不同剂量6-OHDA对小鼠多巴胺能神经元及行为的影响

目的:探讨多巴胺能神经元数量与动物运动行为之间的关系,为基于6-羟基多巴胺(6-OHDA)注射的、不同病程阶段及不同类型运动障碍的帕金森病(PD)小鼠造模提供参考依据。方法:在C57BL/6雄性小鼠单侧黑质致密部(SNc)注射不同剂量(3 g/L、6 g/L和12 g/L)6-OHDA诱导病变,构建不同损伤程度的PD小鼠,从而模拟人类帕金森病的不同进展阶段(早期、中期和晚期)。在术后第14天,通过转棒实验、爬杆测试、平衡木穿越实验、旷场测试、圆筒实验及步态分析评估小鼠模型的行为缺陷。此外,通过免疫荧光染色定量检测SNc中酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数量,以及纹状体尾壳核(CPu)中TH+的多巴胺能神经元末梢的密度,以评估小鼠脑组织损伤情况。结果:与对照组相比,注射6-OHDA后,高剂量组和中剂量组的SNc多巴胺能神经元数量显著减少(P<0.05),且损伤呈剂量依赖性(Spearman相关,P<0.01)。同时,高剂量组(P<0.01)和中剂量组(P<0.05)的CPu多巴胺能神经末梢也显著减少。行为学测试显示,高剂量组小鼠的运动协调性和后肢平衡能力严重受损,表现为转棒测试时间缩短、步态异常及圆筒测试中前肢使用不对称等。而中剂量组和低剂量组的小鼠肢体协调性轻度下降,但自主运动能力和步态指标未受明显影响。结论:(1)SNc多巴胺能神经元损伤程度呈剂量依赖效应,即剂量越高,损伤程度越严重;同时,运动障碍与多巴胺能神经元损伤程度并不同步,仅高剂量组才出现明显的运动障碍;(2)基于高剂量6-OHDA的小鼠模型可作为研究PD及运动障碍的有效动物模型;(3)基于低剂量和中剂量6-OHDA的小鼠模型可用于研究PD运动症状出现前期的发病机制。

补肾养肝方药对长期服用左旋多巴帕金森病大鼠黑质纹状体功能的影响

目的 :探讨补肾养肝方药对长期服用左旋多巴帕金森病大鼠黑质纹状体系统功能的影响。方法 :建立 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)帕金森病大鼠模型 ,随机分为 4组 :假手术组、模型组、左旋多巴组、左旋多巴加补肾养肝组 ,每组 10只。各组药物处理每日 1次 ,12周后处死取材。结果 :(1)模型组纹状体多巴胺(DA)、多巴克 (DOPAC)、高香草酸 (HVA)含量及DOPAC/DA、HVA/DA显著低于假手术组 (P <0 0 5 ) ,降低幅度约为 90 % ;左旋多巴组DA、DOPAC、HVA含量及DOPAC/DA、HVA/DA明显高于假手术组 ;左旋多巴加补肾养肝组DA、DOPAC、HVA含量及DOPAC/DA、HVA/DA显著低于左旋多巴组 (P <0 0 5 ) ,接近假手术组水平 (P >0 0 5 )。 (2 )模型组纹状体酪氨酸羟化酶 (TH)活性显著低于假手术组 ,左旋多巴组较模型组显著降低 ,左旋多巴加补肾养肝组纹状体TH活性显著高于左旋多巴组 (P <0 0 5 )。 (3)左旋多巴加补肾养肝组中脑THmRNA表达明显高于左旋多巴组。结论

偏侧帕金森病模型猴脑黑质和纹状体的超微结构变化

目的 :观察偏侧帕金森病 (Parkinson sdisease,PD)模型猴脑黑质和纹状体的超微结构变化 .方法 :对 2只恒河猴经右侧颈内动脉注射 1 甲基 4 苯基 1 ,2 ,3,6 四氢吡啶 (MPTP)制备成偏侧PD模型猴后 ,应用透射电镜观察黑质和纹状体神经元和神经胶质细胞的超微结构变化 .结果 :偏侧PD模型猴MPTP注射侧黑质和纹状体的超微结构均呈病理性改变 :神经元细胞线粒体肿胀和部分空泡化、粗面内质网和高尔基复合体囊腔扩张、脂褐素增多 ,星形胶质细胞呈增生性改变 .MPTP注射侧对侧黑质和纹状体的超微结构未发现异常变化 .结论 :黑质和纹状体的超微结构的病理性变化从而导致黑质 纹状体 黑质环路功能障碍 。

