程序性细胞死亡在小鼠腭突发育及腭裂形成中的意义

目的:明确程序性细胞死亡在腭裂形成中的作用。进一步探讨调控程序性细胞死亡的相关基因在腭裂形成中的变化及分子生物学机制。方法:将16只妊娠10d(GD10)的C57BL/6N系小鼠随机分为实验组和对照组。实验组管饲维甲酸80mg/kg,对照组管饲等体积植物油。分别于GD1314(妊娠第13天第14小时,下同),GD1322,GD148,GD1414,GD1422,GD158,GD1522,GD168d处死孕鼠取胚鼠。胚鼠头部切片做原位末端转移酶标记(TUNEL)染色。结果:在腭突垂直生长期及定向移动期,两组腭间质细胞发生程序性死亡的数量有明显的差异(P<0.05)。结论:经外源性维甲酸作用后的小鼠腭突间质细胞发生大量程序性死亡,腭突体积发育瘦小,未能在中线相互融合而导致腭裂。

用生物素标记核酸探针检测鸭瘟病毒DNA的研究

用生物素-11-脱氧尿苷三磷酸(Biotin-11-dUTP),通过缺口平移法标记提纯的鸭瘟病毒 DNA,制备生物素化鸭瘟病毒 DNA 全基因组探针;以斑点杂交检测固定在硝酸纤维膜上的样品鸭瘟病毒 DNA 同源序列,杂交后用亲和素-碱性磷酸酶孵育,底物显色,阳性反应呈蓝紫色斑点。试验结果表明,生物素标记核酸探针可检出10pg 提纯的鸭瘟病毒DNA,并检出稀释10~5倍和肝组织鸭瘟病毒 DNA;对鸡马立克氏病毒 DNA,鸡痘病毒DNA 和噬菌体 DNA 无杂交反应;对鸭瘟病毒弱毒 DNA 产生微弱杂交。该技术具有快速、敏感、特异和无放射污染等优点。

艾滋病毒核酸探针的制备

采用PXY104(含化学合成的HIV-env26肽基因4重串联体结构)为材料。温和裂解法提取质粒DNA,制备电泳纯化,Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ酶解,低融点琼脂糖凝胶电泳回收HIV-DNA片段作为核酸探针;用[α-^(32)P]dATP通过缺口移位法标记,比放射性为4.05—6.69×10~7cpm/μgDNA通过分子杂交能测出lPg的靶DNA,初步试验结果表明,在本文试验条件下,可用该探针检测与之互补的核酸分子。

应用特异双引物法标记DNA探针

作者应用位于探针DNA两端的两个DNA片段作引物,以探针DNA为模板,在大肠杆菌DNA聚合酶I的介导下,经过1—3次变性、退火和延伸过程,使探针DNA得到标记.3次实验结果表明,应用此法标记的DNA探针的比活性可以达到2×10^(14)cpm/g DNA,标记效率大于60％;而用缺刻翻译法标记的DNA探针,其标记效率只有22.7％.表明这是一种较好的DNA探针标记方法.

镍表面配合物膜的结构与性能研究

通过加速化学和电化学腐蚀实验比较了长链脂肪酸和杂环化合物等一系列有机缓蚀剂在镍表面形成的配合物膜的耐蚀性,结果表明,硬脂酸形成的膜蚀效果最佳,采用 LSV,XPS 和 AES 研究了膜层的缓蚀机理。

野生红菇尼克酸对强烈运动小鼠心肌损伤恢复作用的影响研究

通过研究野生红菇尼克酸对强烈运动小鼠心肌损伤恢复作用,对80只灌胃野生红菇尼克酸小鼠进行一次性力竭性游泳试验,处死小鼠后取其心脏血液以及心肌组织,观察小鼠心肌损伤恢复情况。结果表明,野生红菇尼克酸可显著提升强烈运动小鼠血乳氨酸、肝糖原、肌糖原、肝蛋白、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、总抗氧化能力含量/活性,降低强烈运动小鼠血尿素氮、血乳酸脱氢酶、丙二醛含量/活性,且可有效降低心肌细胞凋亡指数。说明野生红菇尼克酸对强烈运动小鼠心肌损伤具有明显恢复作用。

应用特异单引物法标记DNA探针

作者应用探针DNA上的一个片段作为DNA引物;以环化探针DNA或重组质粒DNA为模板,在DMA聚合酶的作用下,通过变性、退火和延伸过程,使探针DNA得到标记.3次实验结果表明,用过种单引物标法标记的DNA探针的放射比活性可达250×10^(14)cpm/g DNA,而用缺刻翻译法标记的DNA探针的放射比活性只有0.42×10^(13)cpm/g DNA,比单引物法要低5倍,打点杂交结果表明,用单引物法标记的探针能特异性地检测出70fg的靶基因序列,其敏感性比用缺刻翻译法标记的DNA探针要高两个数量级.

