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小鼠神经细胞cdc2类蛋白激酶调节亚基p35^(Nck5a)基因的克隆和鉴定 被引量:2
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作者 周常文 戴旭明 +1 位作者 薛红 傅继梁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第10期716-719,共4页
目的: 获取小鼠神经细胞cdc2 类激酶(Nclk)调节亚基p35Nck5a基因组DNA,用于构建基因重复性打靶载体。方法: 用噬斑原位杂交法从λPS基因文库中克隆小鼠p35Nck5a基因;用限制性内切酶酶切图谱分析和... 目的: 获取小鼠神经细胞cdc2 类激酶(Nclk)调节亚基p35Nck5a基因组DNA,用于构建基因重复性打靶载体。方法: 用噬斑原位杂交法从λPS基因文库中克隆小鼠p35Nck5a基因;用限制性内切酶酶切图谱分析和序列测定进行基因组结构分析。结果: 获得较完整的p35Nck5a基因组DNA酶切图谱;该基因由一个外显子组成,长924 bp,编码307 个氨基酸的蛋白质,内含子长208 bp,位于5′端侧翼序列中。测定的序列(- 1 080 至+ 924 bp 和+ 3 721至+ 4 222 bp)与已报道的序列基本一致,仅在- 135和- 295位各插入一个碱基G。结论: 得到的p35Nck5a基因组DNA 片段长约11 kb, 其5′端侧翼序列含有一些已知的调控序列,3′端含有poly A 的信号序列。 展开更多
关键词 P35^nck5a基因 克隆 序列分析 cdc2类激酶 小鼠
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小鼠神经细胞p35^(nck5a)基因5′非编码区基因表达调控功能初步研究
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作者 朱海英 周常文 +4 位作者 王秀凤 傅继梁 李建秀 王新民 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期147-149,共3页
目的 :观察阿尔茨海默病 (AD)的相关基因 p35 nck5a基因 5′侧翼区指导报告基因表达的能力。方法 :将对本实验室所克隆的 p35 nck5a基因 5′侧翼片段连接于报告基因 β-半乳糖苷酶基因的上游构建表达载体 ,利用体外培养细胞和转基因小... 目的 :观察阿尔茨海默病 (AD)的相关基因 p35 nck5a基因 5′侧翼区指导报告基因表达的能力。方法 :将对本实验室所克隆的 p35 nck5a基因 5′侧翼片段连接于报告基因 β-半乳糖苷酶基因的上游构建表达载体 ,利用体外培养细胞和转基因小鼠实验体系来观察该片段在体内、外基因表达调控的差异。结果 :体外培养细胞中 p35 nck5a基因 5′侧翼序列不具有决定报告基因神经特异性表达的能力 ,但在基因组中整合有相同表达载体的转基因小鼠体内却能够指导报告基因的神经限制性表达。 结论 :这种差异提示进行体内。 展开更多
关键词 p35^nck5a基因 小鼠 转基因 基因表达 调控 神经细胞 AD病
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p35^(Nck5a)基因重复性打靶载体的构建和ES细胞基因打靶研究 被引量:2
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作者 周常文 傅继梁 薛红 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第8期659-665,共7页
为了在小鼠胚胎于细胞(ES)中引起神经细胞cdc2类激酶调节亚基p35Nck5a基因的定点 重复,采用常规的分子克隆技术,构建得到长约12.2kb的基因重复性打靶载体pGDTV。用电 穿孔法将线性化的pGDTV载体转入... 为了在小鼠胚胎于细胞(ES)中引起神经细胞cdc2类激酶调节亚基p35Nck5a基因的定点 重复,采用常规的分子克隆技术,构建得到长约12.2kb的基因重复性打靶载体pGDTV。用电 穿孔法将线性化的pGDTV载体转入ES细胞,经过G418和GANC分组药物选择,获得245个 双药物抗性的细胞克隆,细胞存活率为6.22 × 10-5。经PCR和基因组Southern杂交鉴定,2个 ES细胞克隆发生了p35Nck5a基因的重复,同源重组率为5.08×10-7、负向选择系统的应用使 同源重组事件的富集效率提高了7倍。为建立Alzheimer病的转基因小鼠模型打下了基础。 展开更多
关键词 p35^Nch5a基因 基因打靶 基因重复 NclK NFTS AD
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Neuronal cdc-2 like kinase in developing kindling rat hippocampus 被引量:5
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作者 才晓慧 徐如祥 唐大木 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2001年第3期24-28,103-104,共7页
Objective To test the hypothesis that neuronal cdc2 like kinase (Cdk5/p35 nck5a ) plays an important role in neuronal maturation and sprouting Methods Changes kinase activity, expression levels and subcellular... Objective To test the hypothesis that neuronal cdc2 like kinase (Cdk5/p35 nck5a ) plays an important role in neuronal maturation and sprouting Methods Changes kinase activity, expression levels and subcellular localizations of Cdk5 and p35 nck5a in the rat hippocampus were studied during kindling progression by Western blot analysis, immunohistochemitry, immunoprecipitation and kinase assay Results Kinase activity in kindling rats was significantly higher than that in normal adult rats The kinase activity at stage 3 was most prominent among all stages of kindling progression The changes in kinase activity coincided with those of p35 nck5a expression in kindling rats In contrast, the expression of Cdk5 was constant throughout the progression of kindling stages However, subcellular localization of Cdk5 dramatically changed in the hippocampal neurons of kindling rats Cdk5 was translocated from axon to soma when kinase activity was high p35 nck5a was always localized in the soma throughout kindling progression Conclusions Neuronal cdc2 like kinase plays an important role in synaptic reorganization, and the translocation of Cdk5 to the soma from the axon may be a novel regulatory mechanism to control kinase activity 展开更多
关键词 cyclin dependent kinase · p35 nck5a · kindling · hippocampus · neuronal plasticity
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