血清circRNA、Notch-3联合胃蛋白酶对胃癌的诊断价值及与分期的相关性

目的探究血清环状RNA(circRNA)、神经源位点缺口同源蛋白3(Notch-3)、胃蛋白酶对胃癌的诊断价值及其与胃癌分期的相关性。方法选取2021年3月至2023年3月该院收治的150例胃癌患者和150例胃部良性病变患者分为研究组和良性组。依据胃癌分期将研究组分为Ⅰ期组(36例)、Ⅱ期组(37例)、Ⅲ期组(35例)及Ⅳ期(42例)组。检测并比较研究组和良性组circRNA、Notch-3及胃蛋白酶表达水平;分析不同胃癌分期circRNA、Notch-3及胃蛋白酶表达水平;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析circRNA、Notch-3、胃蛋白酶单独及联合检测对胃癌的诊断价值;采用Spearman相关进行circRNA、Notch-3、胃蛋白酶与胃癌分期的相关性分析。结果研究组circRNA、Notch-3及胃蛋白酶表达水平高于良性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circRNA、Notch-3及胃蛋白酶的表达水平比较,Ⅰ期组<Ⅱ期组<Ⅲ期组<Ⅳ期组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,circRNA、Notch-3、胃蛋白酶单独检测胃癌的曲线下面积(AUC)分别为0.797、0.802、0.848,低于3项指标联合检测的0.901(Z=10.799、11.231、14.492,P<0.05)。circRNA、Notch-3、胃蛋白酶均与胃癌分期呈正相关(r=0.585、0.581、0.645,P<0.05)。结论circRNA、Notch-3及胃蛋白酶的表达水平在胃癌中均有所升高,且胃癌分期越高,其表达水平越高;circRNA、Notch-3及胃蛋白酶均对胃癌有一定诊断价值,其联合检测灵敏度及特异度更高,且circRNA、Notch-3及胃蛋白酶与胃癌分期呈正相关。

血清MG7-Ag水平、组织Notch-3水平对胃癌的诊断价值

目的分析血清胃癌相关抗原7(MG7-Ag)水平、组织神经源位点缺口同源蛋白3(Notch-3)水平对胃癌的诊断价值。方法回顾性分析2023年1月至12月解放军总医院第二医学中心收治的23例胃癌患者(胃癌组)及50例胃部良性病变者(良性病变组)的临床资料,统计2组患者的基线资料及血清MG7-Ag水平、组织Notch-3水平,分析胃癌的影响因素及血清MG7-Ag水平、组织Notch-3水平对胃癌的诊断效能;并比较不同胃癌患者的血清MG7-Ag水平、组织Notch-3水平,分析血清MG7-Ag水平、组织Notch-3水平与胃癌病理参数(肿瘤直径、TNM分期、血管浸润程度、淋巴结转移)的关系。结果胃癌组患者的血清胃蛋白酶原Ⅰ(PG1)水平低于良性病变组,胃泌素、癌胚抗原(CEA)、MG7-Ag及组织Notch-3水平均高于良性病变组(P<0.05),多因素Logistic回归分析可得出:胃泌素(95%CI:1.033~1.112)、CEA(95%CI:1.882~5.076)、MG7-Ag(95%CI:1.649~4.443)、Notch-3(95%CI:1.639~4.219)为胃癌的危险因素,PG1(95%CI:0.880~0.984)为胃癌的保护因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线(ROC)分析结果显示血清MG7-Ag水平、组织Notch-3水平及联合诊断胃癌的敏感度分别为73.90%、78.30%、91.30%,特异度分别为86.00%、82.00%、80.00%;且联合诊断的AUC值为0.958,显著高于单一指标(P<0.05)。直径>3 cm、Ⅲ~Ⅳ级、有血管浸润及淋巴结转移的胃癌患者血清MG7-Ag水平、组织Notch-3水平高于直径≤3 cm、Ⅰ~Ⅱ级、无血管浸润及淋巴结转移者(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示血清MG7-Ag水平、组织Notch-3水平与患者的肿瘤直径、TNM分期、血管浸润程度、淋巴结转移呈正相关关系(P<0.05)。结论胃癌患者的血清MG7-Ag水平、组织Notch-3水平均升高,其水平与肿瘤直径、TNM分期、血管浸润程度、淋巴结转移呈正相关关系,且两者联合对胃癌具有较高的诊断价值。