人参再造丸联合美多巴对帕金森病模型大鼠黑质纹状体TH阳性神经元的影响

目的 :观察人参再造丸联合美多巴对帕金森病模型大鼠黑质纹状体TH阳性神经元的影响。方法 :PD鼠 80只 ,随机分为 4组 :对照组、美多巴组、人参再造丸组、人参再造丸联合美多巴组。于喂养 4个月后取黑质纹状体组织免疫组化染色 ,检测TH阳性神经元的分布、密度。结果 :美多巴组黑质TH阳性神经细胞及纹状体TH阳性终末较生理盐水组明显减少 ,而人参再造丸组略有增多达5 %～ 8% ,联合组增多较显著达 2 0 %～ 2 5 %。结论 :人参再造丸对PD大鼠黑质纹状体毒性作用较轻 ,人参再造丸联合美多巴可改善TH阳性神经元的病理改变。

1H-MRS检测早期帕金森病纹状体、黑质的功能代谢

目的探讨1H-MRS检测早期帕金森病(PD)患者纹状体和黑质代谢变化的可能性。材料与方法 44例经临床确诊的双侧肢体症状不伴痴呆的早期PD患者纳入研究,32名年龄、性别等相匹配的健康志愿者作为对照组,两组均进行纹状体单体素1H-MRS及黑质多体素1H-MRS检查。PD患者33例获得纹状体MRS谱线,32例获得黑质MRS谱线;志愿者31名获得双侧纹状体MRS谱线,28名获得双侧黑质谱线。测量豆状核、黑质区域NAA、Cho、Cr及各参数比值,并进行比较分析。结果 PD组及对照组左右侧纹状体、黑质NAA、Cho、Cr各参数比值的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。PD组纹状体NAA/Cr较对照组降低(P<0.05),其余各参数比值与对照组无明显差异(P>0.05);黑质各参数值两组间的差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论 1H-MRS能检测双侧症状不伴痴呆的早期PD患者纹状体代谢异常,有助于早期PD的诊断。

胆红素脑病仔兔黑质-纹状体系神经元计数及超微结构的研究

目的探讨胆红素对黑质 纹状体系神经元的毒性作用及损伤程度。方法 30只纯系日产大耳白仔兔随机分为 3组 :对照组 (C组 ,6只 )腹腔注射生理盐水 1ml ,注射后 6小时灌杀 ;模型 1组 (N1组 ,12只 )腹腔注射胆红素 10 0mg/kg ,分别于给药后 6小时 (N1a组 ,6只 )、16小时 (N1b组 ,6只 )灌杀 ;模型 2组 (N2 组 ,12只 )腹腔注射胆红素 2 0 0mg/kg ,分别于给药后 6小时 (N2a组 ,6只 )、16小时 (N2b组 ,6只 )灌杀。用图像分析仪进行细胞计数 ,电镜分析超微结构变化。结果N1b组黑质神经元数少于C组、N1a组(P <0 .0 5 ) ,N2b组黑质神经元数明显少于N1b、N2a组 (P <0 .0 5 )的黑质 纹状体系神经元数量减少 ,神经元超微结构有不同程度的改变。结论胆红素能减少黑质 纹状体系神经元数量 ,且剂量越大、时间越长 ,减少越明显 ;胆红素脑病时黑质、纹状体系神经元超微结构改变明显 ,且剂量越大、时间越长损伤越重 ;黑质、纹状体系的形态。

