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以纳米金为报告系统的病原体快速检测基因芯片的研制 被引量:5
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作者 顾大勇 鲁卫平 +1 位作者 王华 周元国 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期143-147,共5页
目的结合纳米放大芯片检测的专利技术,设计并制作适用于病原体快速检测的实用型基因芯片,以实现对临床常见感染病原体的快速、准确地检测和鉴定。方法分别针对各待检靶病原体特异性基因片段设计探针、构建芯片,并以纳米金为报告分子标... 目的结合纳米放大芯片检测的专利技术,设计并制作适用于病原体快速检测的实用型基因芯片,以实现对临床常见感染病原体的快速、准确地检测和鉴定。方法分别针对各待检靶病原体特异性基因片段设计探针、构建芯片,并以纳米金为报告分子标志靶序列,通过杂交后与银的反应使得信号被放大,形成裸眼可见的褐色颗粒,从而实现芯片的检测。结果设计的探针具有很好的特异性、准确性和杂交条件的同一性;适当增加纳米金/核酸的比例能够减少标志时间,而轻微振荡明显加快标志反应的速度;在45℃杂交温度下,杂交反应盐离子浓度为0.8mol/L,杂交反应时间为8h,最后经过严格条件漂洗可以获得较佳的杂交效率,而轻微的旋转振荡则可以显著增加杂交的效率;37℃,3min×3的反应方式,可以获得较好的银染效果;本芯片系统具有较好的检测敏感性,可达到100fmol/L;与临床常规检测方法比,本芯片检测方法简单快捷,检测结果裸眼清晰可见,背景低。结论本芯片检测方法敏感性高,特异性好,操作方法简单,无需特殊设备,所设计的检测内容达到实用化水平,具有较好的临床应用前景。 展开更多
关键词 纳米金 基因芯片 病原体
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胶体金标记/银染信号放大法在寡核苷酸芯片检测人HCM突变中的应用 被引量:6
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作者 朱前勇 李志 +4 位作者 陶生策 王栋 焦文仓 史常旭 梁志清 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第19期1729-1731,共3页
目的 验证胶体金标记 /银染信号放大法在寡核苷酸芯片检测人肥厚型心肌病 (HCM )基因突变中对单碱基错配的灵敏性和特异性。方法 不对称PCR扩增、生物素标记待检测的人 β 肌凝蛋白重链基因片断 ,与构建的低密度HCM寡核苷酸芯片杂交 ... 目的 验证胶体金标记 /银染信号放大法在寡核苷酸芯片检测人肥厚型心肌病 (HCM )基因突变中对单碱基错配的灵敏性和特异性。方法 不对称PCR扩增、生物素标记待检测的人 β 肌凝蛋白重链基因片断 ,与构建的低密度HCM寡核苷酸芯片杂交 ,胶体金标记 /银染放大法检测 7种HCM恶性突变位点 ,观察胶体金标记 /银染信号放大法对单碱基错配形式的判别率。结果 胶体金标记 /银染信号放大法在寡核苷酸芯片中的单硝基突变的平均判别率为 16 2 ,可以鉴别所有的单碱基错配和三碱基缺失。结论 胶体金标记 /银染信号放大法代替荧光标记法用于寡核苷酸芯片靶标分子的标记和结果检测 ,可以区分所有的单碱基错配形式 ,实现了芯片杂交结果的普通光学显微镜检测 ,提高了DNA芯片的实用性。 展开更多
关键词 寡核苷酸芯片 突变检测 胶体金标记/银染放大 原发性肥厚型心肌病
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纳米金标记-逐步银染法快速检测金黄色葡萄球菌 被引量:5
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作者 刘小兰 齐天琪 +1 位作者 林婷 徐克前 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期671-676,共6页
将纳米金探针应用于目的核酸的检测,具有与PCR相当的灵敏度和特异性.本研究建立了一种可以在微孔板上快速检测金黄色葡萄球菌的纳米金标记-逐步银染法.该方法利用已包被链霉亲和素的微孔板,将PCR扩增的金黄色葡萄球菌nuc基因与生物素探... 将纳米金探针应用于目的核酸的检测,具有与PCR相当的灵敏度和特异性.本研究建立了一种可以在微孔板上快速检测金黄色葡萄球菌的纳米金标记-逐步银染法.该方法利用已包被链霉亲和素的微孔板,将PCR扩增的金黄色葡萄球菌nuc基因与生物素探针、纳米金探针形成的三明治杂交结构锚定其上,然后在低温下逐步银染显色,通过酶标仪检测放大的银染信号.这种纳米金标记-逐步银染法可以在显著降低非特异性背景信号的同时放大银染信号,检测金黄色葡萄球菌nuc基因的灵敏度为1 pmol/L,比常温一步银染法的灵敏度提高约102倍.51例临床标本的检测结果与PCR法一致,与培养生化鉴定法的检测结果之间无显著性差异(P>0.05).综上所述,本研究成功构建了金黄色葡萄球菌的纳米金标记-逐步银染法,在病原微生物的快速检测领域表现出广阔的发展潜力. 展开更多
关键词 纳米金 逐步银染 金黄色葡萄球菌
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包埋前ABC法和纳米金-银加强法双重标记技术在免疫电镜中的应用 被引量:3
