火针调控脊髓损伤后神经干细胞Ngn1、CyclinD1基因表达的离体研究

目的:观察火针对脊髓损伤后神经干细胞Ngn1和Cyclin D1基因的调控作用。方法:采用随机数字表法将60只大鼠随机分为空白组(5只)、假手术组(5只),剩余大鼠按照1天、3天、7天、10天、14天时间点随机分为模型组、火针组,每组5只;采用改良的Allen’s法对模型组和火针组造模,相应时间点取大鼠腹主动脉血清置于神经干细胞培养皿中培养72 h,通过RT-PCR技术检测目的基因表达。结果:与假手术组比较,1天时模型组和火针组Ngn1基因表达量明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);在7天、10天时火针组Ngn1基因表达量均明显高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,1天时模型组和火针组Cyclin D1基因表达量明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);在3天、7天、10天时火针组Cyclin D1基因表达量均明显高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:火针可调控脊髓损伤神经干细胞Ngn1和Cyclin D1基因表达。

青光安Ⅱ号对慢性高眼压SD大鼠模型中视网膜PAX6和Ngn1及Ngn2 mRNA表达的影响

目的:观察青光安Ⅱ号方对SD大鼠慢性高眼压模型中视网膜PAX6、Ngn1及Ngn2 mRNA表达影响。方法:将40只80眼雄性SD大鼠随机分成6组,分别为:A组(空白组)、B组(模型组)、C组(青光安Ⅱ号方低剂量组)、D组(青光安Ⅱ号方中剂量组)、E组(青光安Ⅱ号方高剂量组)、F组(益脉康分散片组)。将B、C、D、E、F五组实验大鼠采用烧灼巩膜表浅静脉法建立大鼠慢性高眼压模型,术后监测眼压,使眼压维持在25mmHg以上持续2mo视为慢性高眼压造模成功。动物维持高眼压状态2mo后开始灌胃,灌胃后2、4wk分别处死,qPCR检测PAX6、Ngn1、Ngn2 mRNA的相对表达量。结果:PCR结果显示:SD大鼠慢性高眼压模型成模灌胃2wk后,各组PAX6、Ngn1、Ngn2 mRNA表达量与B组比较,差异有统计学意义(P<0.05);C、D、E、F组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。SD大鼠慢性高眼压模型成模灌胃4wk后,C、D、E组与F组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。C、D组与E组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。C组与D组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:青光安Ⅱ号方及益脉康分散片均能增加PAX6、Ngn1、Ngn2 mRNA的相对表达量,对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞有一定的保护作用;在对慢性高眼压大鼠视神经的保护中,青光安Ⅱ号方高剂量灌胃后4wk时效果最优。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7促进Ngn1基因的表达

目的构建小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7真核表达载体并初步探讨其对神经细胞分化的影响。方法采用基因工程技术,克隆小鼠Setd7基因并将其插入真核表达载体pCMV-3tag-6中,之后转染HEK293T细胞,West-ern blot验证其表达;利用实时荧光定量PCR技术检测在神经分化模型(全反式维甲酸诱导P19神经分化)中,Setd7对神经分化关键基因Ngn1的调控;利用双荧光素酶报告系统检测Setd7对Ngn1启动子活性的影响;构建小鼠Setd7siRNA干扰质粒,利用实时荧光定量PCR技术检测其抑制效果以及对Ngn1mRNA表达的影响。结果成功构建了小鼠Setd7基因的真核表达载体,可在HEK293T细胞中有效表达;Setd7可促进Ngn1mRNA表达;Setd7能够促进Ngn1启动子活性;降低Setd7抑制Ngn1mRNA表达。结论组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7能够促进神经分化关键基因Ngn1的转录。

从NSCs关键调控基因Neurogenin1初探益肾化浊方改善阿尔茨海默病模型大鼠海马区学习记忆能力的作用机制研究

[目的]观察益肾化浊方对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马区Neurogenin1(ngn1)基因、GFAP和Tubulin蛋白表达的影响,初探益肾化浊方改善AD模型大鼠学习记忆能力的作用机制。[方法]雄性SD大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、益肾化浊方低、中、高剂量组。治疗组给予益肾化浊方低、中、高剂量分别为2.8、5.6、11.2 g/kg,1次/日,共灌胃4周。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测海马区ngn1基因表达,蛋白质印迹法检测GFAP和Tubulin蛋白表达的变化。[结果]与假手术组比较,模型组大鼠海马区ngn1基因表达下降,GFAP蛋白表达增加,Tubulin蛋白表达显著下降,差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,益肾化浊方低、中、高剂量组大鼠海马区ngn1基因表达升高,GFAP蛋白表达减少,Tubulin蛋白表达显著升高。[结论]益肾化浊方可能通过增加AD模型大鼠海马区ngn1基因表达,促进神经元再生,进而改善其学习记忆功能。

胚胎皮层神经元的发育及其相关分子机制

在胚胎皮层的发育过程中,神经元及胶质细胞先后由同一先祖细胞分化而来.其中,bHLH(basic helix-loop-helix)转录因子NGN1表达水平的改变可能是前体细胞从神经元发生到胶质细胞发生转变过程中的一个关键因素.此外,转录因子EMX2 、PAX6 、MASH1等也与神经元的表型特化及皮层的区域划分密切相关.