MPTP对小鼠黑质纹状体神经递质代谢相关基因表达的影响

目的 研究 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (1 methyl 4 phenyl 1,2 ,3,6 tetrahydropyridine ,MPTP)诱导的黑质纹状体系统神经递质代谢相关基因表达的变化。方法 通过MPTP注射诱导C5 7BL小鼠神经元损伤 ,利用逆转录PCR方法检测酪氨酸羟化酶 (TH)、单胺氧化酶B(MAO B)、多巴胺转运体 (DAT)、胆碱乙酰基转移酶 (ChAT)以及谷氨酸脱羧酶 (GAD6 5 )五种神经递质代谢相关基因的表达变化。结果 在小鼠黑质与纹状体中 ,MPTP导致TH基因表达显著降低以及GAD6 5基因表达的上升。MAO B、DAT、ChAT基因的表达变化在黑质与纹状体则有所不同 ,在黑质MPTP导致MAO B与ChAT基因表达的上升以及DAT基因表达下降 ,在纹状体MPTP导致MAO B与ChAT基因表达下降 ,而对DAT基因表达没有明显影响。结论 MPTP对不同神经递质代谢相关基因表达有不同的影响 。

黑质多巴胺触液神经元

将30％ HRP 8—10μl或3％碘化丙啶(PI)3μl分别注入两组动物单侧侧脑室内,48小时后将鼠处死,检查中脑切片。发现双侧黑质均司见HRP标记细胞群,但以同侧为主。标记范围以中脑中上部为多。标记细胞主要分布在黑质致密带内侧部,网状带中仅少数散在。注射PI例所见类同,但标记细胞远较HRP标记细胞为多。TH免疫组化法发现黑质DA神经元投射纤维分散布于尾壳核,并见TH阳性投射纤维在室管膜上皮细胞的深面形成密集的膨大,个别地区还见阳性终末突入侧脑室。另外,在接受胚中脑黑质移植存活良好的受体鼠纹状体中,发现少数移植存活的TH阳性黑质DA神经元胞体或其突起伸入侧脑室室管膜上皮细胞间甚或突入室腔。实验表明部分黑质多巴胺神经元系触液神经元,提示可能直接释放DA入脑脊液。当胚黑质细胞被移植入受体脑纹状体后,部分黑质DA神经元重演其发育的规律,将其突起或胞体伸入室管膜上皮细胞间或突入侧脑室,以代偿其原有的功能。

益智仁挥发油对帕金森病模型小鼠脑内纹状体和黑质损伤的影响

目的观察益智仁挥发油(VOA)脑保护作用的机制。方法C57BL小鼠随机分为正常对照组、帕金森病(PD)模型组、司来吉兰10mg·kg-1阳性对照组,VOA0.278,0.833和2.5mL·kg-1组。除正常对照和模型组外,各给药组分别预先ig给予VOA或司来吉兰,每天1次,连续12d。第6天开始,除正常对照组外,各组ip给予1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)30mg·kg-1,每天1次,连续7d,制备PD小鼠模型。末次给药后第2天处死小鼠,荧光分光光度法测定小鼠脑内纹状体高香草酸(HVA)和5-羟色胺(5-HT)含量,比色法检测纹状体内超氧化物岐化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,SABC免疫组化法测定黑质致密部神经细胞内Bcl-2和天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3(caspase 3)的表达。结果与正常对照组比较,模型组小鼠脑内纹状体HVA,5-HT和GSH含量显著下降,SOD活性下降,MDA含量明显升高;黑质致密部Bcl-2和caspase 3免疫阳性细胞数增加。预先给予VOA0.833和2.5mL·kg-1可明显抑制MPTP所诱导的HVA和GSH含量及SOD活性的降低,并抑制MDA含量升高,2.5mL·kg-1可明显抑制5-HT含量降低。VOA0.833和2.5mL·kg-1可增加黑质致密部Bcl-2免疫阳性细胞数,减少caspase 3免疫阳性细胞数。VOA2.5mL·kg-1的作用与司来吉兰的作用相近。结论VOA的脑保护作用可能与其增加脑内纹状体单胺类神经递质释放、减轻氧化应激反应以及减少黑质致密部神经元凋亡等因素有关。

