杀线威合成新工艺技术研究

介绍了杀线威的性能、应用现状和合成方法。本文用双乙烯酮为起始原料,经过胺化、氯代、肟化、甲硫基化、缩合反应制备了杀线威,产品纯度可达95.5%,总收率为61.7%(以双乙烯酮计)。此合成工艺已经完成了工业化应用。

松材线虫内生细菌与病原细菌的互作关系分析

采用16S rRNA基因文库和illumina Miseq技术测序对松材线虫内生细菌群落的宏基因组进行初步分析,文库显示优势菌群为黄单胞菌科(22.41%)、鞘脂杆菌科(17.66%)、丛毛单胞菌科(14.71%)、根瘤菌科(10.17%)。采用稀释平板法,从松材线虫体内分离出5株内生细菌。利用形态学、生理学及16S rRNA序列特征等对这些内生细菌进行了分类鉴定。研究发现这些内生细菌在体外均显示较强的杀线虫活性,其中克雷伯氏菌属sct5的杀虫活性最大,作用4 d松材线虫的死亡率即可达到100%。该细菌产生毒性蛋白酶并在体外快速形成生物膜。进一步研究发现,该内生细菌与杀线虫芽孢杆菌B16之间具有强亲和性,混合2个菌株sct5+B16作用1 d对松材线虫的防效为75%,明显好于单菌株sct5(60%)和B16(40%)。而另一内生细菌肠杆菌属sct29与B16存在拮抗关系,两者不亲和,混合菌株sct29+B16作用1 d对松材线虫的防效仅为13%。本研究首次系统地报道了松材线虫可培养内生细菌的杀虫活性及其与杀线虫芽孢杆菌B16的亲和关系,对研制开发组合生防菌剂、提高生防菌株的稳定性等奠定理论基础,本研究从新的视角阐释了松材线虫内生细菌与病原细菌之间的互作关系。

芽孢杆菌B16对厚垣普可尼亚菌ZK7产孢能力的影响

利用生防菌生产菌剂是目前防治根结线虫的重要措施之一。单一菌剂的施用易受土壤中复杂生态因子的影响,各种生防菌相互作用可提高根结线虫防治效果的稳定性。研究了芽孢杆菌B16对根结线虫生防真菌厚垣普可尼亚菌ZK7产孢能力的影响,并初步分析了相关信号物质。结果表明,芽孢杆菌B16能显著提高厚垣普可尼亚菌ZK7的产孢能力,B16发酵液与ZK7发酵液共培养产生的丁内酯能促进ZK7产孢,产生的甲苯对ZK7的产孢能力没有促进作用。

三种方法对进境种苗线虫的防治效果研究

本研究分别利用药剂处理、福尔马林熏蒸处理和热处理三种方法对进境花卉、种苗的介质和根围携带植物线虫进行防治效果的研究。药剂处理使用了甲基异硫磷加辛硫磷混合液、天然杀线剂和克线磷,各药剂分别使用不同浓度进行处理。试验结果表明,400倍和500倍天然杀线剂液、500倍克线磷液防治效果最佳,施药7天后药效达到100%。福尔马林防治效果不理想。热处理的杀线效果与处理时间成正比,80℃处理32h虫口减退率达到90%以上。

杀线虫芽孢杆菌B16和枯草芽孢杆菌168硫酯酶Ynep差异分析

【背景】线虫生防菌杀线虫芽孢杆菌B16和可作为线虫食物的枯草芽孢杆菌168对线虫存在差异感知,线虫引诱剂2-庚酮的表达量也存在显著差异。【目的】研究线虫生防菌芽孢杆菌B16和可作为线虫食物的枯草芽孢杆菌168中合成甲基酮的关键因子硫酯酶Ynep,并分析它们的异源表达、结构及酶活性质上的差异。【方法】使用定量聚合酶链式反应(quantitativePCR,qPCR)验证两种芽孢杆菌中硫酯酶在转录水平的差异,通过生物信息学分析两种酶结构的差异,并通过蛋白异源表达和活性测试验证其蛋白表达水平及特性的差异。【结果】qPCR显示,在培养12 h和72 h后,菌株B16ynep基因表达分别为菌株168的1.428和0.991倍。生物信息学分析表明两者氨基酸序列一致性为97.12%,酶分子量分别为15993.35 Da和16007.42 Da,等电点(isoelectric point,pI)分别为7.06和7.82,均具有与转录过程中基因表达调控有关的蛋白质(transcriptional enhancer,TE)结构域,均包含保守的Asp16-His23-Tyr26催化三联体。同源建模显示Ynep均呈典型“hot dog”结构,是TE超家族最常见的结构折叠。两种酶存在4个氨基酸差异,可能影响硫酯酶四聚体形成。菌株B16和168 Ynep与底物β-酮酯酰-CoA分子对接,结合能分别为-5.47 kcal/mol和-6.95 kcal/mol。异源表达纯化的酶活性测试显示:菌株B16和168的酶活分别为1.243 U/mL和1.2339 U/mL,最适反应温度均为30°C,最适pH分别为8.0和9.0。两种酶在10-30°C、pH 7.0-8.0均表现出良好的稳定性,且菌株168中Ynep对温度耐受性更佳。【结论】两种芽孢杆菌中的硫酯酶Ynep在异源表达、结构及酶活性质方面均有差异,导致其合成线虫引诱剂2-庚酮量有所不同。这些研究结果有助于解析不同芽孢杆菌差异感知线虫的分子机理,为进一步开发高效新型线虫生防产品提供新思路。