基于双酶切级联信号放大的核酸检测方法

利用茎环结构定位探针构建了一个基于双酶切反应的级联信号放大体系,并将其用于核酸的检测.在该体系中,茎环结构定位探针首先是内切酶Tth EndonucleaseⅣ的作用底物,被剪切后又作为定位探针介导切口酶Nt.Bst NBI对分子信标实施剪切,将这2步剪切反应结合起来可有效克服切口酶对于目标核酸中特定识别序列的依赖,同时进一步提高了检测灵敏度.实验结果表明,荧光信号与目标DNA浓度的对数值呈线性相关,响应范围为1 pmol/L～1 nmol/L,并且具有良好的识别单碱基变异的能力.此外,本方法序列设计简单,通用性强,仅改变定位探针的部分序列即可实现对不同目标DNA的检测.对掺杂于血清中的目标DNA的检测结果验证了本方法在实际样品检测中的应用潜力.

溶血血清中病毒基因的核酸斑点杂交法检测

本文采用缺口翻译法对克隆化HBV DNA作α-^(32)P-dCTP标记,所标记的HBVDNA具有较高比放射活性(7×10~7cpm/μg DNA)。以其作为基因探针及家鹅血清和健康人血清作为样品,采用两种常用的核酸斑点杂交法及一种改良的方法对人为制造的溶血血清中HBVDNA进行检测。结果显示,前两种方法会产生假阳性信号而后一种方法不会。出此,对血清进行预处理的改良方法适用于溶血血清中病毒基因的特异性检测。

三价锰光度法快速测定铬镍锰高合金中高含量锰

在磷酸介质中,于220℃温度下,用高氯酸将二价锰氧化为三价锰,因三价锰离子的摩尔浓度系数远较七价锰离子的小,借此可做高含量锰的光度法分析。

切刻内切酶介导恒温扩增技术条件优化

目的采用切刻内切酶介导恒温扩增技术(nicking enzyme mediated isothermal amplification,NEMA)扩增蜡样芽孢杆菌质粒,考察缓冲体系、温度、离子浓度等条件对扩增效率的影响。方法通过独特的引物设计,采用NEMA技术扩增蜡样芽孢杆菌质粒,通过系列实验优化了缓冲体系、温度和离子浓度等条件,采用琼脂糖凝胶电泳观察扩增结果。结果通过设计不同长度片段的扩增产物,证明采用NEMA技术进行恒温扩增引物设计的正确性。扩增反应中,缓冲体系的组成、扩增温度、体系镁离子及二甲基亚砜(DMSO)的浓度会影响切刻内切酶恒温扩增效率,而海藻糖添加与否在本实验中与扩增效率无关。在最优条件下,NEMA恒温扩增方法对于蜡样芽孢杆菌质粒的灵敏度达到1.7 pmol/L。结论 NEMA可以用来进行较长片段的扩增,有望成为一种常规的恒温扩增技术,应用到战时或者应急条件下的快速核酸诊断中。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对卵巢癌裸鼠移植瘤SKOV3细胞的促凋亡研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白对SKOV3移植瘤细胞半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响及其与肿瘤细胞凋亡的关系。方法建立雌性裸小鼠SKOV3移植瘤24只,随机分为4组,每组6只。TRAIL组单用重组人TRAIL蛋白(10μg/kg),顺铂(DDP)组单用DDP(3 mg/kg),TRAIL+DDP组联合使用TRAIL蛋白(10μg/kg)和DDP(3 mg/kg),空白对照组给予0.5 mL生理盐水。经处理后,各组的组织切片用免疫组织化学染色检测Caspase-3的表达和末端脱氧核苷酸转移酶介导核苷酸缺口标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡指数。结果 Caspase-3的表达水平在TRAIL组(171.67±14.38)、DDP组(172.50±14.75)、联合组(230.00±40.99)中均明显高于对照组(135.83±16.25)(P<0.05)。SKOV3移植瘤细胞凋亡指数在空白对照组、TRAIL组、DDP组和联合组分别为16.67±5.43、33.17±8.42、24.33±4.59和40.50±6.16,TRAIL组和联合组细胞凋亡指数较空白对照组和DDP组明显增高(P<0.05)。结论 TRAIL蛋白使卵巢癌移植瘤细胞的Caspase-3表达增强,TRAIL蛋白促进肿瘤细胞凋亡发生。