MPTP对小鼠不同脑区神经递质代谢酶基因表达的影响

1-甲基 -4 -苯基 -1,2 ,3 ,6-四氢吡啶 (MPTP)能够诱发黑质纹状体系统多巴胺能神经元损伤并产生与帕金森病类似的症状。本实验通过 MPTP注射诱导 C5 7BL小鼠神经元损伤 ,利用逆转录 PCR方法检测酪氨酸羟化酶 (TH)、单胺氧化酶 B(MAO-B)以及胆碱乙酰基转移酶 (Ch AT)三种神经递质代谢相关基因的表达变化。结果发现 ,在小鼠黑质与纹状体中 ,MPTP导致 TH基因表达显著降低 ,而 MAO-B与 Ch AT基因的表达变化在黑质与纹状体则有所不同 ,在黑质 MPTP导致 MAO-B与 Ch AT基因表达的上升 ,在纹状体则略有下降。

损毁单侧黑质-纹状体通路的大鼠SVZ、纹状体和黑质神经前体细胞的变化

研究成年大鼠脑室下区 (SVZ)神经前体细胞 (neural precursors)在黑质 -纹状体通路损伤后的反应 ,本研究用 6-羟多巴胺单侧纹状体注射以损毁黑质 -纹状体通路 ,损毁 10 d后腹腔注射 Brd U ,连续 4d,每日两次 ;在 SVZ、纹状体和黑质部位用免疫组化方法检测 Brd U、nestin以及 GFAP阳性细胞。结果显示 :(1) 6-羟多巴胺损毁黑质 -纹状体通路后 ,伤侧 SVZ的 Brd U阳性细胞数明显增多 ,并成簇分布 ;nestin和 GFAP阳性细胞数也增多 ,但以 GF AP阳性细胞增多明显 ;(2 )伤侧纹状体可见大量 Br-d U、GFAP以及少量 nestin阳性细胞分布 ,而健侧只有少量 GFAP阳性细胞 ;(3 )伤侧可见 Brd U阳性细胞在 SVZ和纹状体之间呈条带样分布 ;(4 )伤侧黑质除酪氨酸羟化酶阳性神经元减少外 ,未见 Brd U、GFAP和 nestin阳性细胞表达。上述结果表明 ,6-羟多巴胺损毁黑质 -纹状体通路后 ,SVZ神经前体细胞活动增强 ,有向纹状体迁移的趋势。

Genistein对Parkinson病模型小鼠黑质纹状体通路的保护作用

为了研究大豆异黄酮活性成分genistein对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备的去卵巢(OVX)Parkinson病(PD)模型小鼠黑质纹状体通路的保护作用,我们将OVX PD小鼠随机分为对照组、MPTP组、genistein预处理组和雌激素预处理组,采用免疫组织化学染色结合逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测黑质致密带(SNpc)神经元酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况,采用高效液相色谱法(HPLC-ECD)检测小鼠纹状体(Str)多巴胺(DA)及其代谢物二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量。结果显示:Genistein及雌激素用药组SN内TH阳性神经元数量及THmRNA的表达水平较MPTP组显著升高(P<0.01)。MPTP组Str内DA及其代谢产物DOPAC和HVA的含量较对照组明显降低(P<0.01)。genistein及雌激素用药组Str内DA、DOPAC及HVA含量较MPTP组显著升高(P<0.01)。上述结果提示genistein对MPTP制备的PD模型小鼠黑质DA能神经元有明显的保护作用。

偏侧PD猴模型黑质和纹状体GFAP表达的变化

目的探讨偏侧帕金森病(PD)猴模型黑质和纹状体胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化。方法向3只恒河猴经单侧颈内动脉注射1-甲基4-苯基1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备偏侧PD猴模型,应用免疫组化染色方法观察3只偏侧PD猴模型和1只正常猴黑质和纹状体GFAP表达变化。结果偏侧PD模型猴MPTP毁损侧的黑质和纹状体GFAP免疫阳性细胞数目较对侧和正常对照猴明显增加,但MPTP毁损侧对侧的黑质和纹状体GFAP免疫阳性细胞数目未发现明显变化。结论偏侧PD猴模型MPTP毁损侧黑质和纹状体GFAP的表达增加,推测星形胶质细胞可能在黑质和纹状体神经元变性和死亡过程中起一定作用。

