NOV对大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨NOV基因和蛋白对大鼠神经干细胞 (NSCs)增殖和分化的影响。方法 NOV基因重组质粒转染COS 7细胞和NSCs ,收集COS 7细胞和NOV基因修饰COS 7细胞的条件培养液 (简称COS CM和NOV CM ) ,作用于培养的NSCs ,3H TdR掺入检测NSCs的增殖 ,免疫细胞化学和流式细胞仪检测NSCs的分化。结果 ①NOV CM能明显促进NSCs对3H TdR的摄入 ,说明NOV CM能明显促进细胞的增殖 ,另外NOV CM的促细胞增殖作用具有一定的量效关系 ;②免疫细胞化学和流式细胞仪结果显示 ,NOV CM促进NSCs向神经元方向分化 ;③NOV基因修饰NSCs分化时 ,神经元的比例增高。

NOV基因修饰神经干细胞移植对损伤大鼠脊髓功能恢复的影响

目的 观察NOV基因修饰神经干细胞 (NSCs)移植对损伤大鼠脊髓功能的治疗作用。方法 40只Wistar大鼠随机分为对照组 (A组 )、损伤组 (B组 )、NSCs组 (C组 )和NOV NSCs组 (D组 ) ,每组 10只 ;将NSCs悬液注入C组切断脊髓处 ,D组注入等量的NOV基因修饰NSCs悬液 ,B组注射等量的生理盐水。术后 2个月 ,采用BBB评分和皮层体感诱发电位 (CSEP)观察大鼠脊髓功能的恢复程度。结果 ①术后 2月BBB评分B、C、D组大鼠有所恢复 ,但都未达到正常水平 ;C组和D组的大鼠恢复较好 ,评分较高 ,与B组有显著性差异 ;其中D组比C组恢复要好。②脊髓损伤后 ,各组的CSEP波均消失 ,术后 2月除B组外C组和D组的波形均有不同程度的恢复 ,但潜伏期延长 ,其中C组比D组更长 ,两者之间有显著性差异。

NOV对人神经干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨NOV蛋白对人神经干细胞 (HNSCs)增殖和分化的影响。 方法 NOV基因重组质粒转染COS 7细胞 ,收集COS 7细胞和NOV基因修饰COS 7细胞的条件培养液 (COS CM和NOV CM ) ,作用于培养的HNSCs,3H TdR掺入液闪检测HNSCs的增殖 ,免疫细胞化学和流式细胞仪检测HNSCs的分化。 结果 (1)NOV CM能明显促进HNSCs对3H TdR的摄入 ,说明NOV CM能明显促进HNSCs的增殖 ,另外NOV CM的促细胞增殖作用具有一定的量效关系 ;(2 )免疫细胞化学和流式细胞仪结果显示 ,NOV CM促进HNSCs向神经元方向分化。结论 NOV蛋白可能具有促进HNSCs增殖和分化的作用。

NOV蛋白免疫反应阳性神经元在鲢、鸡和几种哺乳动物脑的比较发育

目的：研究鲢、鸡、牛、犬和大鼠脑肾母细胞瘤过度表达基因（ｎｏｖ）蛋白免疫反应阳性神经元的比较发育。方法：免疫组织化学技术。结果：低等脊椎动物鲢脑仅有少量ＮＯＶ蛋白免疫反应阳性神经元，分布于延髓的一些核团、丘脑前核、丘脑后核、下丘脑背侧核、下丘脑外侧核。鸡脑ＮＯＶ蛋白免疫反应阳性神经元除广泛分布于脑干外，小脑、间脑和大脑纹状体的多数脑区阳性神经元亦较多。哺乳动物牛、犬和大鼠脑ＮＯＶ蛋白免疫反应阳性神经元广泛分布，脑干、小脑、间脑和大脑都检测到强烈阳性信号。结论：ｎｏｖ基因在从低等脊椎动物到高等脊椎动物的进化过程中非常保守，提示它在脑神经元生长。

人nov基因全长cDNA克隆、测序及其组织表达谱分析

采用特异性mRNA富集技术,从人早期胚胎中得到人nov基因(novH)的cDNA克隆,序列分析表明,该基因cDNA序列由2389个碱基对组成,包含一段长1071bp的开放阅读框(ORF),3′端含有加尾信号AATAAA和ply(A)尾巴.Northern杂交显示,在Hela细胞和肾上腺组织中有表达的novHmRNA,大小约为2.5kb;多组织RNA点杂交分析结果进一步表明,novH基因在肾上腺和主动脉中的表达水平相对较高,在成人肾、肝、肺和小肠组织中亦有少量的表达.

