葛根素对HIE新生大鼠神经及PI3KAkt信号通路的作用机制研究

目的观察葛根素对缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)新生大鼠的神经保护作用,分析神经保护作用是否涉及PI3K/Akt信号通路的参与以及可能的机制。方法 90只新生7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组(n=10)、HIE组(n=40)及葛根素疗组(n=40),后两组又进一步分为3 h、6 h、12 h、24 h 4个时间点,每个时间点10只。参照Rice等和吴婉芳法,建立新生大鼠HIE模型。HE染色观察各组大鼠神经元形态变化,免疫组织化学法检测磷酸化Akt的表达。依据免疫组化的结果采用Western blot方法进一步检测PI3K/Akt信号通路表达。结果 90只Wistar大鼠模型全部成功,全部纳入结果分析。HE染色示葛根素治疗组大鼠大脑皮层和海马区神经细胞坏死率较HIE组明显减少。免疫组化结果示:随着时间的延长,葛根素治疗组磷酸化Akt蛋白阳性率较HIE组显著上调(P<0.01)。HIE组磷酸化Akt在12 h时达到高峰,但葛根素治疗组在24 h时达到高峰;在每组每个时间点葛根素组磷酸化Akt蛋白的阳性表达均高于HIE组(P<0.01)。假手术组亦有极少量表达。Western blot结果示:在各个时间点内,各组总Akt的表达一致;但磷酸化Akt的表达(Ser473和Thr308)在葛根素治疗组明显强于HIE组;且随着时间变化,其表达于上述免疫组化的检测大致一致。葛根素显著提高磷酸化Akt的水平,既可作用于Ser473磷酸化位点,也可作用于Thr308磷酸化位点。结论葛根素对HIE大鼠具有神经保护作用。葛根素可激活PI3K/Akt通路来发挥其对HIE新生大鼠神经元的保护作用,其机制可能与上调磷酸化Akt(Ser473)、磷酸化Akt(Thr308)表达水平,增加Akt磷酸化水平的表达有关。