肿瘤新抗原疫苗的研究现状与挑战

个性化新抗原疫苗作为癌症免疫治疗的前沿技术,近年来备受关注。新抗原是由肿瘤细胞特异性突变产生的独特抗原,能够被免疫系统识别并激发特异性的抗肿瘤免疫反应。本文综述了肿瘤新抗原疫苗的研究现状,包括新抗原的产生机制和筛选方法、疫苗设计与制作、临床前及临床研究进展,以及当前面临的挑战和未来的发展趋势。我们探讨了新抗原疫苗在个性化治疗中的潜力,以及其在提升癌症患者生存率和生活质量方面的重要作用。同时,本文还总结了目前研究中的关键问题,并提出了可能的解决方案,为未来的研究提供参考。

树突状细胞体外诱导抗肝癌免疫

目的应用树突状细胞（ＤＣ）在体外诱导高效而特异抗肝癌免疫．方法自肝癌患者外周血中分离ＤＣ；以粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）及白介素４（ＩＬ４）联合刺激ＤＣ；以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）激活ＤＣ；ＤＣ诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖、分化为细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）；检测ＣＴＬ及其上清液对ＨｅｐＧ２肿瘤细胞、ＬＯＶＯ肿瘤细胞及ＨＯＳ８６０３肿瘤细胞的细胞毒作用．结果经人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的ＴＡＡ激活并经ＧＭＣＳＦ及ＩＬ４联合刺激后，肝癌患者外周血ＤＣ能够诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖分化为ＣＴＬ，该ＣＴＬ及其上清液对ＨｅｐＧ２肿瘤细胞均有高效而特异性的杀伤作用（杀伤率分别为９２％±１０５％和４１％±８９％）．结论肝癌患者外周血ＤＣ体外能够诱导高效而特异抗肝癌免疫．提示ＤＣ作为一新概念上的抗肿瘤疫苗可能在肿瘤治疗及预防中发挥重要作用．

肝癌树突状细胞瘤苗诱导抗肿瘤作用的研究

目的:研究负载肝癌抗原的肝癌树突状细胞(dendritic cell,DC)瘤苗诱导的抗肿瘤作用。方法:于体外用rhGM-CSF和rhIL-4从肝癌患者外周血诱导DC,并用肝癌细胞抗原冲击致敏,制成负载肝癌抗原的肝癌DC瘤苗。肝癌DC瘤苗活化自体T淋巴细胞分化为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic of T-lymphocytes,CTL),采用流式细胞术检测CTL分型;乳酸脱氢酸(LDH)4 h释放法检测CTL对肝癌细胞的特异性杀伤作用。MTT法检测肝癌DC瘤苗及其活化CTL培养上清对肿瘤细胞的抑制作用;ELISA法检测肝癌DC瘤苗活化的CTL培养上清中IL-12、IFN-γ和TNF-α水平。结果:经肝癌DC瘤苗活化后的T淋巴细胞群中,CD56+细胞数量显著减少,CD4+T和CD8+T细胞数量增加,其中以CD8+T细胞增加较明显;细胞毒实验显示,该CTL对自体肝癌细胞具有较强的杀伤作用,而对与致敏DC的肝癌抗原无关的CT26结肠腺癌细胞无明显杀伤作用;单纯肝癌DC瘤苗或其激活的CTL培养上清也表现出较强的抑瘤作用,而且这种抑瘤作用具有广谱性,可抑制多种肿瘤细胞的生长;在CTL培养上清中可检测到IL-12、TNF-α和IFN-γ的含量。结论:肝癌DC瘤苗不仅诱导了对肝癌细胞的特异性CTL杀伤作用,而且可激活CD4+T和CD8+T细胞分泌IL-12、TNF-α和IFN-γ等细胞因子,以非杀伤方式直接或间接地抑制肿瘤细胞生长,发挥非特异性的抗肿瘤作用。

