Studies on Antineoplastic Constituents from Marine Bryozoan Bugula neritina Inhabiting South China Sea (Ⅲ): Isolation and Structural Elucidation of Bryostatins 10,11 and 18

Six active compounds are isolated from the marine bryozoan Bugula neritina,inhabiting the Nanwan Bay in the South China Sea, using the bioassay-guided method with a combination of extraction and partitionation with suitable solvents as well as multiple column chromatographies ( Sephadex LH-20, ODS and preparative HPLC).Their structures are identified as known bryostatins-bryostatins 4, 5, 6, 10, 11 and 18 through intensive analysis of the data of high resolution 2D NMR (600 MHz, DQF-COSY,TOCSY, HMQC and ROESY) and ESI-MS. Among them, bryostatins 10, 11 and 18 are for the first time obtained from this bryozoan in the South China Sea and they show significant antineoplastic activities in vitro.

我国近岸多室草苔虫(Bugula neritina)的群体遗传分化研究

基于线粒体控制区序列和SLAF-seq,对重要药源生物多室草苔虫的群体遗传分化水平开展了研究。控制区序列中检测到8个单倍型,单倍型多样性(h)和核苷酸多样性(π)分别为0.130 7和0.000 7,单倍型网络图和NJ系统进化树的结构都较简单,无明显拓扑结构。中性检验和核苷酸不配对分析结果均表明多室草苔虫未经历过大规模群体扩张。Fst和AMOVA分析显示遗传变异主要来自于群体内。SLAF建库共开发得到214 409个SLAF标签,其中多态性SLAF标签23 437个,共开发出99 432个SNP位点。群体间的遗传距离较小,且低于群体内的遗传距离。基于SNP所做的系统发育树和群体遗传结构分析表明,各群体之间没有显著的遗传结构。综上所述,我国沿海多室草苔虫的遗传多样性水平较低,不同地理群体之间不存在显著的遗传结构。多室草苔虫较强的扩散能力是造成上述结果的主要原因。另外,本研究还验证和讨论了SLAF-seq应用在海洋生物群体遗传分化研究中的可行性和优势。

金属离子和神经递质对多室草苔虫幼虫附着的影响

研究了4种离子(K+、Ca2+、Mg2+、NH4+)和五种神经递质(r-氨基丁酸,缩写为GABA、乙酰胆碱、L-多巴、多巴胺、5-羟色胺)不同浓度溶液对多室草苔虫Bugula neritina幼虫附着的影响。结果表明,10—70mmol.L-1的K+和高于10mmol.L-1的NH4+均有效地诱导幼虫附着在培养皿底部,而1—50mmol.L-1的Mg2+则明显延长幼虫的浮游时间并抑制幼虫的最终附着。Ca2+对幼虫的附着没有明显的影响。10-2mol.L-1的GABA可以诱导幼虫附着,但低于该浓度则没有明显的作用。乙酰胆碱(10-2—10-3mol.L-1)、L-多巴(10-3—10-5mol.L-1)和多巴胺(10-3—10-4mol.L-1)均诱导幼虫的附着行为,但是却不能诱导幼虫的最终附着,这可能是由于这些物质限制了幼虫的活动能力,进而降低了其在探索过程中寻找到合适基质的机率。10-3—10-5mol.L-1的5-羟色胺通过强迫幼虫维持浮游而抑制幼虫的最终附着,据此推测5-羟色胺及其衍生物应用于开发无毒型的防污漆会有良好的前景。该研究为进一步研究苔藓虫幼虫的附着机制以及开发无毒环境友好型防污物质或是人工养殖苔藓虫提供了科学依据。

总合草苔虫的化学成分研究

对采自深圳大亚湾的总合草苔虫Bugula neritinaL.中化学成分进行研究,从石油醚层和正丁醇层分离得到7个化合物。利用波谱分析和文献对照的方法,确定它们的结构分别为胆甾醇(Ⅰ);胆甾-4-烯-3-酮(Ⅱ);胆甾醇肉豆蔻酸酯(Ⅲ);3,β5,α9α-三羟基-(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-6-酮(Ⅳ);3,β5,α6β-三羟基-(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯(Ⅴ);尿嘧啶(Ⅵ);胸腺嘧啶(Ⅶ)。其中化合物Ⅱ-Ⅶ为首次从总合草苔虫中分离得到。

中国南海总合草苔虫中新的抗癌活性成分Bryostatinl9

自我国南海采集的总合草苔虫中,经多种层析方法分离到一种新的大环内酯化合物,应用化学方法和现代光谱技术(UV,IR,ESI-MS,~1HNMR,^(13)CNMR,2DNMR)确定了它的化学结构,并命名为bryo-statin19。体外抗癌活性试验表明,该化合物对U937单核细胞白血病细胞株有极强的杀灭作用,(ED_(50)=2.8×10^(-3)μg/ml),同时对HI-60早幼粒白血病和K562红白细胞白血病等细胞株均有显著的抑制作用。

