观结构 力学性能 吸水率
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H1N1猪流感病毒广西分离株HA基因序列分析 被引量:3
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作者 颜健华 梁丹洁 +5 位作者 李春英 徐贤坤 胡巧云 孙翔翔 何奇松 熊毅 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1196-1200,共5页
【目的】了解H1N1猪流感病毒广西分离株的分子特征,为广西猪流感疫情监控提供参考依据。【方法】采用RT-PCR对2011年分离获得的H1N1猪流感病毒广西分离株(A/swine/Guangxi/1/2011)的HA基因进行扩增,然后利用DNASTAR分析软件对测序基... 【目的】了解H1N1猪流感病毒广西分离株的分子特征,为广西猪流感疫情监控提供参考依据。【方法】采用RT-PCR对2011年分离获得的H1N1猪流感病毒广西分离株(A/swine/Guangxi/1/2011)的HA基因进行扩增,然后利用DNASTAR分析软件对测序基因片段进行整个阅读框架的核苷酸序列及其推导氨基酸序列同源性比对分析,并用MEGA4.0绘制遗传进化树。【结果】广西分离株HA基因长1701bp,编码566个氨基酸,核苷酸序列与经典SIV的同源性为88.0%~99.6%,与季节性H1N1人流感病毒的同源性为76.3%~77.3%,与欧洲类禽SIV分离株的同源性为72.9%~75.4%,与2009甲型H1N1流感病毒的同源性为99.2%~99.6%;从核苷酸遗传进化树可知,广西分离株与类禽H1N1流感病毒和人H1N1流感病毒分离株的亲缘关系较远,而与2009甲型H1N1流感病毒分离株的亲缘关系最近。广西分离毒株HA基因的裂解位点序列为IPSIQSR↓G,具有典型低致病性流感病毒的分子生物学特征;共有8个糖基化位点,其中6个位于HAl区,两个位于HA2区;广西分离株HA蛋白RBS位点的氨基酸同时具有人和猪流感病毒的特点。【结论】广西分离株(A/swine/Guangxi/1/2011)属于2009甲型H1N1流感病毒。 展开更多
关键词 猪流感病毒 甲型H1n1流感病毒 ha基因 序列分析 同源性
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HA基因322位和329位氨基酸对H5N1亚型禽流感病毒毒力的影响 被引量:7
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作者 唐应华 吴培培 +7 位作者 孙庆 彭大新 张文俊 李彦芳 汪文斌 龙进学 张评浒 刘秀梵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期340-344,共5页
A/mallard/Huadong/S/2005(S,IVPI=2.65)和A/mallard/Huadong/Y/2003(Y,IVPI=0),是对麻鸭具有不同致病力的病毒。两病毒的HA裂解位点区有2个氨基酸差异,S病毒在HA裂解位点区322是Leu(L322),329位缺失(-329),而Y病毒322位是Gln(Q322),32... A/mallard/Huadong/S/2005(S,IVPI=2.65)和A/mallard/Huadong/Y/2003(Y,IVPI=0),是对麻鸭具有不同致病力的病毒。两病毒的HA裂解位点区有2个氨基酸差异,S病毒在HA裂解位点区322是Leu(L322),329位缺失(-329),而Y病毒322位是Gln(Q322),329位是Lys(K329)。根据这两个位点的差异,利用反向遗传系统,以S和Y病毒各自为骨架,拯救HA基因突变病毒,检测获救的突变病毒对麻鸭的毒力。可以得知,以S病毒为骨架,将S病毒HA基因322位Leu替换为Gln和(或)在329位添加Lys,以及用Y病毒的HA(Q322L,K329-)替换S病毒HA,获救的重组病毒对麻鸭亦完全无致病力;但以Y病毒为骨架,将Y病毒HA基因322位Gln替换为Leu和(或)在329位缺失Lys后,Y重组病毒对麻鸭的毒力上升。结果提示,S和Y病毒HA基因裂解位点区322和329氨基酸残基突变或缺失均影响病毒对麻鸭的致病力,且HA基因与其它基因的匹配性显著影响病毒对麻鸭的致病力。 展开更多
关键词 H5n1 ha基因 麻鸭 反向遗传 致病力
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2013年苏皖地区4株H9N2亚型禽流感病毒HA,NA基因的遗传演化分析 被引量:8
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作者 杨婧 刘宇卓 +3 位作者 赵冬敏 黄欣梅 韩凯凯 李银 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第11期1896-1902,共7页
为了解2013年苏皖地区H9N2亚型禽流感病毒的变异情况,选取2013年所分离的4个H9N2亚型禽流感病毒株,对其HA和NA基因进行测序,并应用DNAStar和Mega生物软件拼接序列和建立进化树。结果表明,4株H9N2的HA裂解位点氨基酸均为-R(K)SSR/GL-,具... 为了解2013年苏皖地区H9N2亚型禽流感病毒的变异情况,选取2013年所分离的4个H9N2亚型禽流感病毒株,对其HA和NA基因进行测序,并应用DNAStar和Mega生物软件拼接序列和建立进化树。结果表明,4株H9N2的HA裂解位点氨基酸均为-R(K)SSR/GL-,具有典型低致病性禽流感病毒HA基因的特征;但其226位氨基酸均为亮氨酸(L),呈现出人流感受体结合特性。4株病毒NA基因颈部均有9个核苷酸的缺失,且NA潜在糖基化位点数量不超过8个。进化树分析表明,2013年苏皖地区H9N2流行毒株HA和NA基因发生变异,且变异与时间呈现一定的相关性,与地域无关。 展开更多