新城疫病毒Ⅳ系活疫苗辅助治疗鼻咽癌患者的临床效果观察研究

目的:考察鸡新城疫病毒Ⅳ系(NewcastlediseasevirusⅣ,NDVⅣ)活疫苗作为辅助治疗手段用于人类鼻咽癌患者的安全性、免疫学效应和临床效果。方法:以NDVLaSota株制备活疫苗,以喷雾吸入途径接种于家兔,得到了安全、有效的结果之后,再以相同途径接种于放射治疗后的鼻咽癌患者,观察其安全性、免疫学效果和辅助治疗的临床效果。结果:该疫苗接种于实验动物和肿瘤患者的近期毒副发应都属轻微,未见严重肝肾功能损害;血清均可测出相应的抗体,其几何平均滴度随接种程序的推进而相应升高;鼻咽癌患者接种该疫苗之后,3年复发率低于对照组(4·00%vs26·00%),差异有统计学意义;5年复发率亦低于对照组(14·00%vs28·00%),但差异无统计学意义。结论:鸡新城疫病毒Ⅳ系活疫苗接种于实验动物(家兔)和人,都具有良好的安全性;都能产生明显的免疫学效应;用于放射治疗后的鼻咽癌患者,能明显减少其治疗后3年复发率;因而,适宜作为一种辅助治疗手段,在临床上推广应用。5年或更长期的效果,尚待研究。

体外扩增CIK细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901

目的：观察CIK细胞增殖情况，了解扩增后的最佳应用时机，并观察体外对SGC-7901的杀伤作用。方法：健康人外周血单核细胞（PBMC）在体外条件下经过多种细胞因子的共同刺激诱导成CIK细胞，计数培养不同时间的CIK细胞，用流式细胞术检测CIK细胞的表型特征。用MTT法检测杀伤活性，对比CIK细胞与5-FU对SGC-7901的杀伤作用，并观察了两者联合应用的效果。结果：CIK细胞随体外培养时间的延长，数量及杀伤活性均增加。体外培养20d增殖124倍，CD3^＋、CD56^＋双阳性细胞的比例达66．1％，其后两者数量增长缓慢；体外实验显示CIK细胞对胃癌SGC-7901细胞株有明显的杀伤作用，最高杀伤效率为73．13％，其杀伤作用优于5-FU，P〈0．05。二者联合应用杀伤作用降低。结论：CIK细胞具有较强的抗胃癌细胞活性；体外培养15～20d时应用较为合适；联合应用时5-FU可降低CIK细胞的杀伤效率。

白细胞介素12基因修饰的Lewis肺癌瘤苗的抗肿瘤免疫作用

目的：研究白细胞介紊12（IL-12）基因修饰的Lewis肺癌瘤苗的抗肿瘤免疫作用。方法：用含IL-12基因的腺病毒载体，在体外以不同感染系数感染Lewis肺癌细胞，并分别接种于C57BL／6小鼠皮下，观察其致瘤性的变化；并用Lewis肺癌细胞及B16黑色索瘤细胞再次攻击免疫后的C57BL／6小鼠，观察肿瘤发生情况。结果：以各种感染系数AdcMVIL-12制备的瘤苗，接种于小鼠皮下后，无肿瘤生长，完全消除了Lewis肺癌细胞的致瘤性；瘤菌注射6d后，用Lewis肺癌细胞再次攻击，仍无肿瘤生长，抑瘤率达100％；用B16黑色索瘤细胞攻击，10-12d均有肿瘤生长，说明此瘤苗具有肿瘤特异性。结论：AdCMVIL-12能消除Lewis肺癌细胞的致瘤性，并能诱导显著的抗肿瘤免疫反应，对肿瘤的复发及转移有较好疗效。

小细胞肺癌PGRP基因的克隆及疫苗构建

目的构建重组质粒pcDNA3.1/PGRP,肌肉注射免疫Balb/c小鼠,探讨PGRP的基因免疫效果。方法胶回收纯化的PGRP基因片段及pcDNA3.1质粒经HindⅢ、BamHⅠ双酶切,T4DNA Ligase连接构建成重组质粒pcDNA3.1/PGRP,用PCR方法对其进行鉴定,质粒抽提后进行序列分析;于小鼠后腿双侧肌注免疫,检测各项免疫指标。结果构建的重组质粒经PCR鉴定和测序证明PGRP插入方向正确,免疫检测结果显示重组质粒激活了PGRP特异的CTL和Th1细胞,同时PGRP特异性抗体效价小幅升高。结论构建的重组质粒pcDNA3.1/PGRP具有诱导特异性体液免疫应答和细胞免疫应答的能力,可作为潜在的小细胞肺癌新型疫苗,有进一步研究的意义。

