Cloning of Tap Ⅱ Chalcone Isomerases(CHI1 A) Gene and Construction of Lactococcus Lactis Expression Vector

[Objective]The aim was to clone TapⅡchalcone isomerases（CHI1 A） from soybean specially and construct expression vector of PNZ8149-CHI1 A,and then transform it into Lactococcus Lactis NICE systers.[Method]Chalcone isomerases（CHI1 A） was cloned by RTPCR method,and it was sequenced after cloning into pMD18-T vectors,and recombined to expression vector PNZ8149-CHI1 A,then it was transformed into Lactococcus Lactis NZ3900[Result]The sequencing results indicated that the cloned fragment of CHI1 A contained 670 nucleotides,and shared a sequence homology of 92% with that from Genbank accession number AF595413（CHI1 A）.CHI1 A was transformed into NICE expression system successfully by identification of PCR and digestion.[Conclusion]The foundation of using the microorganism fermentation method to produce flavonoids was laid by construction of efficient induction expression vector with chalcone isomerases CHI1 A.

大豆查尔酮异构酶基因的克隆及乳酸菌表达载体的构建

[目的]将特异存在于豆科植物的II型查尔酮异构酶基因CHI1A构建到目前最有效的食品级乳酸乳球菌NICE诱导表达系统中。[方法]利用RT-PCR技术从大豆总RNA中克隆CHI1A基因,连入pMD18-T克隆载体中并进行测序,然后重组到乳酸乳球菌表达载体PNZ8149-CHI1A,利用电穿孔方法转入乳酸乳球菌NZ3900中。[结果]克隆得到CHI1A完整开放阅读框670bp,与已报导序列(GenBankAY595413)的同源性达到99%;通过PCR和酶切鉴定,成功地将CHI1A导入到NICE表达系统中。[结论]含有CHI1A基因的乳酸乳球菌高效诱导表达载体的构建为利用微生物发酵产生类黄酮奠定基础。

pH调控和蔗糖流加控制对乳酸链球菌素发酵的影响

研究了乳酸乳球菌发酵过程中pH调控和补料对产物生成的影响.研究采用三种不同的pH调控方式(初始pH7.0):(1)恒定pH6.8;(2)当pH降到6.2时恒定pH6.2;(3)发酵6h后每2h调节pH至6.8.结果表明,在发酵过程中按方式2调节pH与不调控pH相比,乳酸链球菌素效价提高了2.48倍.分别选用了4、5、6和8g.(L-1.h-1)蔗糖流加速度,当按5g.(L-1.h-1)恒速流加蔗糖溶液,乳酸链球菌素效价提高约2.9倍.

乳酸菌Nisin诱导表达载体的构建和鉴定

为构建乳酸菌Nisin诱导表达载体,实现外源目的基因在乳酸菌中的可控表达,本研究以产Nisin乳酸乳球菌染色体DNA为模板,采用PCR技术扩增双组份调控元件nisRK基因和诱导型启动子nisA基因,并克隆至乳酸菌-大肠杆菌穿梭质粒pW425et中,以nisA基因替换原组成型启动子P32,构建乳酸菌Nisin诱导表达载体pW425N。为检测载体的诱导表达功能,以gfp基因作为报告基因,构建重组表达载体pW425N-gfp,以分离自仔猪肠道内嗜酸乳杆菌为受体菌,电转化法制备重组乳酸菌pW425N-gfp/L.acidophilus。结果表明,重组载体能够在Nisin诱导下表达目的荧光蛋白,并且最佳Nisin有效浓度为30 ng/mL,最佳诱导时间为3 h。该表达载体的构建为外源功能性蛋白在乳酸菌中的诱导表达奠定基础。

