原癌基因HER2/neu表达产物p185蛋白免疫原性研究

用表达ｐ１８５蛋白ＨＥＲ２／ｎｅｕ转基因３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞裂解物免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经３次免疫后，免疫小鼠脾细胞对表达ｐ１８５蛋白的３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞呈现较强的增殖反应（平均刺激指数分别为ＳＩ＝３．１５±１．８８），而对未转染ＨＥＲ２／ｎｅｕ基因的３Ｔ３细胞的应答较弱（ＳＩ＝１．１４±０．９７）。并检测到１号免疫鼠脾细胞对３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞有特异杀伤作用。免疫鼠血清中出现高水平的抗ｐ１８５抗体（ＯＤ均值＝１．０２±０．１６），较正常对照组（ＯＤ均值＝０．３６±０．１０）有显著差异（Ｐ＜０．００１），表明ＨＥＲ２／ｎｅｕ表达产物ｐ１８５蛋白具有免疫原性，用于免疫小鼠可诱导出对ｐ１８５蛋白的特异免疫应答反应。

HER2/neu原癌基因胞外区片段DNA克隆及其在小鼠中诱导的抗体应答

目的：研究ＨＥＲ２／ｎｅｕ原癌基因胞外区片段（ＥＣＤ）ＤＮＡ直接肌肉注射在小鼠体内表达，体液免疫状况，利用小鼠流产模型观察其体内效应。方法：克隆并构建了人及大鼠ＨＥＲ２／ｎｅｕ原癌基因胞外区片段真核表达载体ｐＣＤＮＡ３－Ｘ，采用肌肉直接注射的方法免疫小鼠，分析目的基因在小鼠体内的表达及其诱导的兔疫应答。结果：在质粒ＤＮＡ直接注射部位可检测到目的基因的表达，并诱导了针对ＨＥＲ２／ｎｅｕ的抗体反应；同时诱发小鼠流产，使免疫鼠产仔数减少，可观察到流产结节形成。结论：通过基因免疫，可诱导针对ＨＥＲ２／ｎｅｕ原癌基因产物的有效免疫应答。

原癌基因HER-2/neu在恶性肿瘤中的研究进展

分子肿瘤学的发展和对癌基因及其表达研究的深入,为肿瘤的诊断和治疗开辟了新途径。HER-2/neu原癌基因编码的HER-2蛋白在细胞信号传导中发挥了重要作用,是细胞增殖、分化和存活的重要调节因子。HER-2蛋白的过度表达与许多有害细胞特性有关,包括细胞生长、血管形成以及细胞生存能力的增强。HER-2蛋白在多种肿瘤组织中的过表达为抗肿瘤治疗提供了理想靶点,成为近年来临床医师和病理学家关注的热点。本文就HER-2/neu基因与恶性肿瘤的研究现状作一综述。

HER-2/neu胞外配体结合区基因的克隆及原核表达

目的 克隆HER 2 /neu胞外配体结合区基因 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。方法 用PCR技术扩增HER 2 /neu胞外配体结合区的cDNA片段 ,并将该片段插入pET 2 8a(+)原核表达载体中 ,实现插入基因的融合表达 ;用SDS PAGE和蛋白免疫印迹法分别测定表达产物的相对分子质量及特异性。结果 构建的重组质粒在大肠杆菌中获得高效稳定的表达 ,表达产物的相对分子质量与预期值一致 ,且所表达蛋白可被抗HER 2 /neu的特异性抗体识别。结论 获得了HER 2 /neu胞外配体结合区基因在原核系统中的表达 ,为HER 2

乳癌术后方对HER2/neu转基因小鼠乳腺癌发生中免疫应答的影响

目的探讨癌基因人类表皮生长因子受体2(HER2/neu)在乳腺癌发生中引发的免疫应答和乳癌术后方在防治乳腺癌中的免疫学机制。方法选用HER2/neu转基因自发乳腺癌小鼠模型,自5周龄起灌饲中药乳癌术后方,观察小鼠的乳腺癌发生情况,并在15及25周龄时检测小鼠肿瘤发生过程中T细胞免疫反应及相关细胞因子的变化。结果乳癌术后方能够明显延缓和减少转基因小鼠原发乳腺癌的生成,同时还能上调荷瘤小鼠脾淋巴细胞中T细胞含量,促进荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖作用,并可诱导白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-12(IL-12)和干扰素-γ(IFN-γ)等细胞因子的分泌。结论HER2/neu转基因小鼠与正常同品系未转基因小鼠的免疫功能存在着明显的差别。乳癌术后方预防和延缓乳腺癌发生的作用可能是通过提高转基因小鼠的自身抗肿瘤免疫反应来实现的。

Kaposi肉瘤Bcl-2原癌基因产物的表达观察

Ｋａｐｏｓｉ肉瘤Ｂｃｌ－２原癌基因产物的表达观察普雄明①石得仁①沈大为②近年来有关细胞凋亡机制与肿瘤关系的研究已成为肿瘤分子生物学研究的一项重要内容，而Ｂｃｌ－２原癌基因产物可抑制细胞凋亡，观察其在某些肿瘤组织中的表达水平，对于研究细胞凋亡机制在肿瘤...