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作者 刘津平 贾轶 +1 位作者 刘莹莹 鞠躬 《中国神经科学杂志》 CSCD 2002年第4期728-731,共4页
应用包埋前ABC法和纳米金 银加强法免疫双重标记技术 ,电镜观察GABA能抑制性突触传递与呼吸节律产生中枢pre B tzinger复合体神经激肽 1受体 (neurokinin 1receptor,NK1R)免疫反应神经元的关系 ,目的在于介绍一种简单、实用的包埋前免... 应用包埋前ABC法和纳米金 银加强法免疫双重标记技术 ,电镜观察GABA能抑制性突触传递与呼吸节律产生中枢pre B tzinger复合体神经激肽 1受体 (neurokinin 1receptor,NK1R)免疫反应神经元的关系 ,目的在于介绍一种简单、实用的包埋前免疫电镜双重标记技术 ,及其在神经生物学领域的应用。高电子密度的DAB免疫反应产物标记谷氨酸脱羧酶 (glutamicaciddecarboxylase,GAD)免疫反应神经末梢 ,免疫金颗粒主要标记pre B tzinger复合体NK1R免疫反应神经元胞体或树突的膜表面 ,有时胞质内也可见到免疫金颗粒标记。GAD免疫反应神经末梢与NK1R免疫反应神经元胞体或树突形成典型的对称性突触。这种包埋前免疫电镜双重标记技术具有以下优点 :1.包埋前实现免疫组化双重标记有利于组织抗原性的保存。 2 .有利于抗体的组织内渗透。 3.免疫金颗粒抗原定位精确 ,并可用于定量分析。 展开更多
关键词 纳米金-银加强法 ABC法 免疫电镜 pre-Poetzinger复合体
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纳米金-银加强法对大鼠和猴脊髓后角内P物质定位的实验研究 被引量:1
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作者 林英华 朱俊玲 张旭 《电子显微学报》 CAS CSCD 1998年第3期285-290,共6页
包埋前纳米金-银加强法已较广泛地应用于对神经递质和受体的超微定位研究,被证明是一种敏感和高分辨率的方法。P物质是在脊髓后角内十分丰富的一种神经肽,我们应用这一技术研究P物质的定位时,发现当大致密芯泡的泡芯密度高时,其... 包埋前纳米金-银加强法已较广泛地应用于对神经递质和受体的超微定位研究,被证明是一种敏感和高分辨率的方法。P物质是在脊髓后角内十分丰富的一种神经肽,我们应用这一技术研究P物质的定位时,发现当大致密芯泡的泡芯密度高时,其内的神经肽无法被纳米金-银颗粒标记,只在泡膜附近有金-银颗粒标记,这一现象在猴的脊髓后角神经终末中尤为明显。虽然这个缺点不影响研究含这种神经肽的神经终末与其它结构的关系,但据此结果来阐明神经肽的亚细胞定位是不可靠的。 展开更多
关键词 免疫组织化学 超微结构 神经肽
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纳米金-银加强法对骨髓微环境中Nkx2-5^+细胞定位的实验研究 被引量:1
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作者 于红丽 徐志伟 +1 位作者 张中明 董红燕 《徐州医学院学报》 CAS 2006年第4期296-298,共3页
目的应用包埋前纳米金-银加强法,电镜观察骨髓微环境中Nkx2-5+细胞并进行形态学分析。方法取BALB/c小鼠双后肢胫骨,脱钙后行冰冻切片,利用1.4 nm超微纳金颗粒标记骨髓纵切面Nkx2-5+的细胞,通过银加强使金颗粒增大,Epon 812树脂包埋,常... 目的应用包埋前纳米金-银加强法,电镜观察骨髓微环境中Nkx2-5+细胞并进行形态学分析。方法取BALB/c小鼠双后肢胫骨,脱钙后行冰冻切片,利用1.4 nm超微纳金颗粒标记骨髓纵切面Nkx2-5+的细胞,通过银加强使金颗粒增大,Epon 812树脂包埋,常规超薄切片,电镜下观察。结果免疫金颗粒主要标记Nkx2-5+细胞的胞质,极少数胞核也可见到免疫金颗粒。免疫金颗粒标记细胞均为体积较大的骨髓单核细胞,偶见双核细胞。结论包埋前纳米金-银加强法除可应用于神经系统的研究外,也可应用于骨髓微环境中抗原的精确定位。 展开更多
关键词 纳米金-银加强法 NKX2-5 骨髓微环境
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纳米金标记-银染信号放大快速检测福氏志贺氏菌 被引量:3
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作者 李向丽 谭贵良 +2 位作者 袁秀金 陈亚波 江迎鸿 《现代食品科技》 EI CAS 2011年第11期1387-1392,1362,共7页
采用纳米金标记结合银染信号放大技术建立了检测福氏志贺氏菌的新方法。优化了酶标板包被亲和素使用浓度以及分子杂交和化学发光检测实验条件。结果表明,化学发光法比吸光度法检测灵敏度高15倍,通过银染信号增强后,化学发光检测目标菌DN... 采用纳米金标记结合银染信号放大技术建立了检测福氏志贺氏菌的新方法。优化了酶标板包被亲和素使用浓度以及分子杂交和化学发光检测实验条件。结果表明,化学发光法比吸光度法检测灵敏度高15倍,通过银染信号增强后,化学发光检测目标菌DNA的检测限达2 fmol/L,相对化学发光强度与目标菌DNA浓度在5~1000 fmol/L范围内呈良好的线性关系,相对标准偏差RSD为4.2%。 展开更多