天然保鲜剂与冰温保鲜协同对牛肉保鲜效果的研究

本文以牛肉为研究对象,进行了0~4℃冷藏、冰温保鲜及两者分别与天然保鲜剂(0.10%茶多酚+1.00%壳聚糖+0.08%乳酸链球菌素)结合等4种保鲜方式对牛肉保鲜效果的比较研究,分别测定牛肉贮藏第1、3、5、7、9、11、13、15、17 d的菌落总数、挥发性盐基氮含量(TVB-N值)、吊挂损失率及感官特性等指标。结果表明:冰温保鲜效果明显优于冷藏保鲜,可使牛肉的货架期由5 d延长至7 d。天然保鲜剂与冰温保鲜、冷藏保鲜均有很好的协同作用;天然保鲜剂与冰温保鲜结合对牛肉保鲜效果最优,在第15 d时牛肉菌落总数对数值为4.96,TVB-N值为14.66 mg/100 g,吊挂损失率小于0.37%,总体可接受性评分为56.70,显著优于其他处理组(p<0.05),可将牛肉货架期延长至15 d。

鲜切果蔬保鲜技术及方法研究进展

鲜切果蔬富含维生素、矿物质等营养物质,是面向消费者更便捷、营养、且新兴发展的一类果蔬产品,但是在加工过程中会造成细胞损伤,组织液外流,为微生物的生长繁殖提供了条件,进而加速其褐变、失水、腐烂等。为延长鲜切果蔬的保鲜期,近年来,鲜切果蔬的保鲜技术成为研究热点。该文综述了国内外鲜切果蔬保鲜技术的研究,论述了鲜切果蔬褐变机理与腐烂机制,探讨了物理、化学和生物保鲜方法以及包装材料对鲜切果蔬贮藏品质的影响,并对现有鲜切果蔬保鲜技术存在的问题和对策进行了展望。

乳酸乳球菌表达系统的发展现状与前景展望

乳酸乳球菌作为全球公认安全的微生物,具有多种益生作用,常被用作基因工程宿主菌。在过去的二十年中,乳酸乳球菌作为载体在递呈病毒、细菌抗原等方面得到了广泛的应用,并且在不同领域发挥着重要作用。本文以乳链菌肽控制的表达(nisin-controlled expression,NICE)系统为例,介绍了基于乳酸乳球菌的表达系统的组成、不同组分的功能特点以及该表达系统在食品、疫苗和畜牧兽医等领域的应用,总结分析了NICE系统的特点以及需要改进的地方,并对该表达系统未来的发展前景进行了展望。

pNZ8149-IL21基因乳酸菌表达载体的构建与表达特性

构建重组质粒pNZ8149-IL21,并将其转到乳酸球菌中,利用Nisin诱导基因表达系统分析重组质粒在乳酸球菌中的表达。采用基于聚合酶链式反应的精确合成(PCR-based accurate synthesis,PAS)的方法,合成目的基因IL21,连入载体pUC57,获得重组质粒pUC57-IL21;对含有目的基因的pUC57-IL21和pNZ8149质粒进行双酶切后,构建pNZ8149-IL21质粒;采用电转化方法将连接产物转化进NZ3900,涂板挑取12个单菌落培养后,进行PCR验证,筛选出阳性克隆,从诱导剂Nisin的浓度(30,50和100 ng/m L)和诱导时间(12和24 h)进行诱导条件优化分析IL21在乳酸菌中表达。目的蛋白在乳酸菌NZ3900中得到表达,在50 ng/m L的Nisin诱导24 h可见目的蛋白在相对分子质量15 k左右有条带表达,Nisin诱导24 h的效果优于12 h。结果说明选择乳酸菌作为载体表达系统,构建IL21高表达的重组乳酸菌是可行的。

发酵罐中蔗糖流加控制和pH调控对乳酸链球菌素产量的影响

主要研究了乳酸乳球菌发酵过程中调控pH和补加蔗糖对乳酸乳球菌发酵生产及其发酵产物乳酸链球菌素效价的影响,通过将pH恒定为乳酸链球菌素产生的最佳值6.8,与不经过pH调控的乳酸乳球菌发酵生产的乳酸链球菌素效价对比,效价提高了1.2倍。分别选用2g/L·h和4g/L·h的蔗糖流加速度,当按4g/L·h恒速流加蔗糖溶液时,乳酸链球菌素效价提高约50.5%。