川陈皮素调节Notch/NF-κB/NLRP3信号通路对类风湿关节炎大鼠炎性损伤的影响

目的探究川陈皮素(NOB)调节神经源性基因同源蛋白(Notch)/核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对类风湿关节炎(RA)大鼠炎性损伤的影响。方法将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、NOB低剂量组(NOB-L组,50 mg/kg)、NOB高剂量组(NOB-H组,100 mg/kg)、NOB高剂量+Notch激活剂Jagged1组(NOB-H+Jagged1组,100 mg/kg NOB+50 mg/kg Jagged1)。于给药第0天与末次给药后对各组大鼠进行关节炎指数评价。自给药第0天开始,每7天测定1次大鼠足趾肿胀度。计算各组大鼠胸腺和脾脏指数;HE染色观察每组大鼠踝关节滑膜足趾病理学变化;ELISA法检测各组大鼠血清和滑膜组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平;RT-qPCR法测定各组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB、NLRP3 mRNA表达;Western blot检测各组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB p65、p-NF-κB p65和NLRP3蛋白表达。结果1)RA的病情进展:与Control组相比,Model组大鼠关节炎指数和足趾肿胀度显著上升(P<0.05),滑膜组织病理学损伤严重。2)大鼠脏器指数及炎性因子变化:与Control组相比,Model组大鼠胸腺和脾脏指数显著上升(P<0.05),血清和滑膜组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著上升(P<0.05)。3)Notch/NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白表达变化:与Control组相比,Model组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB、NLRP3 mRNA和蛋白、p-NF-κB p65蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与Model组相比,NOB-L、NOB-H组相关指标变化趋势与上述相反(P<0.05),滑膜组织病理学损伤有所减轻。Jagged1减弱了NOB对RA大鼠炎性损伤的抑制作用(P<0.05)。结论NOB可能通过下调Notch/NF-κB/NLRP3信号通路,减轻RA大鼠的炎性损伤。

EGFR和Notch1在女性甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)和神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch1)在女性甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义。方法:选取2019年1月—2020年1月于孝感市中心医院行手术治疗的90例女性甲状腺乳头状癌患者作为研究对象,收集其病理标本与癌旁正常甲状腺组织,采用免疫组化法检测标本中EGFR及Notch1的表达水平。比较EGFR和Notch1在甲状腺乳头状癌、癌旁正常组织中的阳性表达率,分析EGFR、Notch1表达与甲状腺乳头状癌临床病理特征,EGFR与Notch1在女性甲状腺乳头状癌组织表达的相关性。结果:EGFR和Notch1在甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄段甲状腺乳头状癌患者EGFR阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);发生淋巴结转移的患者EGFR阳性表达率高于无淋巴结转移患者,差异有统计学意义(P=0.001)。不同年龄段甲状腺乳头状癌患者Notch1阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);发生淋巴结转移的患者Notch1阳性表达率高于无淋巴结转移患者,差异有统计学意义(P=0.002)。EGFR、Notch1在女性甲状腺乳头状癌中的表达水平呈正相关(r=0.329,P=0.002)。结论:甲状腺癌组织中EGFR和Notch1呈高表达,EGFR和Notch1可能与肿瘤淋巴结转移有关,且EGFR和Notch1可能存在协同作用。

红景天苷调节miR-26a-5p/JAG1/Notch-1信号轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响

目的探讨红景天苷(SAL)调节微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)/JAG1/神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch-1)信号轴对瘢痕疙瘩(KD)成纤维细胞(HKF)生物学功能的影响。方法将HKF细胞随机分为对照组(Control组)、SAL低浓度组(SAL-L组,50μmol/L SAL)、SAL高浓度组(SAL-H组,100μmol/L SAL)、SAL高浓度+miR-NC组(SAL-H+miR-NC组)、SAL高浓度+miR-26a-5p mimics组(SAL-H+miR-26a-5p mimics组)、SAL高浓度+NC-inhibitor组(SAL-H+NC-inhibitor组)、SAL高浓度+miR-26a-5p inhibitor组(SAL-H+miR-26a-5p inhibitor组)。CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;RT-qPCR检测各组细胞中的miR-26a-5p、JAG1和Notch-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中JAG1和Notch-1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p与JAG1的关系。结果与Control组相比,SAL-H组HKF细胞增殖能力(24 h)、迁移距离、侵袭细胞个数、S期细胞比例、JAG1和Notch-1 mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、miR-26a-5p表达显著增加(P<0.05);与SAL-H组和SAL-H+miR-NC组相比,SAL-H+miR-26a-5p mimics组相应指标变化与上述变化相同;miR-26a-5p inhibitor减弱了SAL-H对HKF细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,减弱了HKF细胞凋亡。miR-26a-5p靶向负调控JAG1表达。结论SAL可能通过上调miR-26a-5p,靶向抑制JAG1/Notch-1信号轴抑制HKF细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,改善KD。