CIK细胞及上清液抗胃癌细胞株SGC-7901活性的研究

目的:探讨由多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)在体外的增殖情况,分析体外CIK细胞对胃癌细胞株SGC-7901的杀伤作用。方法:健康人外周血单核细胞(PBMC)在体外诱导成CIK细胞,计数培养不同时间的CIK细胞,并用流式细胞术动态分析其表型特征。倒置显微镜下观察CIK细胞作用于SGC-7901胃癌细胞的形态学变化;流式细胞仪检测CIK细胞培养上清液对胃癌细胞的诱导凋亡作用;采用MTT法检测CIK细胞对SGC-7901胃癌细胞株的杀伤活性。结果:CIK细胞随体外培养时间的延长,数量及杀伤活性均增加。体外培养21d,细胞总数增殖倍数111.63±10.97,CD3+CD56+双阳性细胞数量亦增加,比例达(35.8±9.7)%,其后两者数量逐渐降低。CIK细胞上清液能够诱导胃癌细胞株凋亡;CIK细胞对胃癌SGC-7901细胞株有明显的杀伤作用,最高杀伤率为(74.91±2.71)%。结论:CIK细胞具有较强的抗胃癌细胞活性,体外培养14～21d时具有较强的抗瘤活性,其主要通过直接杀伤及释放细胞因子诱导凋亡的作用杀伤肿瘤细胞。

巨噬细胞过继免疫治疗的实验研究

:目的 研究脂质体瘤苗激活小鼠巨噬细胞的过继免疫治疗作用。方法 制备脂质体 H2 2 肝癌瘤苗 ,脂质体 S1 80 瘤苗 ,Freund's完全佐剂 H2 2 肝癌瘤苗以及对照脂质体瘤苗并免疫小鼠。用 Hanks液清洗免疫鼠的腹腔收集糖原诱导的腹腔巨噬细胞。实验鼠腹腔注射 1× 10 5 个 H2 2 肝癌细胞 2 4小时后再腹腔给予各供体巨噬细胞 5× 10 6个 /只。结果 脂质体 H2 2 瘤苗和 Freund's佐剂 H2 2 瘤苗与对照组相比较 ,其免疫鼠提供的巨噬细胞具有较强的过继免疫治疗作用。结论 脂质体瘤苗激活的小鼠巨噬细胞具有特异性的可过继转移的抗瘤作用。

以链球菌制剂OK432为佐剂的内皮细胞疫苗体内抗小鼠肝癌转移的作用(英文)

目的评估OK432作为佐剂制备的内皮细胞疫苗体内抗肿瘤转移的作用。方法以OK432为佐剂,体外混合人脐静脉内皮细胞(HUVEC),制备HUVEC-OK432疫苗。雄性健康BALB/c小鼠尾静脉注射肝癌细胞5×105建立肝癌肺转移模型,皮下注射HUVEC-OK432疫苗,分别在预防性和治疗性免疫中评价HUVEC-OK432疫苗抗肿瘤转移活性;皮内注射5×104肝癌细胞建立皮内肿瘤血管模型,皮下注射HUVEC-OK432疫苗,评价HUVEC-OK432疫苗抑制肿瘤新生血管的活性;采用ELISA的方法测定小鼠免疫血清中HUVEC抗体水平;采用细胞毒T淋巴细胞(CTL)实验考察HUVEC-OK432疫苗诱导的细胞免疫应答水平。结果肺转移模型结果显示,在预防性和治疗性免疫中,HUVEC-OK432免疫均能有效降低小鼠肺上的肿瘤转移灶数目(P<0.01);皮内肿瘤血管模型的结果显示,HUVEC-OK432免疫能显著降低肿瘤新生血管的数目(116.5±20.6 vs 45.0±8.9,P<0.01);ELISA测定抗体的结果显示,HUVEC-OK432初次免疫后1周小鼠即产生了高滴度的特异性HUVEC抗体,随免疫次数的增加抗体水平不断升高,且该抗体在体外可以显著抑制HUVEC细胞的增殖;CTL实验的结果表明,HUVEC-OK432免疫组淋巴细胞体外有明显的特异性杀伤HUVEC的作用。结论 HUVEC-OK432疫苗免疫可以有效诱导小鼠产生靶向内皮细胞的免疫应答,从而有效抑制小鼠肝癌细胞转移。

