LYVE1+巨噬细胞在RA患者关节滑膜组织中表达变化及对RA-FLS细胞迁移、侵袭、FMT的抑制作用

目的观察淋巴管内皮受体-1(LYVE1)+巨噬细胞在类风湿性关节炎(RA)患者关节滑膜组织中的表达变化及对RA成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)迁移、侵袭、向肌成纤维细胞转化(FMT)的抑制作用。方法采用免疫荧光染色法对45例RA患者及45例骨关节炎(OA)患者滑膜组织LYVE1、CD68进行定性、定量检测。取对数生长期人单核白血病细胞THP-1,在培养液中加入LYVE1过表达慢病毒,培养48 h获得表达LYVE1的THP-1细胞,在表达LYVE1的THP-1细胞中加入100 ng/mL的佛波酯(PMA)诱导培养48 h,获得LYVE1+巨噬细胞;另取部分THP-1细胞,仅加入100 ng/mL的PMA诱导培养48 h获得LYVE1-巨噬细胞。取对数生长期人类风湿性关节炎成纤维细胞MH7A分为LYVE1+巨噬细胞组、LYVE1-巨噬细胞组,分别加入LYVE1+巨噬细胞、LYVE1-巨噬细胞,另将仅含培养基的小室设为空白对照组,采用划痕实验观察各组细胞的迁移能力。取MH7A细胞分为A组、B组,分别加入LYVE1+巨噬细胞、LYVE1-巨噬细胞,将仅含培养基小室设为C组,采用Transwell侵袭实验观察各组细胞的侵袭能力。取MH7A细胞分为一组、二组,分别加入LYVE1+巨噬细胞、LYVE1-巨噬细胞,将仅含培养基小室设为空白组,培养48 h时采用实时定量PCR法检测各组MH7A细胞FMT相关基因(COL1A1、fibronectin、α-SMA)的mRNA。结果RA与OA患者滑膜组织中LYVE1、CD68表达位置基本重叠;RA与OA患者滑膜组织LYVE1相对表达量分别为0.319±0.033、1.000±0.159,二者比较,P<0.05。与LYVE1-巨噬细胞组、空白对照组比较,培养24、48 h时LYVE1+巨噬细胞组细胞划痕愈合比低(P均<0.05);与B组、C组比较,培养24 h时A组细胞穿膜细胞数少(P均<0.05);与二组、空白组比较,培养48 h时一组细胞COL1A1 mRNA、fibronectin mRNA、α-SMA mRNA相对表达量少(P均<0.05)。结论RA患者关节滑膜组织中LYVE1+巨噬细胞低表达。LYVE1+巨噬细胞可抑制RA-FLS的迁移、侵袭及FMT。

食管鳞状细胞癌NET1的表达和淋巴管浸润与病理的相关性

目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中神经上皮细胞转化基因1(neuroepithelial cell transforming gene 1,NET1)的表达及D2-40标记的肿瘤淋巴管浸润与病理之间的相关性。方法采用Western印迹法检测ESCC组织及正常食管组织中NET1蛋白的表达情况,免疫组织化学法检测ESCC中NET1及D2-40的表达情况,观察D2-40标记的淋巴管内癌细胞浸润(lymphatic vessel invasive,LVI)的情况,分析NET1、LVI与临床病理指标之间的关系及患者5年生存率的差异。结果 NET1在ESCC组织中阳性表达率(++/+++)为61.3%(20.4%/40.9%)(49/80),正常食管组织中表达阳性率为10.5%(2/19),2例均为弱阳性(+),LVI在ESCC组织中的阳性率为36.3%(29/80),NET1高表达、LVI阳性与ESCC的淋巴结阳性转移、临床分期呈正相关(P<0.05),与肿瘤的神经血管侵犯相关(P<0.05),而与性别、年龄、组织学分级无明显相关性(P>0.05)。NET1高表达与LVI阳性密切相关(P=0.012),NET1高表达或LVI阳性的ESCC患者术后的生存率明显降低,而且同时存在NET1高表达和LVI阳性的ESCC患者术后5年生存率最低。结论联合检测NET1及LVI可以提高对食管鳞癌患者的术后临床病理分期及预后的判断的准确性。