Neurogenin 1在肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因鼠脊髓中的表达变化

目的：研究neurogenin 1 （Ngn1）转录因子在成年肌萎缩脊髓侧索硬化症（ALS）转基因模型鼠脊髓内的表达变化,探讨其在ALS转基因鼠发病中的作用.方法：选取ALS转基因鼠和同窝野生型鼠各18只,分别于95、108 d和122 d取材,部分鼠经4％多聚甲醛心灌注固定,分离脊髓、制备冷冻切片;部分鼠分离脊髓、提取蛋白和RNA,分别应用免疫荧光显色、免疫印迹和RT-PCR检测Ngnl蛋白及mRNA在ALS转基因鼠发病中的变化.结果：与同窝野生型鼠比较,ALS转基因鼠Ngnl mRNA和蛋白表达在95、108 d和122 d均降低.免疫荧光实验结果显示,Ngnl阳性细胞主要分布在脊髓灰质前角,与同窝野生型鼠比较,ALS转基因鼠Ngnl阳性细胞光密度值明显减小.结论：在ALS转基因鼠发病脊髓中Ngnl阳性细胞光密度值明显减少,mRNA和蛋白表达降低,表明Ngnl与ALS的发生密切相关.

大鼠Hes1基因真核表达载体的构建及瞬时表达在神经前体细胞分化中的作用

目的探讨Hes1基因高表达对神经前体细胞分化的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA,用RT-PCR方法获得Hes1基因的全长cDNA,插入pGEM-T-Easy克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pCDNA3.1,用脂质体将重组质粒转染原代培养的神经前体细胞,经G418筛选获得抗性细胞克隆,用RT-PCR方法鉴定Hes1基因在神经前体细胞基因组中的存在,实时荧光定量PCR检测Hes1基因在转染细胞中的过表达情况。结果经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定,证实目的基因已插入重组质粒,RT-PCR证明,经G418筛选得到的转基因神经前体细胞克隆的基因组DNA中存在Hes1基因;实时荧光定量PCR进一步证明,转基因神经前体细胞Hes1基因的mRNA高表达。结论构建了大鼠Hes1基因的真核表达载体,获得了高表达Hes1基因的神经前体细胞克隆。Hes1基因高表达可抑制神经前体细胞Ngn1的表达,并促进神经前体细胞向神经胶质细胞的分化。

移动IPv6原理及基于MIPL的实现

本文介绍了移动IPv6的基本原理和主要实现细节,并利用Linux和MIPL搭建了一个移动IPv6实验床,通过实验验证了移动IPv6的工作机制。

鼠巨细胞病毒干扰神经干细胞分化相关基因表达的体外研究

目的研究鼠巨细胞病毒（MCMV）对体外培养神经干细胞（NSCs）wnt信号通路下游分化相关靶基因表达的影响，以探讨CMV先天感染致胎脑发育异常的分子机制。方法体外分离培养BALB／c胎鼠NSCs，用感染复数（MOI）为5、1和0．1的MCMV Smith毒株感染NSCs并进行分化培养，Western blot法检测病毒感染后NSCs Wnt信号通路下游分化相关靶基因c-myc、cyclinD1、ngn-1、ngn-2蛋白表达水平的动态变化，real-timeRT-PCR检测病毒感染后NSCs Wnt信号通路关键分化基因ngn-1mRNA水平的动态变化。结果感染组c-mye蛋白表达量在分化培养后第0．5-5天均显著低于正常对照组（P〈0．05）；感染组cyclinD1蛋白表达量在第0．5天和1天显著低于正常对照组（P〈0．05）；在第2天和3天显著高于正常对照组（P〈0．05）；在第4天和5天，MOI=5组显著低于其他3组（P〈0．05）；感染组ngn-1蛋白表达量在第1～5天显著低于正常对照组（P〈0．05）；感染组ngn-1mRNA水平在第0．5～5天均显著低于正常对照组（P〈0．05）；感染组ngn-2蛋白表达先降后升，与正常对照组先升后降相反，MOI=0．1和1组峰值后移至感染后第5天，且明显低于正常对照组峰值（P〈0．05）。MOI=5组未表现出明显的峰值，各感染组ngn-2表达量在感染后1d明显低于正常对照组（P〈0．05）；感染后2d，MOI=5组明显低于正常对照组（P〈0．05）；在感染后3、4、5d，各组ngn-2表达量又明显高于正常对照组（P〈0．05）。感染组和正常对照组的差异随病毒MOI的增加而更加明显。结论MCMV感染明显抑制NSCs Wnt信号通路分化相关基因c-myc和ngn-1蛋白表达，抑制ngn-1mRNA表达，并诱导cyclinD1和ngn-2蛋白表达紊乱，其效应随感染滴度增加而更为显著。MCMV抑制和干扰NSCs Wnt信号通路下游分化相关靶基因表达可能是其抑制NSCs增殖分化进而导致胎脑损伤的重要作用机制之一。