幽门螺杆菌工程疫苗研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡及胃肠道淋巴瘤的主要致病因素,并与胃癌发生密切相关,WHO将其列为第一级致癌物质。流行病学调查表明,我国是胃癌的高发区及Hp高感染区(21％～93％),已对人民健康造成重大危害,尽管抗生素治疗在Hp相关性疾病治疗方面取得了较大进展,但其毒副作用明显,疗效不稳定,无法解决其复发问题。人类与病原微生物的长期斗争历史表明,有效控制和彻底消灭某种传染病的最佳途径是疫苗接种,Hp疫苗接种将是预防Hp感染,降低Hp相关性疾病发病率的最佳选择。 1995年费城会议上Rapuoli指出开发Hp疫苗需要至关重要的三种成分:①必须发现能干扰粘附和毒性且存在于所有菌株的保护性抗原,如尿素酶(Ure)、热休克蛋白60(Hsp60)、粘附素等;②临床前试验需要能模拟感染和疾病的动物模型。

β-榄香烯对脂质体瘤苗抗小鼠H_(22)肝癌的免疫增强作用

目的:制备榄香烯脂质体瘤苗,观察对抗小鼠H22肝癌作用,寻找有效的抗肝癌生物疗法。方法:用改进的机械分散法制备β-榄香烯修饰脂质体瘤苗,使磷脂酰胆碱∶胆固醇∶十八烷氨∶β-榄香烯摩尔比为4∶4∶1∶1.5,并通过腹腔接种将脂质体包裹的H22抗原(LA g组)及脂质体共包裹β-榄香烯与H22抗原的制剂(LEA g组)分别免疫荷瘤小鼠,观察小鼠的生存期,M TT法测定淋巴细胞对H22肝癌细胞的杀伤作用。结果:LEA g组的生存期和淋巴细胞毒活性均优于LA g组(P<0.05)。结论:β-榄香烯可增强脂质体瘤苗的抗肝癌免疫效应。

新城鸡瘟病毒修饰自体肿瘤细胞疫苗在28例中晚期宫颈癌的应用

[目的]探讨新城鸡瘟病毒修饰自体肿瘤细胞疫苗(NDV-ATV)在中、晚期宫颈癌治疗中的作用。[方法]28例宫颈癌行NDV-ATV免疫治疗和放射治疗(实验组),30例单纯接受放射治疗(对照组)。采用流式细胞术观察患者在接受免疫治疗前后外周血中CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值变化以及放射治疗的近期疗效、毒副反应等。[结果]实验组28例中、晚期宫颈癌患者经治疗1～2个疗程后,其CD4+、CD4+/CD8+比值较治疗前显著增加(P<0.05),同时CD8+数量较治疗前降低(P<0.05),放射治疗近期疗效较对照组好(P<0.05),毒副反应轻。[结论]新城鸡瘟病毒修饰自体肿瘤细胞疫苗能增强患者免疫功能,对放射治疗有协同作用。

