UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap HRMS法鉴定隔山消提取物在功能性消化不良大鼠体内代谢产物

目的建立UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap HRMS法鉴定隔山消提取物在功能性消化不良大鼠体内代谢产物。方法建立功能性消化不良大鼠模型。分析采用Hypersi 1 GOLD C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9μm);流动相水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;正负离子扫描。结果共鉴定出4种原型成分(白首乌二苯酮、去酰基萝藦苷元、青阳参苷元、丁香酸)及其110种代谢产物,其中粪便、尿液共有代谢产物12种,尿液特有代谢产物56种,粪便特有代谢产物42种。原型成分代谢途径包括Ⅰ相代谢(氧化、还原等)、Ⅱ相代谢(硫酸化、葡萄糖醛酸化等)及Ⅰ相、Ⅱ相复合反应。结论该方法高效全面,可为进一步寻找隔山消潜在活性代谢产物奠定基础。

基于UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap HRMS高分辨质谱技术的隔山消提取物化学成分分析

目的:采用UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap高分辨质谱(HRMS)技术建立全面、快速分析隔山消化学成分的方法,为隔山消的药效物质研究提供科学依据。方法:采用Hypersi 1 GOLD色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温40℃。在电喷雾离子源正、负离子模式下采集数据,扫描范围m/z 100~1500 Da;喷雾电压3.5 kV(+),2.5 kV(-);鞘气流速35 arb;辅助气流速10 arb;毛细管温度320℃;辅助加热器温度350℃。依据HRMS提供的准分子离子峰及碎片离子的精确分子质量信息,结合对照品比对,相关文献报道及m/z Cloud和PUBchem数据库比对二级质谱进行鉴定。结果:从隔山消提取物中共分析出66个化合物,包括C21甾体类34个,有机酸类13个,苯乙酮类5个,香豆素类4个,生物碱类4个和其他类6个化合物,其中18个化合物为首次在隔山消中报道。结论:该方法可对隔山消化学成分进行快速、准确、全面的定性分析,为今后进一步阐明其药效物质基础和质量控制提供科学依据。

基于UHPLC Q-Exactive Orbitrap MS^(n)和分子网络技术快速鉴定吴茱萸汤中化学成分

《伤寒论》名方吴茱萸汤是首批《古代经典名方目录》收载品种,全方由吴茱萸、人参、生姜、大枣4味药组成,具有温中补虚、散寒降逆之功,临床应用广泛,疗效显著。经典名方化学组成是其物质基准和量值传递的重要前提,该研究旨在建立高分辨质谱(HR-MS)和分子网络整合的快速分析经典名方吴茱萸汤中化学成分的方法。采用AQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱。分别在正、负离子模式下,采集Q-Exactive Orbitrap MS数据,根据MS/MS碎片模式的相似性创建GNPS分子网络,运用Cytoscape 3.6.1软件筛选结构相似的分子簇,最后根据对照品比对,并结合保留时间信息、高分辨质谱精确相对分子质量和MS/MS碎片信息对吴茱萸汤中化学成分进行快速准确鉴定。在吴茱萸汤中共鉴定出105种化学成分。该研究可为经典名方吴茱萸汤进一步的质量控制、基准物质研究以及药效物质研究等提供参考数据,同时也为中药化学成分的快速定性分析提供借鉴。

基于超高效液相色谱/四极杆-静电场轨道阱质谱联合网络药理学筛选“芩百清肺浓缩丸”治疗肺炎的活性成分

为筛选中药地龙在芩百清肺浓缩丸治疗肺炎时贡献的活性成分,本研究在开展细胞实验证实芩百清肺浓缩丸抗炎作用的基础上,采用超高效液相色谱/四极杆-静电场轨道阱质谱(UHPLC/Q-Exactive Orbitrap MS)法检测有、无地龙的芩百清肺浓缩丸提取液,借助Compound Discoverer软件筛选差异离子,根据二级质谱数据及标准品鉴定差异成分,进一步开展差异成分治疗肺炎的网络药理学研究,预测活性成分与靶点,并通过分子对接与实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术验证活性成分与靶点。结果表明,芩百清肺浓缩丸可通过降低细胞炎症因子IL6、IL-1b,趋化因子CXCL2和CXCR2的表达发挥抗炎活性,通过液相色谱-质谱筛选得到了15个差异成分,网络药理预测得到7个潜在活性成分及22个核心靶点,其中α-亚麻酸和腺苷经分子对接及RTqPCR实验验证为地龙在芩百清肺浓缩丸治疗肺炎时贡献的活性成分。该方法为筛选中药复方中组方药材贡献活性成分提供了参考,为中药复方活性成分研究提供了思路。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap/MS的桔梗汤治疗小鼠急性肺损伤的磷脂组学研究