原癌基因蛋白质C-erbB-2在乳腺良恶性病变中表达的意义

目的 :检测原癌基因蛋白质 C- erb B- 2在乳腺良恶性病变中的表达及意义。方法 :对 1 1 1例乳腺良恶性病变的石蜡切片标本进行免疫组织化学染色。结果 :乳腺良恶性病变中乳腺导管内乳头状瘤病的 C- erb B- 2阳性率为 31 .3% ,与乳腺纤维腺病和纤维腺瘤比较差异有显著性 ( P<0 .0 1 ) ,乳腺癌 C- erb B- 2的阳性率为 74.3% ,与良性病变比较差异有显著性 ( P<0 .0 1 ) ;乳腺癌 C- erb B- 2表达与肿瘤大小和组织学分级呈正比 ( P<0 .0 5 ) ,与激素受体 ( ER、PR)水平及 5年生存期呈反比( P<0 .0 5 ) ,与淋巴结是否转移无关。结论 :C- erb B- 2表达的乳腺导管内乳头状瘤病容易癌变 ,C- erb B- 2过度表达的乳腺癌组织分化差、生存期短、预后不好。C- erb B-

正常子宫内膜、子宫内膜增殖症及子宫内膜癌ras、HER-2/neu癌基因表达的研究

为研究ｒａｓ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ癌基因的表达与子宫内膜癌发生、发展的关系，本文用免疫组化ＡＢＣ法检测了２３例正常子宫内膜、４４例子宫内膜增殖症及１０３例子宫内膜癌组织中ｒａｓ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ癌基因的表达情况。结果表明：在子宫内膜非典型增生中即存在ｒａｓ基因的过度表达，过度表达率为２０％，子宫内膜癌ｒａｓ的过度表达率为１８．４％，且ｒａｓ的过度表达与子宫内膜癌的病理分级、分期及患者的生存率无关，说明ｒａｓ癌基因的异常表达可能与癌形成的早期有关。子宫内膜癌中ＨＥＲ－２／ｎｅｕ的过度表达率为２７．２％，ＨＥＲ－２／ｎｅｕ的过度表达与子宫内膜癌的分期无关，与分级及患者的预后有关，存在ＨＥＲ－２／ｎｅｕ过度表达者的生存率低于无过度表达者，前者的５年生存率为５４．８％，后者为７９．６％，结果提示ＨＥＲ－２／ｎｅｕ的过度表达是判断子宫内膜癌预后的生物学指标。

HER-2/neu基因在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨HER-2/neu基因在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化法检测90份非小细胞肺癌组织及20份正常肺组织HER-2/neu基因的表达。结果 HER-2/neu基因在90份非小细胞肺癌组织中过度表达率为32.2%(29/90),20份正常肺组织中无过度表达。非小细胞肺癌的HER-2/neu基因的过度表达与年龄、性别、分化程度均无相关性(P均>0.05),与肿瘤的病理类型、淋巴结转移、临床分期、生存期相关(P均<0.05)。结论检测非小细胞肺癌组织中HER-2/neu基因的表达,有助于判断其预后,也为抗HER-2/neu基因的分子靶向治疗应用于非小细胞肺癌中提供理论依据。

多发性内分泌腺瘤病2A家系的RET原癌基因突变研究

目的 检测一个多发性内分泌腺瘤病2A(MEN 2A)型家系的RET原癌基因突变情况。方法 提取16名家系成员外周血基因组DNA,对RET原癌基因第11外显子进行聚合酶链反应(PCR),PCR产物进行直接基因测序。结果 家系中1例病理确诊嗜铬细胞瘤的患者存在RET原癌基因第11外显子634密码子错义突变;另外筛查出2名家系成员为该突变基因携带者,其中1例经B超发现甲状腺结节性病灶伴血清降钙素升高。结论 MEN 2A的诊断达到了基因水平,对家系基因筛查可以早期诊断该疾病。