雌激素对PD模型大鼠黑质纹状体通路的保护作用及其机制探讨

目的研究雌激素(Estrogen)对6-羟基多巴(6-OHDA)制备的去卵巢(OVX)帕金森病(PD)模型大鼠黑质纹状体通路的保护作用及其可能机制。方法应用6-OHDA两点注射单侧损毁内侧前脑束(MFB)制备OVXPD模型大鼠,侧脑室给予17-β雌二醇(17-βestradiol,1μg/5μl),观察大鼠旋转行为、黑质酪氨酸羟化酶(TH)基因表达、黑质铁染色阳性细胞数量和纹状体内多巴胺(DA)及其代谢产物含量的变化。结果雌激素用药组可明显减少阿朴吗啡诱导的PD模型大鼠单侧旋转行为(P<0.01)。在损毁侧黑质,雌激素用药组TH基因的表达较PD模型组明显增加(P<0.01);纹状体DA及其代谢产物亦较PD模型组显著升高(P<0.01)。黑质铁染色阳性细胞数量较PD模型组明显减少(P<0.01)。结论雌激素对PD模型大鼠黑质DA能神经元有明显的保护作用,其作用机制可能与降低铁负载有关。

MPTP对小鼠黑质与纹状体KIF基因表达的影响

目的 :揭示 1 -甲基 - 4 -苯基 - 1 ,2 ,3 ,6 -四氢吡啶 (MPTP)对C57BL小鼠黑质与纹状体神经元驱动蛋白超家族 (KIF)基因表达的影响。方法 :腹腔注射MPTP建立小鼠帕金森病动物模型 ,通过RT -PCR方法检测KIF1A、KIF2、KIF3A、KIF4与KIF5A基因的表达。结果 :在黑质中 ,MPTP造成KIF基因表达的普遍下降 ,只有KIF2基因表达无明显变化。在纹状体中则有所不同 ,KIF1A、KIF3A与KIF4基因表达上升 ,而KIF2与KIF5A表达的变化与在黑质中相似。结论

纹状体梗死后黑质继发性损害的弥散张量成像

目的探讨纹状体梗死后黑质继发性损害的发生发展过程及其潜在意义。方法连续收录初次发病、具有单侧基底节区局灶性梗死灶,纹状体明显受累的脑梗死患者11例。招募年龄性别相匹配健康志愿者11名作对照研究。患者分别在发病的第1周(W1)、第4周和第12周(W12)进行常规MRI和弥散张量(diffusion tensorimaging,DTI)检测,以及美国国立卫生研究院卒中评分(national institute health stroke scale,NIHSS)、Barthel生活指数(Barthel Index,BI)评定,在W12对部分有类似于帕金森氏病症状的患者采用帕金森氏病综合评分量表(unifiedParkinson s disease rating scale,UPDRS)的第Ⅲ分量表评价其严重程度。对照组于相同时间间隔进行DTI检测。结果与对照组比较,患者梗死灶同侧黑质的平均弥散量(mean diffusivity,MD)在各个时间点均明显升高:W1(对照组:0.709±0.005,患者组:0.732±0.121,P<0.01),W4(对照组:0.710±0.005,患者组:0.776±0.067,P<0.01),W12(对照组:0.713±0.005,患者组:0.904±0.112,P<0.01);而且随时间延长有逐步升高的趋势。有1例患者出现类似于帕金森氏病的症状,UPDRS的第Ⅲ分量表评分为18分。结论 DTI可以检测到纹状体梗死后黑质继发性损害的程度及其发展过程;黑质的继发性损害可能与患者出现类似于帕金森氏病的症状有关。

