一种新的抑癌候选基因——NDR2在人类正常组织及相应肿瘤中的表达

为观察NDR2基因在人类正常组织及相应肿瘤组织中的表达分布特点 ,收集人脑与胶质瘤、肺与肺癌、胃与胃癌、结肠与结肠癌组织标本 ,分别进行组织石蜡切片和总RNA提取 ,应用免疫组化方法和RT PCR技术检测NDR2蛋白质及mRNA表达水平 ,并通过DNA测序验证PCR产物的正确性 .免疫组化结果表明 ,在上述各组织均有NDR2蛋白不同程度的表达 .RT PCR结果显示 ,在人脑和胶质瘤组织、肺与肺癌组织、胃与胃癌组织、结肠与结肠癌组织中均有NDR2mRNA表达 ,其表达水平以脑组织为最高 .NDR2mRNA在正常脑和肺组织的表达水平分别显著高于胶质瘤与肺癌组织 ,而结肠与结肠癌组织 ,胃与胃癌组织NDR2mRNA表达水平则无显著差别 .以上结果表明 ,NDR2基因可能广泛表达于人体正常组织内 ,而在胶质瘤与肺癌中的表达较相应正常组织减低 ,提示该基因可能与神经系统及呼吸系统肿瘤的发生发展有关 ,为进一步探讨该基因功能提供了线索 .

兔抗人NDR2高效价抗血清的制备、纯化及鉴定

目的 制备高效价的 NDR2抗体 .方法 构建p Rset- A- ndr2 ,p GEX- 4 T- 1- ndr2 - a和 p GEX- 4 T- 1- ndr2 - b三种重组表达质粒 ,并分别在大肠杆菌中诱导表达相应的融合蛋白 ;用全长 GST- NDR2蛋白免疫兔 ,然后用 GST- NDR2 - A和 GST- NDR2 - B片段加强免疫 ;对包涵体形式表达的 6 His-NDR2进行初步的纯化 ;利用固定于硝酸纤维素膜上的 NDR2抗原亲和吸附纯化抗血清 .结果 经免疫得到了高效价的兔抗人 NDR2多克隆抗血清 ,亲和纯化提高了 NDR2抗体的特异性 ;免疫组化表明 NDR2是一种胞浆蛋白 .结论 用全长NDR2蛋白免疫兔 ,再用片段加强免疫 ,可以提高蛋白的抗原性 ,制备得到高效价的抗体 .纯化后的特异性 NDR2抗体 ,为进一步研究

人分化相关基因Ndr2的克隆与组织表达谱研究

人Ndr1基因参与细胞终末分化 ,并且对肿瘤细胞增殖和肿瘤转移具有抑制作用 .从人 2 2周孕龄胎肝cDNA文库中获得与人Ndr1基因同源的一段表达性序列标签 ,继而从成人脑cDNA文库分离出其全长cDNA(2 12 1bp) ,并将该基因命名为Ndr2 .其染色体定位为 14q11 1- 11 2 ,开放阅读框编码 371个氨基酸 ,且与NDR1蛋白一样 ,含有一个典型的α β水解酶折叠类结构域 (α βhydrolasefold) .Northern杂交和点杂交分析显示 ,该基因与Ndr1一样 ,在脑中高表达 ,在胚胎组织的表达较低 ,在 8种人肿瘤细胞中的表达极低 .然而 ,Ndr2基因的组织表达谱与Ndr1又有鲜明的差异 :其在成人骨骼肌和脑等神经组织中表达最高 ,在唾液腺、肝、肾、心肌和气管中的表达次之 .结果提示 ,NDR2具有与NDR1相似或相关的重要功能 .

NDR2 mRNA在肿瘤组织中的差异表达

检测NDR2基因在人类正常组织及相应肿瘤组织中的表达分布 ,为进一步研究该基因功能提供线索。提取人脑与胶质瘤、肺与肺癌、胃与胃癌、结肠与结肠癌组织总RNA ,用RT PCR方法半定量分析NDR2基因在上述组织中的表达水平。在人脑和胶质瘤组织、肺与肺癌组织、胃与胃癌组织、结肠与结肠癌组织中均有NDR2mRNA表达 ,其表达水平以脑组织为最高。NDR2mRNA在正常脑和肺组织的表达水平分别显著高于胶质瘤与肺癌组织 ,而结肠与结肠癌组织 ,胃与胃癌组织NDR2mRNA表达水平则无显著差别。以上结果表明 ,NDR2基因可能广泛表达于人体正常组织内 ,而在胶质瘤与肺癌中的表达较相应正常组织减低 ,提示该基因可能与神经系统与呼吸系统肿瘤的发生发展有关。

ndr2基因在肺腺癌细胞GLC-82中的诱导表达

目的 构建蜕皮素诱导的抑癌基因 ndr2哺乳动物真核表达载体 (p IND- ndr2 ) ,转染肺腺癌细胞 GL C- 82 ,观察ndr2基因表达 ,为进一步研究 ndr2的生物学功能打下基础 .方法 以 RT- PCR方法确定正常人肺组织和肺腺癌 GL C- 82细胞 ndr2的表达高低 . PCR方法扩增 ndr2 ,以 Bam HI+Eco RI双酶切连接入 p U C19载体中 ,测序正确后 ,插入到蜕皮素诱导的真核表达载体 p IND中 .连有 ndr2基因的载体(p IND- ndr2 )用脂质体方法转染到培养的肺腺癌细胞 GL C-82中 .经 G4 18和 zeocin双抗生素筛选后 ,挑取单克隆进行培养 ,用蜕皮素诱导 ndr2表达 ,用 RT- PCR,western印迹和免疫组织化学方法验证获得表达的细胞株 .结果 PCR的方法扩增获得大小约 12 0 0 bp的片段 ,连接入预先插入 HA- tag的 p UC19载体的 ndr2基因经 H ind +Eco RI酶切后 ,构建到真核表达载体 p IND中 ,酶切鉴定后证明连接片段正确 .通过双载体转染和双抗生素筛选后 ,培养的细胞经诱导后检测到实验组 ndr2的高表达 ,而对照组和未诱导的实验组 ndr2表达均较低 .结论 ndr2基因成功转染培养的肺腺癌 GL C-82细胞 ,建立了