RNA干扰靶向沉默HER2/neu基因对卵巢癌细胞株SK-OV-3的影响

目的:观察siRNA表达质粒稳定转染靶向沉默HER2/neu基因对SK-OV-3卵巢癌细胞株的影响。方法:针对HER2/neu基因序列构建短发夹状siRNA真核表达载体(pGenesil-1-HER2/neu),转染卵巢癌细胞株SK-OV-3,G418筛选出稳定转染株后,采用RT-PCR和Western Blot法观察HER2/neu基因的沉默效果;CCK-8比色分析检测细胞体外增殖活力;流式细胞仪检测细胞周期。结果:测序证实成功构建HER2/neu的2个短发夹状siRNA真核表达质粒;稳定转染SK-OV-3细胞后,转染了特异性HER-2/neu siRNA的细胞HER-2/neu mRNA及p185蛋白水平均明显低于亲本细胞及转染无义对照序列的细胞;CCK-8比色分析显示HER-2/neu基因沉默的细胞存活分数明显低于HER-2/neu基因高表达的细胞(P=0.000);流式细胞仪细胞周期分析也显示,HER-2/neu基因沉默的细胞处于凋亡状态及非增殖期的比例明显增加(P均<0.01),而处于合成期的比例却显著减少(P≤0.001)。结论:靶向HER2/neu基因的短发夹状siRNA可从转录及翻译水平有效地沉默HER-2/neu基因;HER-2/neu基因沉默的SK-OV-3卵巢癌细胞增殖明显受抑制。

原癌基因c-erbB-1和c-erbB-2在人脑胶质瘤中的表达

目的：探讨原癌基因c－erbB－1和c－erbB－2表达与人脑胶质瘤发生发展的关系．方法：采用免疫组化SABC法检测52例人脑胶质瘤，2株人脑胶质瘤细胞系及8例正常人脑组织中c－erbB－1和c－erbB－2蛋白的表达．结果：c－erbB－1蛋白在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤组织中阳性率分别为50．0％，68．8％，81．8％和92．3％，低恶性度（Ⅰ～Ⅱ级）胶质瘤（60．7％）和高恶性度（Ⅲ～Ⅳ级）胶质瘤（87．5％）间阳性率差异显著（P＜0．05）；c－erbB－2蛋白在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤组织中阳性率分别为75．0％，87．5％，90．9％和92．3％，低恶性度胶质瘤（82．1％）和高恶性度胶质瘤（91．7％）间阳性率无显著差别（P＞0．05）；c－erbB－1和c－erbB－2表达强度均随胶质瘤恶性程度增高而增强，在高恶性度和低恶性度胶质瘤间差异均极显著（P＜0．01）；c－erbB－1和c－erbB－2在2株人脑胶质瘤细胞系中均有表达，在8例正常人脑组织中均无表达；c－erbB－1和c－erbB－2二者表达密切相关（P＜0．05）．结论：c－erbB－1和c－erbB－2在人脑胶质瘤中普遍表达，并随胶质瘤恶性程度增高而表达增强，c－erbB－1和c－erbB－2共表达可能是人脑胶质瘤发生发展过程中的重要事件．

原癌基因c-erbB2和EGFR表达与大鼠肺纤维化的相关性

目的研究原癌基因c-erbB2和肺表皮生长因子受体(EGFR)的表达与大鼠肺纤维化的相关性,探讨肺纤维化的发生机制。方法采用博莱霉素气管注射法制造鼠肺纤维化模型。30只Wistar大鼠随机分为模型组和对照组,分别于第1、14、28天处死大鼠5只并留取标本,采用免疫组化SP法检测在不同程度肺纤维化条件下c-erbB2和肺内源性EGFR的表达,分析其与肺纤维化的相关性。结果①模型组c-erbB2和EGFR表达在各时间点均与对照组有统计学差异(P<0.01);②模型组c-erbB2表达1d最显著,EGFR表达28d达到顶峰,与同组其他时间点均有统计学差异(P<0.01);③模型组c-erbB2和EGFR水平在第14天与最低水平组(分别为第28天和第1天)比较有统计学差异(P<0.01);④模型组c-erbB2和EGFR表达与肺纤维化程度密切相关(相关系数r分别为-0.835和0.77,P<0.01)。结论 c-erbB2活化的同时,EGFR表达也逐渐增强,且c-erbB2、EGFR的活化水平与肺纤维化程度密切相关;c-erbB2和EGFR激活可能参与了肺纤维化的发生。