中国南海总合草苔虫抗癌活性成分研究──Ⅱ 总草苔虫内酯的超强抗癌活性

目的：研究中国南海草苔虫中的大环内酯类抗癌活性成分，从中寻找高效的新型抗癌剂。方法：以体外抗癌活性为指标，将活性评价与化学分离相结合，采用凝胶柱层析（SephadexLH－20），反相硅胶快速柱层析（CDS）和制备性高效液相层析等先进分离技术，对南中国海的总合草苔虫样本进行总活性成分的分离制备。采用MTT法考察总活性成分对K562、U937肿瘤细胞株的体外抑制活性。结果：从该动物中分离制备了纯度高达95％以上的总草苔虫内酯（bryostatins），此总活性成分对红白细胞白血病细胞株K562具有超强的杀灭作用（ED50＜10－18μg／ml），是天然产物中对K562肿瘤细胞抑制作用最强的化学成分。结论：我国南海总合草苔虫资源丰富，含有其独特的其超强抗癌活性的草苔虫内酯，为今后的新药研制与开发展示了美好前景。

中国南海总合草苔虫中抗肿瘤活性成分研究——Ⅰ.Bryostatin 4～6的分离鉴定及其体外抗肿瘤活性

以中国南海海域大量生长的总合草苔虫为原料,将化学分离和活性追踪相结合,经溶媒提取和多种层析方法(Sephadex LH-20,ODS,HPLC等)分离,得到3个活性单体。采用高分辨核磁共振仪(600MHz)测定了它们的DQF-COSY、HMQC、TOCSY、NOESY、ROESY等二维相关谱。利用波谱解析和化学方法,分别将其鉴定为:bryostatin 4、bryostatin 5、bryostatin 6,并对其~1HNMR和^(13)CNMR数据做了订正。所有化合物均系首次从中国产总合草苔虫中获得,并在体外抗肿瘤活性筛选中都表现出显著的抗肿瘤活性。

南海多室草苔虫甾醇类化学成分研究

目的:研究南海多室草苔虫(Bugula neritina L.)的甾醇类化学成分。方法:采用乙醇提取,硅胶柱色谱,Sephadex LH-20柱色谱等手段进行分离纯化,通过波谱分析,结合文献对照,鉴定化合物结构。结果:从多室草苔虫石油醚部位分离到10个甾醇类化合物,鉴定为:胆甾-4-烯-3-酮(Ⅰ);胆甾醇(Ⅱ);3β,5α,9α-三羟基-(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-6-酮(Ⅲ);24-甲基-5α-胆甾-72,2-二烯-3β,56,β-三醇(Ⅳ);3β-羟基-7-甲氧基-胆甾-5-烯(Ⅴ);过氧化麦角甾醇(Ⅵ);3β-羟基-胆甾-5-烯-7-酮(Ⅶ);6β-羟基-胆甾-4-烯-3-酮(Ⅷ);胆甾-5-烯-3β,7β-二醇(Ⅸ);胆甾-5,22(E)-二烯-3β7,α-二醇(Ⅹ)。结论:化合物Ⅴ～Ⅹ为首次从该种多室草苔虫中得到。

中国南海总合草苔虫抗癌活性成分研究(IV)Bryostatin8,16的分离与结构鉴定

以体外抗癌活性为指标 ,采用多种层析分离技术 ,从采自广东大鹏湾海域的总合草苔虫中追踪分离得到 8个活性单体。利用电喷雾离子质谱 (ESI- MS)和高分辨 (60 0 MHz)核磁共振二维谱技术测定活性化合物的结构 ,分别鉴定为 :bryostatin 4 ,bryostatin 5 ,bryostatin 6,bryostatin 8,bryostatin 10 ,bryostatin 11,bryostatin16,bryostatin18。其中 ,bryostatin8( )和 bryostatin16( )是首次从南海总合草苔虫中获得 ,并在体外表现出显著的抗癌活性。

海洋生物活性物质总草苔虫内酯体外抗SARS相关冠状病毒的初步研究

目的 :测试海洋生物活性物质总草苔虫内酯对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒 (SARS- Co V )的作用。 方法 :以Vero- E6细胞作为病毒宿主细胞 ,以细胞致病效应 (CPE)和感染细胞保护率 (CPR)为检测指标 ,测试海洋来源的化合物总草苔虫内酯对 SARS- Co V感染细胞的保护作用。 结果 :在 4、2 0、10 0μg/ m l 3个质量浓度下 ,总草苔虫内酯预防 SARS- Co V感染的 CPE分别是 、 、 ,CPR分别是 7%、6 %、39% ;总草苔虫内酯治疗 SARS- Co V感染的 CPE分别是 、 、 ,CPR分别是 33%、5 8%、4 0 %。 3个质量浓度总草苔虫内酯的细胞毒性率均不超过 5 0 %。 结论 :在体外筛选模型中 ,总草苔虫内酯在4μg/ m l以上浓度时显示有一定的对抗 SARS- Co