nov基因的表达与脑的种系发育分化平行相关

用地高辛标记的cRNA探针原位杂交组织化学方法研究了鲢、鸡、牛、犬和猫脑肾母细胞瘤过度表达基因阳性神经元的比较发育。结果显示 ,低等脊椎动物鲢脑仅有少量novmRNA阳性神经元 ,分布于延髓的迷走神经背核、三叉神经背核、丘脑前核、丘脑后核、下丘脑背侧核、下丘脑外侧核。鸡脑阳性神经元除广泛分布于脑干外 ,小脑、丘脑的多数核团、下丘脑的背侧核、腹侧核和后核以及大脑纹状体等多数脑区也有一定分布。哺乳动物牛、犬和猫脑中novmRNA阳性神经元广泛分布 ,在脑干、小脑、间脑和大脑都检测到强烈阳性信号。以上结果表明 ,在从低等脊椎动物到高等脊椎动物的进化过程中nov基因的表达也从低级中枢向高级中枢扩展 ,提示该基因的表达与脑的种系发育、脑功能的分化平行相关。

nov基因在不同种属动物脊髓中的表达

用地高辛标记的cRNA探针原位杂交方法研究了鲢、青蛙、蛇、鸡、牛、犬和猫脊髓中肾母细胞瘤过度表达基因（nov）mRNA阳性神经元的种系发育。结果显示，低等脊椎动物鲢、青蛙和蛇脊髓中仅有少量novmRNA阳性神经元，分布于灰质腹角。鸡脊髓中阳性神经元除主要分布于脊髓腹角外，中央灰质也有少量分布。哺乳动物牛、大和猫脊髓灰质中novmRNA阳性神经元分布广泛，背腹角、中央灰质及中央核区都检测到很强的杂交信号。以上结果表明，nov基因在从低等脊椎动物到高等脊椎动物的进化过程中非常保守，这种保守性提示nov基因在脊髓神经元发育、分化及正常生理功能中可能具有重要作用。

真皮间充质干细胞的分离培养及其NOV基因的表达

目的:分离培养大鼠真皮来源成体多能干细胞并研究其NOV基因表达。方法:分离培养新生大鼠真皮间充质干细胞,采用形态学观察及免疫组化法进行鉴定。用脂质体法将构建的NOV基因真核表达载体转染入大鼠真皮多能干细胞中,在荧光倒置显微镜下观察转染产物,RT-PCR法检测转染细胞中NOV基因表达。结果:新生大鼠真皮间充质干细胞86%处于G0/G1期,多向诱导后可分化为神经细胞及中胚层来源细胞。NOV重组质粒体外转染大鼠真皮多能干细胞后,转染细胞中检测到NOV基因。结论:大鼠真皮组织中存在着成体多能干细胞,具有多胚系分化潜能。该细胞可作为NOV基因表达的细胞载体。

NOV基因真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的表达

目的 获得NOV基因真核表达载体并检测其在细胞中的表达。方法 利用逆转录 多聚酶链反应(RT PCR)方法,从新鲜大鼠大脑组织的总cDNA中扩增出1165bp的NOV基因的cDNA编码区序列,然后用HindⅢ和BamHⅠ双酶切后定向克隆入真核表达载体pcDNA3 1 Myc His(+ ) lacZ质粒中,用脂质体法将载体转染入COS 7细胞中,用Westernblot和免疫细胞化学方法检测其表达情况。结果 NOV基因cDNA已经正确克隆到真核表达载体pcDNA3 .1 Myc His(+ ) lacZ质粒中;体外转染入COS 7细胞中后,可见转染细胞有NOV蛋白的表达。结论 本实验所构建的重组质粒为NOV基因的作用研究提供了有利的分子工具。

NOV在真皮来源大鼠间充质干细胞中的表达及活性检测

目的:检测肾母细胞瘤过度表达(NOV)基因在真皮来源大鼠间充质干细胞(DMSCs)中的表达及活性。方法:NOV基因重组质粒转染DMSCs,在荧光倒置显微镜下观察转染产物,RT-PCR法检测转染细胞中NOV基因表达。收集NOV基因修饰DMSCs的条件培养液(简称NOV-CM),作用于对照组DMSCs及转染了NOV基因的DMSCs(简称NOV-DMSCs),检测NOV基因及其分泌蛋白在DMSCs分化中的活性作用。结果:NOV重组质粒体外转染入大鼠真皮多能干细胞后,转染细胞中检测到NOV基因。免疫荧光检测结果显示,NOV基因修饰及NOV-CM培养DMSCs时,DMSCs向神经元方向分化的比例增高,且细胞突起较长。结论:NOV基因可在DMSCs中稳定表达,可能具有促进DMSCs向神经元分化的作用。

nov基因的研究

nov基因是最近发现的一种新的细胞癌基因 ,在细胞的增殖、癌变及胚胎发育过程中可能起着重要的调节作用 .文章综述了nov基因的发现、结构功能、表达调节特点以及与相关基因的关系 .