采用基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap/MS的脂质组学方法,分析脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury, ALI)模型小鼠的肺组织磷脂代谢的变化,观察桔梗汤对异常脂质的调节,探究桔梗汤对LPS诱导的ALI的调节作用。分别采集空白对照组、ALI模型组、地塞米松(阳性药)组、桔梗汤组小鼠的肺组织样本,实验方案经南京中医药大学实验动物伦理委员会批准实施,提取其脂质成分,采用UHPLC-Q-ExactiveOrbitrap/MS脂质组学技术研究各组肺组织磷脂的变化。LPS诱导的ALI小鼠磷脂出现代谢异常,具体表现为磷脂酰胆碱(PC)类脂质出现明显的上调,磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)等脂质出现代谢紊乱,桔梗汤对这些变化磷脂具有一定的回调作用。LPS诱导的ALI引起体内磷脂紊乱,桔梗汤对代谢紊乱的磷脂具有调控作用。

断血流胶囊化学成分、色谱指纹图谱及含量测定的研究

目的建立断血流胶囊高效液相色谱(HPLC)指纹图谱及多成分含量测定方法,为其质量评价提供参考。方法基于纳升高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱超高分辨质谱(Q-Exactive Plus Orbitrap MS)技术分析断血流胶囊化学成分;采用HPLC法,建立12批断血流胶囊样品HPLC指纹图谱,以《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)评价指纹图谱相似度,并结合主成分分析(PCA)及偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)筛选差异标志物;同时测定没食子酸、木犀草素和醉鱼草皂苷Ⅳb含量。结果从断血流胶囊中鉴定出36个成分。12批样品确定26个共有峰,相似度均大于0.90;指认了没食子酸、芦丁、橙皮苷、槲皮素、木犀草素和醉鱼草皂苷Ⅳb 6个共有峰;12批样品按不同生产厂家可分为3类,筛选出木犀草素、峰21、醉鱼草皂苷Ⅳb为差异标志物。12批样品中没食子酸、木犀草素、醉鱼草皂苷Ⅳb质量分数范围分别为0.17~1.24 mg·g^(-1)、0.54~1.27 mg·g^(-1)、16.41~20.98 mg·g^(-1)。各成分的线性关系良好(r≥0.9998),平均回收率为99.6%~100.6%。结论明确了断血流胶囊的化学成分,所建立的HPLC指纹图谱及多成分含量测定方法稳定、可靠,可为断血流胶囊的质量评价提供依据。

基于序贯代谢的五味子入血及脑脊液成分分析

目的:基于序贯代谢方法,结合液质联用技术鉴定五味子入血和入脑脊液原型成分和代谢产物。方法:雄性SD大鼠在灌胃给药和在体肠灌流给药后收集其综合代谢、肠代谢、肝代谢血浆和脑脊液样品,利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC Q-Exactive Orbitrap MS)分析并比对五味子提取液、空白血浆、含药血浆、空白脑脊液、含药脑脊液样品谱图差异,采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~7 min,95%B;7~12 min,95%~35%B;12~17 min,35%~15%B;17~20 min,15%~12%B;20~22 min,12%~5%B;22~23 min,5%B;23~25 min,5%~95%B;25~28 min,95%B),加热电喷雾离子化源(HESI),正、负离子检测模式,扫描范围m/z 100~1500。根据化合物的保留时间、特征碎片、分子式及对照品信息鉴定五味子入血及脑脊液的原型成分和代谢产物。结果:从五味子提取物中共鉴定出42个化学成分,包含木脂素、黄酮、氨基酸、鞣质等化合物,其中以木脂素类化合物为主。从不同部位获取的血浆样品中共鉴定出27种原型入血成分与14种代谢产物;在脑脊液中共鉴定出15种原型成分和9种代谢产物;代谢产物生成过程中涉及的代谢反应主要有去甲基化、甲基化、去甲氧基化和羟基化等。结论:通过对五味子在大鼠体内的原型成分与代谢产物的系统鉴定,为后续更好地挖掘五味子中治疗中枢神经系统疾病的药效物质基础提供了数据支撑。

异欧前胡素在大鼠体内代谢产物的UHPLC-HRMS鉴定分析

目的分析鉴定异欧前胡素在正常大鼠体内的代谢产物。方法大鼠灌胃给药后,收集正常组和给药组大鼠的血浆、尿液和粪便样本,并以固相萃取柱提纯生物样品。采用UHPLC-HRMS(Q-Exactive Orbitrap MS)高分辨质谱对生物样品进行分析,并对代谢产物筛选鉴定。结果在正、负离子模式下,根据所获得的精确分子质量、色谱保留行为、质谱裂解规律、特征碎片离子、对照品比对以及文献报道,最终分析鉴定了32个代谢产物。其代谢途径主要包括呋喃环开环、内酯水解、氧化、甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化以及它们的复合反应。其中,葡萄糖醛酸化产物为首次发现。结论本研究较为全面地阐明了异欧前胡素在正常大鼠体内的代谢转化情况,可为其进一步的药效学研究提供依据,并为呋喃香豆素类物质的代谢产物分析提供借鉴。