免疫分析技术在“新型瘦肉精”残留检测中的应用

近年来,一些"新型瘦肉精"药物被非法用于畜禽养殖,如苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定等,该类药物添加在饲料和动物饮水中能有效促进禽畜生长,提高瘦肉率,降低养殖成本,但其在肉制品中的残留会对人体产生蓄积毒性。免疫分析技术利用高亲和力抗体对抗原进行特异识别,灵敏度高,是目前快速检测方法研究的热点之一,已在"传统瘦肉精"的快速检测中成熟应用,但其在"新型瘦肉精"快速检测中的应用仍处于起步阶段。该文对免疫分析技术在"新型瘦肉精"残留检测中的应用进行综述,并对其未来发展方向进行展望。

齐帕特罗人工抗原合成及其多克隆抗体制备

为制备齐帕特罗(ZIL)完全抗原,获得抗ZIL多克隆抗体(pAb),将ZIL与4-溴丁酸乙酯反应后,采用EDC/NHS方法使ZIL-丁酸盐中间体与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)进行偶联,分别用紫外全波长扫描(UV)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定后,通过免疫新西兰大白兔获得抗ZIL多抗血清,并对抗体效价、半数抑制浓度(IC_(50))和特异性进行鉴定。HPLC-MS检测结果显示,改造后的主产物分子质量为348.21 u,约占整个反应体系产物的92.23%,与ZIL-丁酸盐分子质量完全相符;SDS-PAGE电泳结果显示,BSA/OVA在电泳中的迁移速率明显大于偶联产物;UV结果显示,相比载体蛋白,偶联产物ZIL-BSA/OVA的特征吸收峰均发生了明显变化;ELISA效价检测结果表明,ZIL多抗血清效价在1∶6400以上,通过建立标准曲线测得IC_(50)分别为0.38 ng/mL和1.13 ng/mL,并且与沙丁胺醇(SAL)、特布他林(TBL)、溴布特罗(BRO)、西马特罗(CIM)、克仑特罗(CLB)、盐酸多巴胺(DH)、莱克多巴胺(RAC)、达氟沙星(DAN)、泰乐菌素(TYL)均不存在任何交叉反应。成功制备了ZIL完全抗原ZIL-BSA/OVA,获得了一种高灵敏度和高特异性的抗ZIL pAb,为后续建立ZIL免疫学快速检测方法奠定了基础。

食品中“新型瘦肉精”的检测方法研究进展

对苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定、巴氯芬等常见"新型瘦肉精"药物的检测方法进行综述,主要有高效液相色谱法、气相色谱-质谱法、毛细管电泳法等仪器检测方法以及酶联免疫法、免疫层析法、电化学发光免疫法等免疫分析方法,为保障我国动物性食品安全提供更好的技术支撑。

新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的研制

本文研究建立一种检测新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的方法,能对大量样品进行定量检测。应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸钠还原法,标记新型瘦肉精多克隆抗体并喷于玻璃纤维上,新型瘦肉精偶联OVA抗原和羊抗鼠Ig G分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成新型瘦肉精多残留胶体金检测卡。通过灵敏度、假阳性、假阴性试验测试,梯度浓度显色结果表明,该检测卡的灵敏度分别为克伦特罗3 ng/m L、莱克多巴胺5 ng/m L、沙丁胺醇3 ng/m L、西马特罗5 ng/m L、班布特罗5 ng/m L、妥布特罗5 ng/m L、特布他林8 ng/m L、氯丙那林5 ng/m L、马布特罗5 ng/m L、溴布特罗8 ng/m L,检测时间为3 min,检测滴加的最优尿液量为70~90μL,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。联检技术能实现现场快速检测,提高检测速度和准确性、降低检测成本,可作为生产过程监管和大批量样本的筛选。