NDR2 mRNA在缺氧预适应小鼠海马组织中的差异表达

检测在缺氧预适应前后小鼠脑海马组织NDR2mRNA表达的变化 ,以探讨缺氧预适应对NDR2基因表达的影响及为研究该基因的功能提供线索。小鼠缺氧 0次 (H0 )、1次 (H1 )、4次 (H4)后取海马组织 ,应用半定量RT PCR技术 ,检测NDR2mRNA的表达量的变化。结果H1和H4与H0相比 ,NDR2mRNA表达量显著升高 ,但H1和H4之间无明显差异。结果提示 :缺氧以及预适应诱导NDR2基因的表达。

NDR2蛋白在甲状腺乳头状腺癌及正常甲状腺组织中的表达及意义

目的:探讨人正常甲状腺及甲状腺癌组织中NDR2蛋白的表达及临床意义。方法:随机收集正常甲状腺及乳头状甲状腺癌病理标本,采用小鼠抗NDR2单克隆抗体的免疫组织化学ABC法,研究NDR2蛋白在人正常甲状腺及甲状腺乳头状腺癌中的表达,并结合图像分析比较NDR2蛋白在正常甲状腺组织与癌组织中含量的变化。结果:人正常甲状腺滤泡上皮细胞胞浆均呈现较强的阳性NDR2免疫反应,胞核中未见有阳性物质表达。乳头状腺癌细胞胞浆免疫反应阳性很弱,阳性率为23.3％,胞核呈阴性。正常甲状腺组NDR2免疫反应阳性率与甲状腺乳头状腺癌组差异有显著性(P<0.05)。图像分析结果显示,正常甲状腺组NDR2蛋白相对含量与甲状腺乳头状腺癌组差异有显著性(P<0.05)。结论:NDR2在正常甲状腺组织及甲状腺乳头状腺癌中表达差异有极显著性,推测NDR2可能参与了乳头状甲状腺癌的发病机制。进一步研究NDR2蛋白的功能有重要意义。

鼠源抑癌新基因Ndr2的克隆、测序与生物信息学分析

背景与目的:人源Ndr2(N-mycdown-streamregulator2)基因是本室于1999年从正常人全脑cDNA文库中克隆到的一个新基因犤GenBank,AF159092犦。初步实验表明,Ndr2有可能是一个抑癌基因。为进一步研究该基因的功能,我们拟克隆小鼠的Ndr2的基因组序列。方法:以小鼠的基因组文库为模板,采用RT-PCR方法扩增Ndr2基因的基因组片段,用310GeneticAnalyzer自动测序仪测序,GenBankBLAST相似性分析其与人源Ndr2基因同源性,PcGene和ORFFinder作读框分析,ProDom软件作结构域分析。结果:经琼脂糖DNA电泳鉴定,获得一约3310bp大小的特异条带,并克隆入pMD18-T载体。BLAST相似性分析结果表明该序列与人源Ndr2基因高度同源(同源性为91.4%),与鼠基因组数据库无同源性。已公布的鼠源Ndr2mRNA序列比较发现该基因有8个外显子,7个内含子。读框分析表明,该序列编码含200个氨基酸的蛋白质。ProDom软件分析发现其含有酰基携带蛋白(ACP)样结构域。结论:本研究克隆了一个鼠的Ndr2基因并已测序。该基因为一新基因,该序列已被GenBank收录(登录号:AY151387)。

A novel tumor-suppressor candidate gene-ndr2 is differentially expressed between osteoarthritis synovium cells and rheumatoid arthritis synovium fibroblasts

Objective: To test whether the novel tumor-suppressor candidate gene-ndr2 is also differentially expressed between osteoarthritis synovium cells (OASC) and rheumatoid arthritis synovium fibroblasts (RASF), and whether ndr2 can suppress the growth of RASF in vitro. Methods: Dot blotting, cell culture and gene transfection, cell cycle analysis techniques were applied to investigate the effect of ndr2 on the cell phenotype and cell cycles. Results: ndr2 is expressed in OASC but absent in RASF. Transient transfection of ndr2 into RASF can suppress the growth of RASF from phenotype observation. Cell cycle analysis showed that apoptotic peaks can be detected in RASF cells transfected with ndr2 gene. Conclusion: Novel tumor suppressor candidate ndr2 is not only differentially expressed between OASC and RASF but also can induce the apoptosis of RASF in vitro.

王晓健教授团队揭示天然抗病毒免疫调控新机制

2019年3月25日,王晓健教授团队在《科学进展》(Science Advances)在线发表题为“NDR2 promotes the antiviral immune response via facilitating TRIM25-mediated RIG-I activation in macrophages”的研究论文(http://advances.sciencemag.org/content/5/2/eaavO163).该研究成果揭示了丝苏氨酸蛋白激酶NDR2参与调控抗病毒天然免疫应答新机制。