关键词 纳米金 银染 杂交 化学发光 福氏志贺氏菌
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纳米金标记基因芯片技术的优化
8
作者 郑志伟 常弘 +4 位作者 党华 张国萍 肖白玉 杨登亮 钟惟德 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期159-164,共6页
为了建立稳定的纳米金标记基因芯片技术,对点样液,预杂交,纳米金浓度,银染时间等进行了优化,并研究了该芯片方法的灵敏度。结果表明,使用50%DMSO作为点样液效果最好,预杂交会导致杂交信号降低70%,银染时间控制在15 min时候显色清晰且背... 为了建立稳定的纳米金标记基因芯片技术,对点样液,预杂交,纳米金浓度,银染时间等进行了优化,并研究了该芯片方法的灵敏度。结果表明,使用50%DMSO作为点样液效果最好,预杂交会导致杂交信号降低70%,银染时间控制在15 min时候显色清晰且背景较低。该检测方法的灵敏度可达到80 fmol/L,可望在芯片检测领域得到更多的应用。 展开更多
关键词 纳米金 生物素 链酶亲和素 寡核苷酸 银染显色
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Application of Nanogoid Probe Coupled with Silver Enhancement in Rapid cTnI Colorimetric Immunoassay
9
作者 Nong Yue HE Hui Shi GUO +4 位作者 Di YANG Chun Rong GU Zhi Ping BIAN Wen Hui WAN Ji Nan ZHANG 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2005年第12期1625-1628,共4页
A rapid, inexpensive, reliable, and flexible quantitative immunoassay for cardiac troponin I (cTnI) based on the concepts of one-step dual monoclonal antibody “sandwich” principle. The low density protein array, t... A rapid, inexpensive, reliable, and flexible quantitative immunoassay for cardiac troponin I (cTnI) based on the concepts of one-step dual monoclonal antibody “sandwich” principle. The low density protein array, the nanogold probe, and the silver enhancement on the gold particle were provided. The whole detection procedure of the assay could be fulfilled within 40 min with the pretreated colloidal gold-labeled detection antibody and supporting substrate. The assay showed good specific response to cTnI with very low cross-reactivity ratio to the skeletal isoforms of troponin I (sTnI), cardiac troponin T (cTnT), and myoglobin. 588 serum samples were assayed simultaneously by enzyme-linked immuno sorbent assay (ELISA) and this colloidal gold method to test the validity of the method and the data were analyzed using the statistical package SPSS version 11.0 (SPSS Inc.). There was no significant difference between these two assays (P=0.66〉0.05). The agreement between this method (〉 or 〈0.3 ng/mL) and ELISA was 86%. 展开更多
关键词 Cardiac troponin I protein array nanogold particles silver enhancement rapidquantitative immunoassay
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纳米金标记银染增强法快速检测淋病奈瑟球菌
10
作者 曾俊萍 邱德稳 刘佳 《中国医药指南》 2024年第22期14-17,共4页