树突状细胞(DCs)疫苗的制备及抑瘤实验研究

目的 :本文研究了新鲜分离的小鼠脾树突状细胞 (DCs) ,在其未成熟阶段加入MCA38肿瘤抗原 ,使其对抗原加工处理而制成DCs疫苗对同基因型小鼠的抑瘤作用。方法 :通过皮下接种 (A组 ) ,静脉注射 (B组 ) ,腹腔接种 (C组 )DCs疫苗方法研究其抑瘤作用。结果 :经统计学分析表明 ,DCs疫苗对肿瘤的生长具有显著的抑制作用 (P <0 .0 0 1) ;三种接种方法对肿瘤的生长的抑制作用无明显差异 (P>0 .0 5)。结论 :DCs疫苗具有显著的抑瘤作用 ,皮下接种方法接种量少 ,方法简单、安全而且副作用小 。

树突状细胞瘤苗的制备与临床应用进展

树突状细胞瘤苗可诱导荷瘤动物的保护性抗肿瘤免疫应答反应 ,这一发现使肿瘤治疗领域倍受鼓舞。就肿瘤免疫治疗中树突状细胞瘤苗的基础研究与临床应用进展予以综述。

hMIP-1β基因修饰瘤苗体内诱导抗肿瘤免疫效应的研究

目的:探讨人巨噬细胞炎性蛋白-1β(hMIP-1β)基因修饰瘤苗体内诱导的抗肿瘤免疫效应。方法:通过重组腺病毒载体介导将hMIP-1β基因导入CT26细胞中,X-gal染色法检测基因转染效率;ELISA法检测hMIP-1β基因修饰CT26细胞培养上清中hMIP-1β的含量;Boyden趋化小室法检测培养上清对CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞及未成熟树突状细胞(imDCs)的趋化作用;制备hMIP-1β基因修饰的CT26细胞瘤苗并免疫BALB/c小鼠,观察其诱导免疫细胞的杀伤活性和保护性免疫反应。结果:腺病毒载体可介导hMIP-1β基因转染CT26细胞和表达(X-gal染色的阳性率>95%),培养上清中hMIP-1β水平为980pg/mL,并对CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞及im-DCs有显著的趋化作用,与转染对照基因LacZ的CT26细胞及野生型CT26细胞比较差异均有统计学意义,P<0.01。hMIP-1β基因修饰的CT26细胞瘤苗免疫小鼠能有效诱导肿瘤特异性CTL活性和非特异性NK活性,产生明显的免疫保护作用,可抵抗肿瘤细胞的再攻击,成瘤率降低,肿瘤生长速度减慢,小鼠生存期延长。结论:hMIP-1β基因修饰瘤苗可诱导产生有效的抗肿瘤免疫保护作用,有希望成为预防肿瘤转移与复发的有效手段。

肺癌中医证型研究概况

肺癌证型脏腑辨证发病率依次为肺阴虚、肺气虚、脾气虚、肾阴虚、肾气虚、瘀阻肺络等;也有报告为气阴两虚、阴虚内热、脾虚痰湿、气滞血瘀、气虚、痰湿蕴肺。舌苔脱落细胞MI、MV改变、肿瘤标志物表达与中医证型有关,可作为证型判断、微观辨证重要指标。肺癌多层螺旋CT表现与中医证型存在一定关系,可作为临床辨证分型客观依据。病理分型与中医证型互参,鳞癌多表现为气血瘀滞,大细胞肺癌多表现为阴虚痰热,未分化癌多表现为痰湿蕴肺,腺癌多表现为阴虚为本,兼有气虚或痰热。气虚、痰凝、血瘀是非小细胞肺癌最常见中医证候;TNM分期Ⅰ、Ⅱ期以实证居多,Ⅲ、Ⅳ期以虚实夹杂、虚证为主,Ⅳ期(M1b)期脾虚痰湿、气滞血瘀、痰热阻肺证肺癌较易出现耐药现象。血管内皮生长因子(VEGF)气血瘀滞高于气虚痰湿、阴虚热毒、气阴两虚;气虚痰湿免疫功能最好CD4+T细胞最高。化疗后1周内气虚痰湿出现最多,化疗后14~30d内气阴两虚最多。痰湿证候要素占多数,是肺癌发生发展证候基础,热毒要素出现在疾病晚期,有一定预后评价作用;对症治疗可提高患者生活质量,对预后有一定影响。目前证型评判没有统一规范标准,缺乏大样本和多中心研究,出现结果多样性和偏差性,结论不能相互得到认可。建立肺癌中医证型标准是当务之急,把舌象和脉象动态变化纳入研究范围,同时还可引入更多现代分子生物及免疫学等相关学科的微观指标和研究方法,期望能够促进肺癌微观辨证的发展。