关键词 H9n2 ha nA 遗传演化分析
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禽流感病毒A/Chicken/Guangdong/SS/94(H_9N_2)HA基因的克隆及序列分析 被引量:12
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作者 郭霄峰 廖明 +1 位作者 辛朝安 程小雯 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期80-81,共2页
RT-PCR was employed to amplify the cDNA of HA gene of influenza A/Chicken/Guangdong/SS/94(H 9N 2)with a pair of degenerate primers and the cDNA were cloned into the T-T windows of plasmid pMD18-T.The inserts were sequ... RT-PCR was employed to amplify the cDNA of HA gene of influenza A/Chicken/Guangdong/SS/94(H 9N 2)with a pair of degenerate primers and the cDNA were cloned into the T-T windows of plasmid pMD18-T.The inserts were sequenced,at first time,and the results revealed that the HA gene had a long complete open reading frame and composed of 1,683 nucleotides,coding for 560 amino acids.The amino acid sequences of the HA connecting peptide revealed that A/Chicken/Guangdong/SS/94(H 9N 2)had X-X-X-R(X,not basic amino acid)at the proteolytic cleavage site.The molecular basis of the HA gene was compatible with not highly pathogenicity.Comparison of the degree of homology of HA gene showed 82%-98% nucleotide sequence and amino acid sequence homology among the isolate and the other H 9N 2 subtype AIV in GenBank. Thus, the HA gene of influenza A/Chicken/Guangdong/SS/94 belonged to H 9 subtype. 展开更多
关键词 H9n2亚型 禽流感病毒 ha基因 序列分析 基因克隆
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禽流感病毒KMI/99(H9N2)HA和NA基因的序列分析 被引量:22
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作者 郭霄峰 廖明 辛朝安 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期486-491,共6页
研究分别以自行设计的一对简并引物和另一对普通引物 ,经RT PCR ,一次性成功地扩增禽流感病毒A/Chicken/Guangxi/KMI/99(H9N2 )HA全长基因cDNA和NA全长基因cDNA ,并将它们克隆于 pGEM TEasy的T T窗口。首次报道了该毒株的HA全基因和NA... 研究分别以自行设计的一对简并引物和另一对普通引物 ,经RT PCR ,一次性成功地扩增禽流感病毒A/Chicken/Guangxi/KMI/99(H9N2 )HA全长基因cDNA和NA全长基因cDNA ,并将它们克隆于 pGEM TEasy的T T窗口。首次报道了该毒株的HA全基因和NA全基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列。测序结果显示 ,该毒株的HA基因全长为 16 83bp ,编码 5 6 0个氨基酸。NA全长为 1398bp ,编码 46 6个氨基酸残基。研究发现其HAI羧基端的分子特征是 :R S S R。从分子水平推论 :A/Chicken/Guangxi/KMI/99(H9N2 )属于非高致病力毒株。研究还发现NA蛋白于 6 3— 6 5位缺失了T、E、I三个氨基酸。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9n2亚型 ha基因 nA基因 序列分析
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