一种具有纤溶活性的蛋白酶的分离纯化及性质

目的分离纯化BacillussubtilisJin2 1发酵产生的具有纤溶活性的蛋白酶 ,并对其性质进行研究。方法通过硫酸铵分级盐析 ,SerineSepharose 2B和SephacrylS— 2 0 0色谱柱进行分离纯化 ,用SDS PAGE测定纯度 ,SDS PAGE和凝胶层析测定相对分子质量 ,纤维蛋白平板法测定酶活力。结果分离得到了电泳纯的酶 ,该酶的相对分子质量为 2 8kD ,等电点约为 8 6 ,最适 pH为 7 5 ,最适温度为 4 0℃ ,在 4 0℃以下较稳定 ,超过 5 0℃时酶活力开始下降 ;金属离子Mn2 + 对酶有明显的激活作用 ,而Zn2 + 对酶有抑制作用 ,二异丙基磷酰氟 (DFP)和苯甲基磺酰氟 (PMSF)完全抑制酶活性。结论该酶是一种丝氨酸蛋白酶 ,与纳豆激酶相似 。

纳豆激酶的分离纯化及其特性研究

从实验室保存的1株高产纳豆激酶菌株出发，进行发酵产酶，确立具有纤溶活力的纳豆激酶的分离纯化工艺，主要通过硫酸铵分级盐析法和Phenyl Sepharose疏水柱层析进行分离纯化，用纤维蛋白平板法测定酶活力，用SDS—PAGE电泳验证为电泳纯，分子质量为28ku。试验了不同作用温度、pH值和金属离子对NK活力的影响。结果表明，NK的适宜温度为25～50℃，适宜pH值为7．0，Cu^2＋，Mn^2＋，Hg^2＋是其抑制剂，而Mg^2＋，Ca^2＋为激活剂。

纳豆激酶的分离纯化研究

从实验室保存的一株高产纳豆激酶菌株出发 ,进行发酵产酶 ,确立具有纤溶活力的纳豆激酶的分离纯化工艺 ,主要通过硫酸铵分级盐析法和PhenylSepharose疏水柱层析进行分离纯化 ,用纤维蛋白平板法测定酶活力 ,用SDS PAGE电泳验证为电泳纯 ,分子量为 2 8kD。

纳豆激酶NKⅡ分离纯化及其酶促动力学研究

该实验主要采用疏水柱层析分离纯化纳豆激酶NKII,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果为单一蛋白条带,分子量为28 ku,酶活回收率56.51%,纯化倍数17.90,比活力达48 407.77 IU/mg。采用纤维蛋白平板法及显色底物法测定酶活力,结果表明,两种方法相关性高。以S-2251为底物的动力学研究表明,米氏常数Km值为0.379 6 mmol/L,最大反应速度Vm值为0.059 8 mmol/(L·min),Ca2+、Mg2+对酶活稳定性效果明显。