miR-149-5p对变应性鼻炎小鼠Notch1表达和Treg/Th17免疫平衡的影响

目的:探讨miR-149-5p对变应性鼻炎(AR)小鼠神经源性位点缺口同系物蛋白1(Notch1)表达和调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)失衡的影响。方法:12只BALB/c小鼠,3只为正常组,余9只小鼠采用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝[Al(OH)3]建立AR模型,再随机均分为模型组(仅造模)、miR-149-5p激动剂对照组(鼻内滴注miR-149-5p agomir阴性对照)及miR-149-5p激动剂组(鼻内滴注miR-149-5p agomir);采用行为学评分考察各组各组小鼠过敏症状、苏木精/伊红染色(HE)分析各组小鼠鼻黏膜病理学变化、实时荧光定量PCR(q PCR)检测各组小鼠鼻黏膜组织miR-149-5p,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分析各组小鼠血清免疫球蛋白E(Ig E)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平,采用蛋白印迹法检测各组小鼠鼻黏膜组织Notch1、维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)及叉头状螺旋转录因子3(Foxp3)蛋白表达;利用miRDB网站预测miR-149-5p与Notch1 3’-UTR结合位点,构建Notch1 3’-UTR区野生型(WT)和突变型(MUT)荧光素酶报告载体,转染293T细胞,设置NC+Notch1(MUT)组、miR-149-5p agomir+Notch1(MUT)组、NC+Notch1(WT)组及miR-149-5p agomir+Notch1(WT)组,采用双荧光素酶实验分析并计算荧光素酶相对活性。结果:与模型组比较,miR-149-5p激动剂组小鼠行为学评分明显下降,鼻黏膜炎症反应减轻,上皮结构趋于完整,miR-149-5p的表达显著增加,血清中Ig E、IL-6水平下降,IL-10水平升高,Foxp3蛋白的表达增加,Notch1和RORγt蛋白的表达减少(P <0. 05或P <0. 01);miRDB网站预测miR-149-5p与Notch1 3’-UTR存在互补位点,双荧光素酶实验结果显示,miR-149-5p agomir+Notch1(WT)组的荧光素酶相对活性较NC+Notch1(WT)组降低(P <0. 05)。结论:miR-149-5p可能通过靶向Notch1调节Foxp3和RORγt蛋白表达,影响Treg/Th17细胞平衡,从而改善AR小鼠鼻部过敏症状。

姜黄素对阿霉素肾病大鼠Notch信号通路相关蛋白的影响

目的:探讨姜黄素通过调控Notch信号通路相关蛋白表达延缓阿霉素肾病大鼠肾小球硬化进程的机制。方法:将60只SD雄性大鼠按随机数字表法分为六组,分别为空白组、模型组、对照组和姜黄素低、中、高剂量组。除空白组外,其余各组尾静脉注射阿霉素制备阿霉素肾病大鼠模型,造模成功后对照组以10 mg/kg盐酸贝那普利灌胃;姜黄素低、中、高剂量组分别予50、100、200 mg/kg姜黄素灌胃;空白组和模型组分别予等剂量0.9%氯化钠溶液灌胃,各组均灌胃6周。检测各组大鼠24 h尿蛋白定量、血生化指标,电镜观察大鼠肾脏病理结构改变,RT-PCR检测神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达水平,免疫组化法检测Notch1、TGF-β1、MCP-1蛋白表达水平。结果:姜黄素可有效降低阿霉素肾病大鼠24 h尿蛋白定量、血肌酐和血尿素氮水平,改善肾脏病理结构,下调Notch1、TGF-β1、MCP-1 mRNA及蛋白在肾脏组织的表达,且呈剂量依赖性。结论:姜黄素可通过下调Notch信号通路相关蛋白的表达,抑制肾小球基底膜增厚和细胞外基质过度沉积,进而延缓肾小球硬化进程。