目的建立一种可以在微孔板上快速检测淋病奈瑟球菌的纳米金标记银染增强法。方法以淋病奈瑟球菌的16S rRNA基因为靶基因,分别与纳米金巯基探针、生物素探针杂交,形成三明治杂交结构,然后借链酶亲和素将靶基因锚定在微孔内,通过纳米金催... 目的建立一种可以在微孔板上快速检测淋病奈瑟球菌的纳米金标记银染增强法。方法以淋病奈瑟球菌的16S rRNA基因为靶基因,分别与纳米金巯基探针、生物素探针杂交,形成三明治杂交结构,然后借链酶亲和素将靶基因锚定在微孔内,通过纳米金催化的银染放大效应产生高灵敏的识别信号,在酶标仪上检测其吸光度值。将该方法与培养法、PCR法同时对105份疑似淋病患者泌尿生殖道标本进行对比。结果纳米金标记银染增强法最低检测限为1 pmol/L,105份标本淋病奈瑟球菌的检测率与PCR法一致,均为36.19%(38/105),培养法的检出率为33.33%(35/105),差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建的纳米金标记银染增强方法,可快速检测临床疑似淋病患者泌尿生殖道标本,具有简便快速、灵敏度高、特异性强、检测成本低等优点。 展开更多
关键词 淋病奈瑟球菌 纳米金 银染增强
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基于胶体金标记银增强的日本血吸虫免疫传感器 被引量:2
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作者 张阳德 李玲玲 +2 位作者 潘一峰 陈玉祥 赵劲风 《科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期33-36,共4页
提出一种高灵敏的、基于银增强放大和免疫胶体金技术压电石英晶体免疫传感器。采用夹心法模式,在电极表面固定日本血吸虫抗原,用以捕获血清中的日本血吸虫兔抗血吸虫抗体,再与胶体金标记的羊抗兔IgG二抗形成免疫复合物,加入银增强溶液,... 提出一种高灵敏的、基于银增强放大和免疫胶体金技术压电石英晶体免疫传感器。采用夹心法模式,在电极表面固定日本血吸虫抗原,用以捕获血清中的日本血吸虫兔抗血吸虫抗体,再与胶体金标记的羊抗兔IgG二抗形成免疫复合物,加入银增强溶液,通过胶体金催化银离子还原,使大量银沉积在纳米金周围,提高压电石英晶体免疫传感器的灵敏度。结果表明,基于胶体金标记银增强的日本血吸虫压电石英晶体免疫传感器,对兔抗血吸虫抗体具有较高的识别能力,其操作简单、灵敏度高、线性范围宽、检测下限低。将该方法应用于兔血清中日本血吸虫抗体的测定,取得了满意结果。 展开更多
关键词 日本血吸虫 胶体金 银增强 免疫传感器
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金标记银增强方法检测HIV抗体的蛋白质微阵列 被引量:4
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作者 逄键涛 张敏丽 +1 位作者 文思远 王升启 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2005年第3期223-226,共4页
目的:采用金标记银增强技术制备检测抗HIV病毒P24、gp41、gp36、gp120蛋白抗体的蛋白质微阵列。方法:将上述抗原片段固定在醛基化玻片上,制成了能够检测多种抗体的蛋白质微阵列,同时研究了金标记银增强技术用于蛋白质微阵列检测的方法... 目的:采用金标记银增强技术制备检测抗HIV病毒P24、gp41、gp36、gp120蛋白抗体的蛋白质微阵列。方法:将上述抗原片段固定在醛基化玻片上,制成了能够检测多种抗体的蛋白质微阵列,同时研究了金标记银增强技术用于蛋白质微阵列检测的方法学基础。结果:采用金银染色方法的蛋白质微阵列能够准确而灵敏地检测抗HIV不同抗原的抗体。该方法被引入应用到蛋白质微阵列检测中,可以通过光学显微镜或凭肉眼观察定性结果,仅使用普通的CCD数字照像机或CCD扫描仪就可以对信号进行采集。结论:与传统的荧光标记方法相比,金标记银增强方法的灵敏度相当,而且成本低、信号稳定、操作简便,将是前者的一种通用替代方法。 展开更多
关键词 金标记银增强 蛋白质微阵列 HIV抗体
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纳米金基因芯片表面原子排列构象的形貌研究
13
作者 顾大勇 梁冰 +3 位作者 禹华伟 鲁卫平 周元国 张雅鸥 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1214-1217,共4页
我们利用基于扫描隧道显微镜的原子力显微镜对纳米金基因芯片在不同检测阶段表面原子排列构象的变化状况进行扫描研究。结果显示芯片片基(醛基玻片)表面原子呈现规律的多孔状排列;结合探针后,多孔状的规律排列改变,呈现参差不齐;与目标... 我们利用基于扫描隧道显微镜的原子力显微镜对纳米金基因芯片在不同检测阶段表面原子排列构象的变化状况进行扫描研究。结果显示芯片片基(醛基玻片)表面原子呈现规律的多孔状排列;结合探针后,多孔状的规律排列改变,呈现参差不齐;与目标核酸杂交后,表面原子又呈现出相对规整的、密集交叉平行的条索状排列。但银染后导致表面原子出现较大的高突起的聚团块状结构,排列严重的参差不齐。从这些结果我们可以直观地感知到芯片表面探针结合、核酸杂交、银染显色的过程和差异,也可以从微观层面上对相关的实验进行验证。 展开更多
关键词 纳米金 基因芯片 原子力显微镜 扫描隧道显微镜
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