高效液相色谱-质谱法鉴定总合草苔虫中的草苔虫内酯成分

采用高效液相色谱分离与质谱检测的联用技术,对总合草苔虫中的草苔虫内酯成分进行定性分析。在以体积比为80∶20的甲醇 水溶液为流动相、采用ODS柱进行分离的色谱条件下,10种草苔虫内酯成分均可获得良好的分离。分析结果表明:深圳大亚湾产地的总合草苔虫中共含有9种已知和1种未知的草苔虫内酯成分。已知成分分别是bryostatin4,5,6(9),7,8,10,16,17,18,其中bryostatin7和17是首次从中国海域总合草苔虫中发现的2种痕量草苔虫内酯。该方法简便、准确、灵敏度高,可以很好的对总合草苔虫原药材及提取物中的草苔虫内酯成分进行定性分析。

中国南海总合草苔虫抗癌活性成分研究:一个新的大环内酯的分离鉴定(英文)

目的:研究中国南海总合草苔虫中的抗癌活性成分。方法:通过分级萃取和多种硅胶柱层析(Sephadex LH-20凝胶过滤、ODS反相层析和HPLC)追踪分离抗癌活性成分;利用电喷雾离子质谱(ESI-MS)和高分辨(600 MHz)核磁共振二维谱技术鉴定化合物的结构。结果:分离得到一个新的具有显著抗肿瘤活性的大环内酯bryostatin 19(1)。同时还首次自中国海域的该种苔虫中分离鉴定了5个bryostatins类大环内酯抗癌活性化合物:bryostatin 4,5,6,10,18。Bryostatin 19显示很强的体外抗癌活性,对U937细胞的ED50值为3.2 nmol／L。结论:我国南海总合草苔虫资源丰富,并且含有新结构的抗癌活性草苔虫内酯。本研究结果为今后的新药研制与开发提供了参考。

中国南海总合草苔虫抗癌活性成分研究III Bryostatin10,11,18的分离鉴定及其体外抗肿瘤活性

对采自广西北海的总合草苔虫进行抗癌活性成分的追踪分离 ,经溶媒提取和多种层析方法 (SephadexL H- 2 0 ,ODS,HPL C等 )分离 ,得到 6个活性单体。利用电喷雾离子质谱 (ESI- MS)和高分辨核磁共振 (6 0 0MHz)二维谱技术 (DQF- COSY,HMQC,TOCSY,ROESY等 ) ,分别将其鉴定为 :bryostatin 4 ,bryostatin 5,bryostatin 6 ,bryostatin 10 ,bryostatin 11,bryostatin 18。其中 ,bryostatin 10 ,bryostatin 11,bryostatin 18是首次从中国产总合草苔虫中获得 ,并在体外表现出显著的抗癌活性。

海洋抗肿瘤活性大环内酯类化合物化学成分研究近况

最近,人们已从多种海洋生物中发现许多具有应用价值的生理活性物质。其中,抗肿瘤活性物质的开发研究尤为盛行。目前,人们已经分离得到许多在体内试验中具有明显抗肿瘤活性的化合物,并且确立了它们的化学结构,其中包括类萜类化合物、生物碱,肽类化合物、大环内酯类化合物、类前列腺素化合物、聚醚类化合物等。其中,已有数种大环内酯类化合物很有可能作为抗癌药物进入临床。bryostatin 1则是它们的代表性化合物之一。目前,美国National Cancer Instituie已经开始对该化合物进行临床研究。它是由作者(釜野)研究小组在美国亚利桑拿州立大学癌研究所开发研究出的一种新型化合物,经过进一步研究又分离得到了bryostatin 2(24)～13(35),并确立了它们的化学结构。因此,本文将对bryostatin类化合物的化学性质以及其生理活性作详细地综述。另外,还将论述halichondrin类化合物(14～21)和Aplyronine(22)。它们是最近几年在日本发现的,在体内试验中具有很强的抗肿瘤活性的一系列新型化合物。再者,本文还将概述其它一些重要的、具有抗肿瘤活性的大环内酯类化合物,即aplysiatoxin(Ia～Ic), latrunculinA(2), acutiphycin(3),tedanolide(4), swinholide A(5), bistheonellde A(7a), amphicinolides(8～10), kabiramides(11a 11e), ulapualide(12a, 12b)以及patellazole B(13)。