超高效液相色谱串联质谱法测定护肝片(胶囊)中柴胡皂苷K含量

目的建立测定护肝片(胶囊)中柴胡皂苷K含量的超高效液相色谱串联质谱法。方法色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH-C_(18)柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为0.30 mL/min,柱温为35℃,进样量为1μL。电喷雾离子源,负离子检测,多反应监测模式,离子源温度为150℃,毛细管电压为4.0 kV,脱溶剂温度为500℃,锥孔气流量(氮气)为50 L/h,碰撞气流速(氩气)为0.15 L/h,氮气流量为800 L/h。结果柴胡皂苷K质量浓度在0.2007~5.0176μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999,n=5);检测限为0.05 mg/kg,定量限为0.20 mg/kg;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于3.0%;平均加样回收率为98.43%,RSD为0.95%(n=9)。12个厂家47批样品中有28批的柴胡皂苷K含量介于0.5564~3.5899μg/g。结论该方法操作简便、快捷、灵敏度高、重复性好,可用于护肝片(胶囊)的质量控制。

基于UPLC-MS/MS技术检查银柴颗粒中柴胡掺伪的鉴别研究

目的:建立银柴颗粒中藏柴胡的检查方法,考察生产企业是否存在使用藏柴胡代替柴胡投料的现象。方法:采用高效液相色谱-质谱法,选择Agilent Eclipse Plus C18(100 mm×3 mm,1.8μm)色谱柱;流动相为乙腈(A)-水(B),二元梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温40℃;采用质谱检测器,电喷雾负离子模式(ESI-),进行多反应监测(MRM),选择m/z 943.5→797.5、m/z 943.5→635.4和m/z943.5→781.5为检测离子对。结果:尼泊尔柴胡皂苷K在0.1~5μg·mL^(-1)浓度范围与峰面积呈现出良好的线性关系(r=0.9920),仪器精密度RSD(n=6)为0.57%,样品重复性RSD(n=6)为0.95%。以掺杂藏柴胡不得过10%为限度,对27批银柴颗粒样品进行筛查,结果4批银柴颗粒分别掺杂藏柴胡59%、21%、32%、71%,超过拟定限度。结论:该方法经过方法学验证,灵敏、准确,可作为银柴颗粒中柴胡掺杂藏柴胡的检查方法,为打击藏柴胡掺伪提供有力技术支持。

感冒清热颗粒中藏柴胡检查方法的研究

目的:建立感冒清热颗粒中藏柴胡的检查方法,考察柴胡的掺伪情况。方法:采用液相色谱-串联质谱法,选择Agilent Poroshell 120 EC-C_(18)(100 mm×3.0 mm,2.7μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温35℃,进样量5μL;采用电喷雾离子源(ESI),选择m/z 943.5→797.5、m/z 943.5→781.2和m/z 943.5→635.5为尼泊尔柴胡皂苷K检测离子对,以多反应监测(MRM)模式进行测定。结果:尼泊尔柴胡皂苷K质量浓度在0.049~4.866μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9999),精密度、重复性良好(RSD分别为1.42%、2.24%)。以0.8μg·mL-1为掺伪判定浓度,220批感冒清热颗粒中有17批样品溶液尼泊尔柴胡皂苷K的浓度为1.2~3.5μg·mL^(-1),判定为检出藏柴胡,不合格率7.7%。结论:建立的方法准确、可靠,可用于感冒清热颗粒中柴胡的掺伪检查及市场监管。

感冒清热颗粒中藏柴胡掺伪检测方法的建立及掺伪限度拟定

目的建立感冒清热颗粒中藏柴胡掺伪检测方法,拟定藏柴胡掺伪限度。方法采用高效液相色谱-三重四极杆质谱联用技术,采用电喷雾离子源,以多反应监测模式进行负离子扫描,以m/z 943.6→635.5为定量离子对,对市售感冒清热颗粒及自制感冒清热标准样品中nepasaikosaponin K含量进行检测。同时,建立感冒清热颗粒中藏柴胡掺伪比例的计算方法,并以nepasaikosaponin K为指标,拟定藏柴胡掺伪限度。结果感冒清热颗粒中nepasaikosaponin K检测质量浓度的线性范围为0.051~20.200μg/mL(r=0.9991);精密度、重复性、稳定性(24 h)试验的RSD均小于2.50%;平均加样回收率为97.58%(RSD=2.09%,n=9);检测限为0.60μg/g,定量限为1.80μg/g。感冒清热颗粒中藏柴胡掺伪比例在5%~100%的范围内与nepasaikosaponin K峰面积的线性关系良好(r=0.9909)。15批市售感冒清热颗粒样品中,nepasaikosaponin K的含量为2.584~56.661μg/g;1批次样品超出拟定掺伪限度(10%),不合格率为6.67%。结论所建分析方法可用于感冒清热颗粒中藏柴胡掺伪的检测,拟定掺伪限度为10%。