MPTP对小鼠黑质及纹状体活性氧自由基代谢酶基因表达的影响

活性氧自由基是 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (1 methyl 4 phenyl 1,2 ,3,6 tetrahydropyridine,MPTP)诱发多巴胺能神经元损伤的一种可能性因素。通过MPTP注射诱导C5 7BL小鼠神经元损伤 ,利用逆转录PCR方法检测铜锌超氧化物歧化酶 (CuZn SOD)、锰超氧化物歧化酶 (Mn SOD)以及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH PX)三种相关基因的表达变化。结果显示 ,在小鼠黑质与纹状体中 ,MPTP导致Mn SOD基因表达显著降低 ,而CuZn SOD与GSH PX基因的表达则没有明显变化。推测Mn SOD基因表达的变化可能与MPTP对线粒体的毒性作用有关。

1H—MRS检测正常中老年人纹状体和黑质代谢功能

目的探讨中老年人纹状体和黑质1H—MRS各参数值正常参考范围。方法纳入健康中老年志愿者32名，采用单体素PRESS序列对纹状体、多体素PRESS序列对黑质进行1H—MRS扫描，分析N-乙酰天门冬氨酸（NAA）、胆碱（Cho）和肌酸（Cr）含量及各参数比值。结果左右侧纹状体和黑质NAA／Cr、Cho／Cr、NAA／Cho、NAA／（Cho＋Cr）差异均无统计学意义（P均〉0．05）。综合两侧结果，纹状体NAA／Cr、Cho／Cr、NAA／Cho、NAA／（Cho＋Cr）均值及95％C1分别为1．39（1．33～1．45）、0．90（O．86～0．94）、1．58（1．50～1．66）、0．73（0．70～O．76）；黑质上述比值均值及95％C1分别为2．36（1．85～2．87）、1．38（1．12～1．65）、1．70（1．59～1．81）、0．93（0．86～1．00）；纹状体及黑质中NAA／（Cho＋Cr）比值均最稳定。结论正常中老年人黑质和纹状体’H—MRS各参数中，NAA／（Cho＋Cr）比值最稳定，可为研究累及黑质和纹状体区域的疾病提供正常参照。

MPTP作用下小鼠黑质和纹状体中不同时期基因表达变化

目的了解帕金森病小鼠模型黑质和纹状体中差异表达的基因以及在MPTP作用后不同时间点基因表达变化的规律。方法取16只SPF级C57BL/6J小鼠,用数字表法随机分为2组。MPTP组:30mg/kgMPTP腹腔注射1次。对照组:注射等量生理盐水。制模后分别在1d和2个月时分离黑质和纹状体。抽提总RNA,利用寡核苷酸芯片分析1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)作用下不同时间点的差异表达基因。结果所检测的1200个基因中,黑质在制模后第1天有13个基因差异表达,2个月时有6个基因差异表达;纹状体中第1天有12个基因差异表达,2个月时有13个基因差异表达。差异表达的基因与多种生理过程,如应激反应、蛋白质磷酸化、蛋白酶体系统、信号转导等密切相关。结论帕金森病的发生、发展过程涉及到多种基因表达水平和多个生理过程的改变。黑质中γ-氨基丁酸通路以及纹状体中蛋白质的磷酸化水平和正确折叠在MPTP小鼠模型中发生了显著变化。

6-OHDA损毁大鼠黑质对纹状体感觉门控的影响

目的观察大鼠纹状体是否存在听觉诱发的感觉门控,并观察6-OHDA损毁大鼠黑质对纹状体感觉门控的影响.方法建立6-OHDA致单侧黑质致密带(SNc)DA神经元损毁性PD大鼠模型,于纹状体内埋置记录电极,记录清醒、自由活动状态下正常雌鼠和PD雌鼠纹状体感觉门控(SG)的变化.结果(1)正常雌性SD成年大鼠(C组n=22)纹状体SG的T/C正常值为(60.19±8.83)%;(2)PD组(n=19)SG的T/C值为(42.34±5.81)%,与纹状体SG正常值(C组)相比,其T/C值降低,有显著性差异(P<0.05).结论大鼠纹状体存在听觉感觉门控,损毁大鼠单侧黑质可致同侧纹状体SG的T/C值显著下降.