BCG-HPV16E7c疫苗对小鼠免疫效应的实验研究

目的研究卡介苗(BCG)-人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E7c疫苗对小鼠的免疫效应和致病性。方法用本研究组制备的BCG-HPV16E7c疫苗腹腔内接种清洁级BALB/c鼠,同时设磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、BCG空白菌对照组及BCG-pBCG3000空白载体对照组,用酶联免疫法检测各组血清特异性抗体、流式细胞仪测定脾脏T淋巴细胞亚群及肝、肺组织病理学检查。结果免疫后第2周和第4周BCG-HPV16E7c组每只小鼠的血清中检测到抗HPV16E7c特异性抗体,在第4周诱导产生的特异性IgG抗体滴度明显高于第2周,平均滴度为1∶200;免疫后第4周BCG-E7c组与各对照组比较,CD8+T细胞的百分率显著升高(P<0.05);免疫组小鼠肝、肺组织病理学检查和BCG对照组比较未观察到更为严重的病理学变化。结论本研究组构建的BCG-HPV16E7c疫苗能诱导小鼠的体液免疫应答和细胞免疫应答,对小鼠无明显的毒性作用。

SLC基因修饰对肿瘤细胞疫苗免疫效果的初步研究

目的:构建次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid-tissue chemokine,SLC)基因修饰的趋化型恶性黑色素瘤疫苗,并初步研究其免疫效果。方法:SLC基因转染小鼠黑色素瘤细胞B16,并用适当条件的丝裂霉素处理,制备趋化型肿瘤细胞疫苗。在体外,利用趋化小室法检测趋化型疫苗培养上清对小鼠脾淋巴细胞的趋化活性。在体内,用趋化型疫苗免疫小鼠,检测脾淋巴细胞的CTL活性,并观察疫苗免疫对B16移植瘤生长的影响。结果:筛选获得了SLC基因转染的小鼠黑色素瘤B16细胞,以100μg/mL丝裂霉素处理1.5h,制备趋化型肿瘤细胞疫苗。趋化型疫苗在体外培养48h后,其培养上清对淋巴细胞具有明显的趋化活性。与野生型疫苗相比,用趋化型疫苗免疫后,小鼠脾淋巴细胞的CTL活性更强,小鼠免疫后再次接种B16细胞,肿瘤的生长受到更明显的抑制。结论:成功构建了SLC基因修饰的趋化型黑色素瘤疫苗,并在体内外初步检测到该疫苗对抗肿瘤免疫的影响和对移植瘤生长的抑制,该疫苗有可能被应用于恶性黑色素瘤的免疫治疗。

微波制备γ-干扰素处理的小鼠H22肝癌细胞瘤苗的抗瘤作用

目的探讨用微波方法制备γ-干扰素(IFN-γ)处理的小鼠H22肝癌细胞瘤苗(MITTV-H22)的抗肿瘤效应。方法利用MITTV-H22免疫小鼠3次,末次免疫后第7天接种H22肿瘤细胞,观察肿瘤生长情况及检测小鼠淋巴细胞刺激指数。结果实验组小鼠于H22肿瘤细胞攻击后的7d接种部位没有发现肉眼可见的包块,经解剖肿瘤接种部位未发现肿瘤组织,120d后也未发现肿瘤组织。对照组于H22肿瘤细胞接种后第5或第6天接种部位出现直径小于0.5cm的包块,成瘤率为100%。观察120d,实验组小鼠平均生存期高于对照组(t=25.55,P<0.01)。脾淋巴细胞增殖实验检测结果显示,实验组淋巴细胞刺激指数高于对照组(t=3.526,P=0.01)。结论 MITTV-H22可以有效抑制肿瘤生长,具有明显的抗瘤效应。