柴胡属饮片中藏柴胡掺伪检测方法研究

目的以Nepasaikosaponin K为指标,建立柴胡属饮片中藏柴胡掺伪检测方法。方法采用高效液相色谱-串联质谱技术(HPLC-MS/MS),电喷雾负离子多反应监测模式,以m/z 943.6→635.5、m/z 943.6→797.4、m/z 943.6→781.5为特征离子对,对北柴胡、南柴胡、锥叶柴胡、竹叶柴胡和藏柴胡等5种常见柴胡属饮片中Nepasaikosaponin K含量进行检测。进一步考察Nepasaikosaponin K定量离子对峰面积与藏柴胡掺伪比例之间线性关系,建立柴胡属饮片中藏柴胡掺伪比例计算公式,并以Nepasaikosaponin K为指标,开展藏柴胡掺伪限度研究。结果Nepasaikosaponin K在藏柴胡中含量约为其他种柴胡的25~140倍。藏柴胡掺伪比例为0~100%范围内的混合样品中,定量离子对m/z 943.6→635.5峰面积与掺伪比例之间的线性关系良好。不同柴胡属掺伪模拟样品的计算掺伪量与实际掺伪量偏差在0.6%~1.4%之间。3批市售疑似掺伪北柴胡饮片中藏柴胡掺伪比例分别为14%、16%和27%。结论该分析方法专属性强,灵敏度高,测定结果准确,为柴胡饮片中藏柴胡的掺伪情况筛查与评价提供依据,同时为其他中药饮片的掺伪情况分析提供新的思路与方法。

超高效液相色谱-三重四极杆质谱法检测柴胡中藏柴胡的掺伪

目的:建立检测柴胡及藏柴胡中柴胡皂苷K成分的液相色谱-质谱法(LC-MS)检查方法,用以快速鉴别北柴胡是否为藏柴胡或混有藏柴胡。同时对16批藏柴胡和157批柴胡饮片中的柴胡皂苷K进行检测。方法:采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QqQ-MS)对柴胡及藏柴胡中柴胡皂苷K进行检测,色谱柱为Phenomenex Kinetex C18(100 mm×2.1 mm, 1.7μm),流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0~5 min, 15%A→25%A;5~30 min, 25%A→30%A;30~35 min, 30%A→90%A;35~36 min, 90%A→15%A;36~40 min, 15%A),流速0.3 mL·min^(-1),柱温25℃,进样量5μL;采用电喷雾离子源(ESI-),负离子模式扫描,多反应监测(MRM)模式检测,选择柴胡皂苷K特征分子离子峰m/z 943.5→797.3、m/z 943.5→635.3和m/z 943.5→781.3作为检测离子对。结果:16批藏柴胡中柴胡皂苷K的量远高于限度要求,157批柴胡饮片中有8批样品中均检出藏柴胡类成分柴胡皂苷K。结论:所建立的方法经方法学验证,专属性强,以期制定柴胡中藏柴胡成分检查项补充检验方法,提升柴胡饮片质量控制标准及真伪鉴别研究,可进一步有效控制其质量,保障临床疗效。

UPLC-MS/MS检测全粉投料中成药制剂中柴胡掺杂藏柴胡成分方法的研究

目的:以藏柴胡特征成分尼泊尔柴胡皂苷k为指标,建立超高效液相色谱-质谱法检测全粉投料中成药制剂中柴胡掺伪藏柴胡成分。方法:采用Agilent Eclipse Plus C18(100 mm×3 mm, 1.8μm)色谱柱,以水(A)-乙腈(B)为流动相,二元梯度洗脱(0~3 min, 75%A→70%A;3~12 min, 70%A→68%A;12~12.5 min, 68%A→10%A;12.5~15.5 min, 10%A),流速0.3 mL·min^(-1),柱温40℃,进样量1μL。采用电喷雾负离子化,多反应监测(MRM)模式,选择m/z 943.5→797.5、943.5→781.5和943.5→635.4为检测离子对。结果:尼泊尔柴胡皂苷k质量浓度在0.05~5μg·mL^(-1)范围与峰面积呈现出良好的线性关系(r=0.996 5),仪器精密度RSD(n=6)为1.4%,掺伪10%藏柴胡参比溶液重复性RSD(n=6)为1.8%,掺伪检测限为1%。对代表性品种逍遥丸、加味逍遥丸、补中益气丸、龙胆泻肝丸进行筛查,结果9批逍遥丸中有2批,8批加味逍遥丸中有4批,10批补中益气丸中有1批,10批龙胆泻肝丸中有2批含尼泊尔柴胡皂苷k超过拟定限度。结论:本方法经过方法学验证,专属性强,灵敏度高,可应用于全粉投料中成药制剂中柴胡掺杂藏柴胡成分的检查。