A novel tumor-suppressor candidate gene-ndr2 is differentially expressed between osteoarthritis synovium cells and rheumatoid arthritis synoviuni fibroblasts

To test whether the novel tumor-suppressor candidate gene-ndr2 is also differentially expressed between osteoarthritis synovium cells (OASC) and rheumatoid arthritis synovium fibroblasts (RASF), and whether ndr2 can suppress the growth of RASF in vitro. Methods: Dot blotting, cell culture and gene transfection, cell cycle nalysis techniques were applied to investigate the effect of ndr2 on the cell phenotype and cell cycles. Results: ndr2 is expressed in OASC but absent in RASF. Transient transfection of ndr2 into RASF can suppress the growth of RASF from phenotype observation. Cell cycle analysis showed that apoptotic peaks can be detected in RASF cells transfected with ndr2 gene. Conclusion: Novel tumor suppressor candidate ndr2 is not only differentially expressed between OASC and RASF but also can induce the apoptosis of RASF in vitro.

人分化相关基因Ndr2的克隆与组织表达谱研究

人Ndr1基因参与细胞终末分化 ,并且对肿瘤细胞增殖和肿瘤转移具有抑制作用 .从人 2 2周孕龄胎肝cDNA文库中获得与人Ndr1基因同源的一段表达性序列标签 ,继而从成人脑cDNA文库分离出其全长cDNA(2 12 1bp) ,并将该基因命名为Ndr2 .其染色体定位为 14q11 1- 11 2 ,开放阅读框编码 371个氨基酸 ,且与NDR1蛋白一样 ,含有一个典型的α β水解酶折叠类结构域 (α βhydrolasefold) .Northern杂交和点杂交分析显示 ,该基因与Ndr1一样 ,在脑中高表达 ,在胚胎组织的表达较低 ,在 8种人肿瘤细胞中的表达极低 .然而 ,Ndr2基因的组织表达谱与Ndr1又有鲜明的差异 :其在成人骨骼肌和脑等神经组织中表达最高 ,在唾液腺、肝、肾、心肌和气管中的表达次之 .结果提示 ,NDR2具有与NDR1相似或相关的重要功能 .

ndr2基因在肺腺癌细胞GLC-82中的诱导表达

目的 构建蜕皮素诱导的抑癌基因 ndr2哺乳动物真核表达载体 (p IND- ndr2 ) ,转染肺腺癌细胞 GL C- 82 ,观察ndr2基因表达 ,为进一步研究 ndr2的生物学功能打下基础 .方法 以 RT- PCR方法确定正常人肺组织和肺腺癌 GL C- 82细胞 ndr2的表达高低 . PCR方法扩增 ndr2 ,以 Bam HI+Eco RI双酶切连接入 p U C19载体中 ,测序正确后 ,插入到蜕皮素诱导的真核表达载体 p IND中 .连有 ndr2基因的载体(p IND- ndr2 )用脂质体方法转染到培养的肺腺癌细胞 GL C-82中 .经 G4 18和 zeocin双抗生素筛选后 ,挑取单克隆进行培养 ,用蜕皮素诱导 ndr2表达 ,用 RT- PCR,western印迹和免疫组织化学方法验证获得表达的细胞株 .结果 PCR的方法扩增获得大小约 12 0 0 bp的片段 ,连接入预先插入 HA- tag的 p UC19载体的 ndr2基因经 H ind +Eco RI酶切后 ,构建到真核表达载体 p IND中 ,酶切鉴定后证明连接片段正确 .通过双载体转染和双抗生素筛选后 ,培养的细胞经诱导后检测到实验组 ndr2的高表达 ,而对照组和未诱导的实验组 ndr2表达均较低 .结论 ndr2基因成功转染培养的肺腺癌 GL C-82细胞 ,建立了

鼠源抑癌新基因Ndr2的克隆、测序与生物信息学分析

背景与目的:人源Ndr2(N-mycdown-streamregulator2)基因是本室于1999年从正常人全脑cDNA文库中克隆到的一个新基因犤GenBank,AF159092犦。初步实验表明,Ndr2有可能是一个抑癌基因。为进一步研究该基因的功能,我们拟克隆小鼠的Ndr2的基因组序列。方法:以小鼠的基因组文库为模板,采用RT-PCR方法扩增Ndr2基因的基因组片段,用310GeneticAnalyzer自动测序仪测序,GenBankBLAST相似性分析其与人源Ndr2基因同源性,PcGene和ORFFinder作读框分析,ProDom软件作结构域分析。结果:经琼脂糖DNA电泳鉴定,获得一约3310bp大小的特异条带,并克隆入pMD18-T载体。BLAST相似性分析结果表明该序列与人源Ndr2基因高度同源(同源性为91.4%),与鼠基因组数据库无同源性。已公布的鼠源Ndr2mRNA序列比较发现该基因有8个外显子,7个内含子。读框分析表明,该序列编码含200个氨基酸的蛋白质。ProDom软件分析发现其含有酰基携带蛋白(ACP)样结构域。结论:本研究克隆了一个鼠的Ndr2基因并已测序。该基因为一新基因,该序列已被GenBank收录(登录号:AY151387)。