柚皮素铜、锌配合物的制备及其对大鼠实验性脉络膜新生血管的抑制作用

目的制备柚皮素铜、锌配合物,比较配合物与柚皮素对大鼠激光诱发脉络膜新生血管(CNV)的抑制作用。方法以柚皮素为配体与铜、锌金属离子分别在甲醇、乙醇溶液中配位,合成柚皮素铜、锌配合物,对配合物进行元素分析,利用红外、紫外光谱对配合物进行表征。采用氪激光制作大鼠CNV模型,模型动物随机分为溶媒对照组、柚皮素组及柚皮素铜、锌配合物4组,每组5只。视网膜光凝后开始给药,给药剂量:20mg/(kg·d),溶媒对照组给等体积的二甲基亚砜(DMSO)。腹腔注射给药,每日1次,连续4周。给药后4周进行荧光素异硫氰酸酯葡聚糖(FITC-D)食下静脉注射,用脉络膜铺片法测量CNV面积。结果柚皮素与铜、锌金属离子形成了稳定的配合物。实验动物CNV面积(×103)测定:溶媒对照组(34.56±1.67)μm2、柚皮素组(20.90±1.47)μm2、柚皮素铜配合物组(13.24±1.33)μm2、柚皮素锌配合物组(13.0±1.28)μm2。柚皮素及其铜、锌配合物组CNV面积明显小于溶媒对照组(P<0.05,P<0.01),柚皮素铜、锌配合物组则小于柚皮素组,(P<0.05)。结论柚皮素与铜、锌金属离子形成配合物后,生物活性显著增加,抑制模型大鼠CNV的作用强于柚皮素。

柚皮铜配合物对激光诱发大鼠脉络膜新生血管形成的抑制作用

目的:观察柚皮铜配合物对激光诱发大鼠脉络膜新生血管形成的抑制作用。方法:选取雄性Brown-Norway大鼠24只,其中18只建立大鼠脉络膜新生血管模型,6只12眼作正常对照。动物模型随机分为模型对照组和2个不同给药实验组,每组6只。模型建立后,实验组大鼠腹腔注射同等剂量的柚皮素、柚皮铜配合物[20mg/(kg·d)],对照组不给药。于造模后30d取各组视网膜-脉络膜-巩膜复合体标本,在荧光显微镜下观察脉络膜新生血管的面积,采集各组大鼠的脉络膜标本,采用RT-PCR及Western blot方法检测各组大鼠脉络膜组织中VEGF、COX-2、PI3K、MAPK、MMP-2、MMP-9mRNA与蛋白的表达。结果:与模型对照组相比,各实验组大鼠新生血管面积均减少,但柚皮铜配合物组较柚皮素组更明显,差异均具有显著统计学意义(P<0.01);模型组基因和蛋白表达水平均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);各实验组基因及蛋白表达水平与模型组相比均有所下降,除PI3K,MMP-9外,柚皮铜配合物组下降幅度大于柚皮素组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:相较于柚皮素,柚皮铜配合物有更好的生物活性,对激光诱发大鼠脉络膜新生血管的形成有更显著的抑制作用。

柚皮素对人类白血病K562细胞生长的作用及其机制探讨

目的研究柚皮素(naringenin)对人类慢性髓系白血病K562细胞株的作用及其机制。方法体外培养K562细胞,MTT法检测柚皮素在不同浓度、不同时间点对K562细胞生长的影响;用免疫组织化学的方法检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达,并计算PCNA标记指数(LI);显微镜和透射电镜下观察细胞形态变化;流式细胞仪分析细胞周期分布和细胞凋亡率;用RT-PCR和Western blot的方法检测K562细胞中p53、p21^(WAF1)mRNA和蛋白表达的变化。结果柚皮素对K562细胞增生有明显抑制作用,作用24、48和72h后的半数抑制浓度(IC_(50))分别为455μmol/L、225μmol/L和175μmol/L;PCNA在柚皮素实验组的表达显著低于对照组;普通光镜以及电镜观察均见实验组细胞显著的增生抑制和典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪分析证实柚皮素能使K562细胞聚积在G_0/G_1期、S期细胞减少,凋亡率增加;RT-PCR和Western-blot检测表明,实验组细胞表达p21 mRNA和蛋白质呈浓度和时间依赖性升高,而p53变化不明显。结论柚皮素对K562细胞具有明显的增生抑制作用,细胞周期阻滞和诱导凋亡可能是其重要机制,而非p53依赖性的p21上调可能是其发挥作用的重要途径。

柚皮素β-环糊精包合物的制备及对模型大鼠脉络膜新生血管形成的抑制作用

目的:制备柚皮素β-环糊精(β-CD)包合物,研究其对模型大鼠脉络膜新生血管(CNV)形成的抑制作用。方法:采用饱和溶液法制备柚皮素β-CD包合物;利用红外光谱、X射线衍射法对包合物进行表征分析,测定柚皮素的含量与水溶解度;通过氪激光复制大鼠CNV模型,15只BN大鼠随机均分为溶媒对照(等容溶媒)组、柚皮素(20 mg/kg)组与柚皮素β-CD包合物(97.4 mg/kg)组,腹腔注射给药,每天1次,连续4周。以脉络膜铺片法测量大鼠CNV面积。结果:柚皮素和β-CD形成了稳定的包合物,柚皮素β-CD包合物中柚皮素质量分数为20.53%,柚皮素在水中的溶解度为单体的11.8倍。与溶媒对照组比较,柚皮素组、柚皮素β-CD包合物组大鼠CNV面积减小,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);与柚皮素组比较,柚皮素β-CD包合物组大鼠CNV面积减小,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:柚皮素和β-CD包合后,水溶性增加;柚皮素β-CD包合物抑制模型大鼠CNV形成的作用优于柚皮素。