人肝癌细胞中原癌基因Pokemon上调Shp2的表达

目的研究人肝癌细胞中Pokemon对Shp2表达的影响。方法通过RT-PCR、Real time PCR和Western blot方法检测人肝癌细胞系QGY-7703和人正常肝细胞系HL-7702中Pokemon和Shp2的mRNA和蛋白表达水平差异;并通过瞬时转染si-Pokemon RNA沉默QGY-7703细胞中Pokemon使其低表达,再检测Shp2的mRNA和蛋白水平变化。结果 Pokemon在人肝癌细胞系QGY-7703中的表达水平高于人正常肝细胞系HL-7702,Shp2的表达水平高低与Pokemon表达一致;在QGY-7703细胞中沉默Pokemon表达之后,Shp2的表达也相应降低。结论原癌基因Pokemon作为一种转录因子,可能调控Shp2的表达。

表皮生长因子受体、C-erbB-2原癌基因在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌骨髓微小转移的关系

目的 研究表皮生长因子受体 (EGFR)、C- erb B- 2原癌基因在乳腺癌组织中的表达 ,探讨其与乳腺癌骨髓微小转移间的关系及对乳腺癌患者预后的影响。方法 选择 42例乳腺癌患者石蜡固定的组织标本 ,用 SABC免疫组织化学方法检测 EGFR、C- erb B- 2蛋白。采用 χ2检验。结果 EGFR阳性 42 .9% ,C- erb B- 2阳性 31%。EGFR与 C- erb B- 2两者间无显著关系。随访的 2 6例患者中 ,EGFR、C- erb B- 2阳性与阴性间术后 5年生存率有明显差别。结论 EGFR、C- erb B- 2表达与乳腺癌骨髓微小转移有密切关系 ,可以作为判断乳腺癌预后的重要指标。乳腺癌组织中 EGFR、C- erb B- 2阳性患者预后不良。

HER-2/neu基因表达与卵巢上皮性癌的预后

【目的】探讨HER 2 /neu基因在卵巢上皮性癌中的表达水平及其与预后的关系。【方法】利用免疫组化检测 93例卵巢上皮性癌组织中HER 2 /neu基因表达水平 ,并结合临床病理及随访资料进行分析。【结果】HER 2 /neu基因主要为细胞膜及胞浆表达 ,阳性率为 4 4 .1%。其表达与临床分期、病理类型、组织学分级及残余灶直径等无相关性 ;但与预后相关。HER 2 /neu表达阴性组的 1,3,5年生存率分别为 90 .4 %、74 .0 %、5 4 .6 % ,弱阳性组分别为 81.1%、4 5 .4 %、2 7.9% ,强阳性组分别为 80 .0 %、2 0 .0 %、10 .0 %。差异有显著性 (P =0 .0 0 2 8)。COX模型多因素分析提示 :HER 2 /neu表达水平是影响卵巢癌预后的独立因素 (P =0 .0 0 5 )。【结论】HER 2 /neu基因表达水平可作为预测卵巢上皮性癌预后的可靠指标。

乳腺癌组织中C-erbB-2原癌基因的表达与预后

采用免疫组化方法对 98例乳腺癌组织进行 C-erb B-2原癌基因测定 ,结果 42例 (42 .9% )有 C-erb B-2过度表达 ,其中以浸润性导管癌过度表达率最高。 C-erb B-2过度表达与临床分期、组织分级呈正相关 ,统计学检验有显著性差异 ,而与肿瘤体积大小、淋巴结转移状况、患病年龄无关。提示乳腺癌组织中 C-erb

雌激素受体、孕激素受体及原癌基因Her-2在肺腺癌中的表达

目的探讨雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）及原癌基因Her-2（C-erb B-2）在肺腺癌发生发展过程中的作用。方法选择2013年3月~2015年2月在我院手术治疗的肺腺癌患者组织切块60例为研究对象。分析不同性别、年龄、分化程度、临床分期患者肺腺癌中ER、PR及C-erb B-2的表达,分析肺腺癌患者组织中C-erb B-2的表达与ER、PR表达的相关性,分析骨转移患者与无骨转移患者肺腺癌组织中ER、PR、C-erb B-2的表达。结果 60例患者,14例ER阳性表达,占23.3%,13例PR阳性,占21.7%,6例C-erb B-2阳性,占10.0%。分化程度越低的患者ER阳性率及C-erb B-2阳性率越高（P〈0.05）。不同性别、临床分期肺腺癌患者组织中ER、PR及Cerb B-2表达无差异（P〉0.05）。相关性分析：C-erb B-2与ER表达呈显著正相关的关系（r=0.461）,C-erb B-2表达与PR呈正相关（r=0.326）;C-erb B-2与ER及PR均为阳性呈显著正相关的关系（r=0.329）,ER与PR表达无相关性（r=0.081）。骨转移患者与无骨转移患者肺腺癌组织中ER、PR及C-erb B-2表达无差异（P〉0.05）。结论肺腺癌中均可表达一定程度的雌激素受体、孕激素受体及原癌基因Her-2水平。