白花蛇舌草降低胃癌细胞化疗耐药的机制

目的研究白花蛇舌草对胃癌细胞化疗耐药的影响及可能的机制。方法取对数期SGC-7901细胞,建立顺铂耐药模型,分为耐药组、白花蛇舌草组、激活剂组、联合组。耐药组不作处理,白花蛇舌草组加入白花蛇舌草注射液(50μg·mL^(-1)),激活剂组加入信号转导及转录激活子3(signal transducer and activator of transcrption 3,STAT3)/神经源性基因Notch同源蛋白1(neurogenic gene Notch homolog 1,Notch1)轴激活剂Jagged1(500 ng·mL^(-1)),联合组加入白花蛇舌草注射液(50μg·mL^(-1))及Jagged1(500 ng·mL^(-1))。检测各组细胞的增殖抑制情况、细胞凋亡率、细胞葡萄糖摄取率、细胞相对乳酸含量及细胞STAT3和Notch1蛋白表达水平。结果与耐药组比较,白花蛇舌草组细胞增殖抑制率、凋亡率升高,半数抑制浓度(IC_(50))、葡萄糖摄取率、相对乳酸含量、STAT3和Notch1蛋白表达水平降低;激活剂组细胞增殖抑制率、凋亡率降低,IC_(50)、葡萄糖摄取率、相对乳酸含量、STAT3和Notch1蛋白表达水平升高(P<0.05)。与白花蛇舌草组比较,联合组细胞增殖抑制率、凋亡率降低,IC_(50)、葡萄糖摄取率、相对乳酸含量、STAT3、Notch1蛋白表达水平升高(P<0.05);与激活剂组比较,联合组细胞增殖抑制率、凋亡率升高,其他4项数值均降低(P<0.05)。结论白花蛇舌草可提高顺铂对胃癌细胞的增殖抑制率、减弱糖酵解并促进其凋亡、降低胃癌细胞化疗耐药,其作用机制可能与抑制STAT3/Notch轴活性有关。

BMP4对人根尖牙乳头干细胞增殖、迁移及矿化的作用机制研究

目的:观察骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic proteins 4,BMP4)对人根尖牙乳头干细胞(stem cells from the apical papilla,SCAPs)增殖、迁移及矿化的影响,并探讨可能机制。方法:取P3代对数期SCAPs,随机分为空白组、NC组、mimics组、mimics+DAPT[神经源性基因Notch同源蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1)/Jagged1信号通路抑制剂]组。空白组不处理,NC组转染阴性对照质粒BMP4 NC,mimics组转染过表达质粒BMP4 mimics,mimics+DAPT组转染BMP4 mimics并加入DAPT(10μmol/L)。MTT法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移能力;茜素红染色法检测细胞矿化能力;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA表达量;Western blot法检测细胞Notch1、Jagged1、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白表达量。结果:与空白组、NC组比较,mimics组细胞24 h、48 h、72 h吸光度值,迁移量,矿化结节面积比,ALP、BSP、OCN mRNA表达量,Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达量升高(P<0.05);与mimics组比较,mimics+DAPT组细胞24 h、48 h、72 h吸光度值,迁移量,矿化结节面积比,ALP、BSP、OCN mRNA表达量,Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达量降低(P<0.05)。结论:过表达BMP4可提升SCAPs增殖、迁移能力并促进其矿化,推测其作用机制可能与激活Notch1/Jagged1信号通路有关。

微小RNA-18a靶向Notch2抑制NIH-3T3细胞外基质相关基因的表达

[背景]矽肺主要病理特征是肺部纤维化。矽肺发生发展过程中多种miRNAs具有调控作用。[目的]利用成纤维细胞系,探究微小RNA-18a(miR-18a)对细胞外基质相关基因表达的影响,并对其作用机制进行验证。[方法]在成纤维细胞系NIH-3T3细胞中转染miR-18a模拟物以及神经源性基因座Notch同源蛋白2(Notch2)基因的小干扰RNA(siRNA)。通过应用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRTPCR)技术检测Acta2、Col1a1及Notch2基因mRNA表达变化,通过蛋白质印迹技术检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Notch2蛋白的表达变化,利用双荧光素酶报告载体在人胚肾细胞HEK293T细胞中验证miR-18a调控Notch2基因的直接作用位点。[结果]qRT-PCR检测结果表明,在NIH-3T3细胞中,miR-18a模拟物过表达36 h抑制了Col1a1以及Acta2的m RNA表达(P<0.05),同时利用蛋白质印迹技术检测发现,miR-18a模拟物过表达48 h后α-SMA蛋白表达丰度降低。通过qRT-PCR未检测到过表达miR-18a 36 h对于Notch2基因表达的影响,通过蛋白质印迹技术检测发现过表达miR-18a模拟物36 h可以在蛋白水平上抑制Notch2的表达。双荧光素酶报告载体检测结果发现,在HEK293T细胞中,无论是过表达miR-18a模拟物或者抑制物24 h均证明了Notch2是miR-18a的直接靶基因。当Notch2被抑制36 h时,qRT-PCR检测发现Acta2和Col1a1基因表达下调(P<0.05);蛋白质印迹技术检测表明α-SMA在蛋白水平也受到抑制。[结论]本研究发现miR-18a可以通过直接作用于靶基因Notch2的3’UTR而抑制其表达,从而抑制成纤维细胞系NIH-3T3细胞外基质相关基因的表达。