大鼠中枢神经系统肾母细胞瘤过度表达基因mRNA神经元的发育——原位杂交与RT-PCR研究

目的研究大鼠ＣＮＳ肾母细胞瘤过度表达基因（ｎｏｖ）ｍＲＮＡ神经元的发育。方法原位杂交组织化学和逆转录ＰＣＲ。结果Ｐ０～Ｐ４：原位杂交方法最早检测到ｎｏｖｍＲＮＡ神经元是Ｐ０，Ｐ０～Ｐ４阳性信号均较弱，分布于脑桥和脊髓等。Ｐ５：丘脑部分核团和海马锥体细胞层观察到阳性神经元。Ｐ８：ｎｏｖｍＲＮＡ神经元数目增多，边缘系统及丘脑明显阳性；大脑皮质和下丘脑阳性较弱。Ｐ１５：丘脑、下丘脑和大脑皮质ｎｏｖｍＲＮＡ神经元增多，其余核团稳定在Ｐ８水平。Ｐ３０：在脑干观察到强烈的阳性信号，大脑皮质强阳性，海马、丘脑和下丘脑标记较强。Ｐ６０：脑桥和延髓的标记仍然很强，大脑皮质、丘脑和下丘脑的阳性信号稳定在Ｐ３０水平。Ｐ３００：ｎｏｖｍＲＮＡ神经元显著减少，阳性信号明显减弱。逆转录ＰＣＲ检测结果与原位杂交所得结果基本相符，在出生前２ｄ检测到ｎｏｖｍＲ－ＮＡ，其表达高峰出现在Ｐ３０～Ｐ６０之间，随之下降，Ｐ１５０和Ｐ３００表达弱。结论ｎｏｖ基因与其他早期反应基因不同，其表达高峰不是在胚胎发育早期，而是在近性成熟时期，提示ｎｏｖ基因主要在神经系统发育、分化及功能活动中起作用。

NOV基因真核表达载体的构建及在大鼠真皮多能干细胞中的表达

目的构建肾母细胞瘤过度表达（NOV）基因真核表达载体并检测其在真皮多能干细胞中的表达。方法利用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）方法，以新生大鼠大脑组织总RNA为模板，扩增出1l178bp的NOV基因的cDNA编码区序列，然后用Hind Ⅲ和BamH Ⅰ双酶切后定向克隆入真核表达载体pEGFP-N1质粒中，用脂质体法将重组质粒转染入大鼠真皮多能干细胞中，荧光显微镜观察转染产物．RT—PCR法检测转染细胞中NOV基因表达。结果NOV基因cDNA正确克隆到真核表达载体pEGFP-N1质粒中；重组质粒体外转染入大鼠真皮多能干细胞后，可见转染细胞有绿色荧光表达，转染细胞中检测到NOV基因。结论构建成功NOV基因重组质粒，并能在大鼠真皮多能干细胞中稳定表达，为NOV基因及真皮多能干细胞的作用研究提供了有利的分子工具。

Developmental study on the immunocytochemical localization of NOV protein-containing neurons in the rat brain

The localization and development of nephroblastoma overexpressed gene (nov) protein-immunoreactive neurons in the brain of E8-P300 rats have been studied using immunocytochemistry and image analysis. Results are as follows: No NOV protein-immunoreactive cells were detected in the rat brain during prenatal development. A few of positive cells were detected at the early postnatal stage. However, the number and the immunoreactivity of these cells increased gradually at later stages. NOV-immunoreactive cells were widely distributed in the rat brain during P30-P60. The number of immunoreactive cells and their intensity also peaked within this stage. The number and staining intensity of NOV-positive cells decreased gradually with age. The positive cells were mainly located in cingulate cortex, striatum, hippocampus, hypothalamus, cerebellum and brain stem. The present results indicate that nov may play an important role in the development and differentiation of brain as well as maintaining the function of