基于Notch信号通路探索菟丝子总黄酮配伍雷公藤多苷对生理小鼠卵巢生殖干细胞的作用及机制

目的:探讨菟丝子总黄酮配伍雷公藤多苷片对雌性生理小鼠卵巢生殖干细胞的作用,并从神经源性位点缺口同源蛋白(Notch)信号通路探讨其作用机制。方法:将60只5周龄雌性昆明种小鼠随机分为正常组,1、2倍临床等效剂量雷公藤多苷片组(低、高剂量组13.65、27.3 mg·kg^(-1)·d^(-1)),菟丝子总黄酮(低、高剂量组150、300 mg·kg^(-1)·d^(-1)),配伍组(雷公藤多苷片低剂量+菟丝子总黄酮低剂量组),每组10只,连续给药3周后取材,计算子宫、卵巢脏脑指数,光镜下观察卵巢组织病理形态学改变;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中雌二醇含量;免疫荧光法观察卵巢上皮的卵巢生殖干细胞标志物果蝇VASA基因同源类似物(Mvh)、八聚体结合转录因子4(Oct4)、酪氨酸激酶受体(c-kit)、同源框蛋白质(Nanog)及Notch信号通路分子神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch1)、Hes家族BHLH转录因子1(Hes1)、锯齿典型Notch配体1(Jagged1)的表达。结果:与正常组比较,雷公藤多苷片低剂量组和高剂量组对小鼠子宫、卵巢的脏脑系数及形态学差异无统计学意义,仅可致小鼠闭锁卵泡数显著增加(P<0.01);雷公藤多苷片低剂量对卵巢生殖干细胞标志物和Notch信号通路分子的表达有降低趋势,雷公藤多苷片高剂量下Mvh、c-kit、Nanog的表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),Notch1、Hes1表达水平显著降低(P<0.01);菟丝子总黄酮低剂量组上述指标均明显升高(P<0.05,P<0.01);与雷公藤多苷片低剂量组比较,配伍组闭锁卵泡数显著降低(P<0.01),Mvh、Nanog表达水平显著升高(P<0.01),Notch1、Hes1表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:卵巢生殖干细胞是雷公藤多苷片生殖毒性的源头靶点,菟丝子总黄酮可参与调控卵巢生殖干细胞途径缓解雷公藤多苷片所致的生殖损伤,其作用机制可能与Notch信号通路相关。

人类嗜T淋巴细胞病毒1型Tax1蛋白在头颈部腺样囊性癌中的表达与预后分析及机制探索

目的探讨人类嗜T淋巴细胞病毒1型(human T-lymphotropic virus 1,HTLV-1)与头颈部腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)发病及其远处转移的相关性。方法采用免疫组织化学及Western blot分析伴或不伴有远处转移ACC患者样品、ACC低侵袭力细胞系(SACC-83)、高侵袭力细胞(SACC-LM)及人单核细胞白血病细胞系(THP-1)中HTLV-1 Tax1蛋白、Myb、Notch同源蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1)和维甲酸信号通路蛋白RARA的表达,Pearson分析Tax1蛋白与肺转移及以上信号分子的相关性。结果11例ACC患者Tax1蛋白细胞核阳性表达,4例患者Myb细胞核阳性表达,6例患者Notch1细胞膜和细胞浆阳性表达,8例患者RARA细胞核阳性表达。选取2例ACC和细胞样本进行Western blot验证,1例与免疫组织化学结果不一致。Pearson分析Tax1与RARA蛋白呈正相关,与远处转移呈相关趋势,但与Myb和Notch1表达无显著相关性。结论HTLV-1感染可能影响体内维生素A代谢通路,与ACC患者发生远处转移相关。

姜黄素通过调控NOTCH相关因子表达降低急性肺栓塞模型大鼠血小板聚集

目的:观察姜黄素对急性肺栓塞(APE)模型大鼠血小板聚集的影响,并探讨可能机制。方法:70只大鼠随机选10只设为空白对照组,剩余60只建立APE模型,随机分为模型对照组、姜黄素50、100、200 mg/kg组、低分子肝素钙0.01 mL/kg组、姜黄素200 mg/kg+抑制剂DAPT 10 mg/kg联合组。以相应药物或生理盐水、二甲基亚砜(DMSO)干预7 d后检测血浆血小板聚集率、血小板活化指数(PRI);检测血小板活化标志物含量;检测血清心肌损伤指标脑钠素(BNP)、肌钙蛋白T(cTnT)含量;Western Blot法检测肺组织NOTCH1、JAGGED1、发状分裂相关增强子1(HES1)蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组血小板聚集率、PRI显著升高,血清CD63、GMP-140、BNP、cTnT含量明显升高,NOTCH1、JAGGED1、HES1蛋白表达显著下调(P<0.01),肺组织严重受损;与模型对照组比较,姜黄素各剂量组血小板聚集率、PRI,血清CD63、血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)、BNP、cTnT含量显著降低,肺组织NOTCH1、JAGGED1、HES1蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);与姜黄素200 mg/kg组比较,联合组血小板聚集率、PRI,血清CD63、GMP-140、BNP、cTnT水平显著升高、肺组织NOTCH1、JAGGED1、HES1蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:姜黄素可降低APE模型大鼠血小板活化程度,抑制血小板聚集,减轻心肌损伤,且表现为剂量依赖性,推测其作用机制可能与激活NOTCH1/Jagged1信号通路有关。

敲低长链非编码RNA PURPL-微小RNA-137-Ⅰ型跨膜受体蛋白信号通路抑制乳腺癌的机制

目的探究敲低长链非编码RNA PURPL调控微小RNA(miR)-137抑制物/Notch同源物1干扰物信号轴对抗乳腺癌的调控机制。方法生信系统分析PURPL与癌症相关性;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测PURPL,miR-137,Ⅰ型跨膜受体蛋白(Notch1)在乳腺癌组织表达;蛋白质印迹法(Western blot)、免疫荧光检测Notch1在乳腺癌组织中蛋白和阳性信号的表达;双荧光素酶报告基因检验miR-137抑制物与PURPL和Notch1的调控机制;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、Transwell实验、细胞伤口愈合实验及原位缺口末端标记法(TUNEL)凋亡分别检测下调PURPL-miR-137-Notch1轴对增殖、侵袭、迁移及凋亡的调控能力;构建乳腺癌裸鼠皮下移植瘤模型检测肿瘤体积和重量,生长情况。两组间比较采用独立样本t检验。结果PURPL和Notch1在乳腺癌组织中高表达(1.01±0.09比2.81±0.22、1.02±0.11比3.19±0.28,t=62.903、59.918,P<0.01),miR-137低表达(0.99±0.08比0.71±0.06,t=23.259,P<0.01);PURPL吸附miR-137,两者竞争性结合,miR-137抑制物逆转siPURPL下调Notch1调控作用(0.47±0.03比0.78±0.06,t=13.864,P<0.01);siPURPL-In-miR-137-siNotch1轴能抑制MCF-7细胞增殖(A值)(2.43±0.37比1.14±0.15,t=9.693,P<0.01)、侵袭细胞数[(75.61±8.78)个比(38.25±3.76)个,t=11.735,P<0.01]、迁移率[(35.56±3.74)%比(20.23±2.61)%,t=10.084,P<0.01]及促进凋亡[(14.91±1.74)%比(19.64±2.33)%,t=4.869,P<0.01];PURPL促进皮下肿瘤体积[(1257.21±135.74)mm^(3)比(485.17±52.62)mm^(3),t=12.990,P<0.01]、重量[(0.28±0.02)g比(0.71±0.08)g,t=12.773,P<0.01],而miR-137则相反,抑制皮下肿瘤体积[(714.38±82.61)mm^(3)比(296.27±27.64)mm^(3),t=11.757,P<0.01]、重量[(0.47±0.05)g比(0.23±0.03)g,t=10.082,P<0.01]低于NC组。结论敲低PURPL可能对抗乳腺癌发生发展有一定的调控作用。