Recovery and Biological Properties of Nitrate Non-utilizing Mutants of Rice Blast,Magnaporthe grisea

Eleven nitrate non-utilizing (nit) mutants were recovered from six isolates of Magnaporthe grisea cultured on MM media -amended with 60 g/L potassium chlorate, with a frequency of 1.42 %. Some biological properties, such as growth rate, growth biomass, cultural characters, conidial production, sexual reproduction ability, and pathogenicity were compared between nit mutants and their parent isolates. Results showed that all the nit mutants were resistant to chlorate. Some important biological properties such as the growth rate on YPSA, conidial production ability on TPSA, pathogenicity, had no significant differences between nit mutants and their parent isolates. Mating type didn't change, but perithecia production ability of fertile isolates changed significantly as compared with that of their parent isolates. Therefore, the nit can be used as a genetic marker to study the genetics such as pathogenicity, fungicide resistance in Magnaporthe grisea.

Nit突变体技术在玉米弯孢菌研究中的应用

采集了河南省12个地区的玉米弯孢菌叶斑病标样,分离获得了34个菌株,其中3个是画眉草弯孢(Curvu-laria eragrostidis),其余均为新月弯孢(C.lunata)。利用含KClO3的培养基对其中14个新月弯孢菌株和1个画眉草弯孢菌株(XZ3c)进行诱导,在MM培养基上鉴定均获得了Nit突变体。对获得的190个Nit突变体在MO2和MH培养基上进行了生理表型的划分,并用于菌株内、菌株间的营养体亲和性研究,发现有不少配对组合中均出现了明显的亲和现象,表明Nit突变体技术可以用于玉米弯孢病菌营养体亲和性的研究。根据亲和性测定的结果将这15个菌株初步分为2个营养体亲和群。

以nit和抗药性为遗传标记研究稻瘟病菌的无性重组

采用硝酸盐利用缺陷突变体(Nitratenon utilizingmutants,nit)为遗传标记研究了稻瘟病菌对异稻瘟净的抗药性在无性重组过程中的遗传学。在DY23(nit1LR)×A73(nitM S)、A73(nitM S)×F42(nit1MR)和F42(nit1MR)×DY24(nitA LR)3个配对组合中都检测到了无性重组体,重组频率分别为7.31%、14.00%和8.63%。大多数无性重组体都有较好的生长、产分生孢子能力和致病力,表明无性重组体有较高的适合度。这些结果说明由菌丝融合导致的无性重组在稻瘟病菌对异稻瘟净的抗药性群体发展中可能起着重要的作用。

新月弯孢菌营养体亲和群鉴定方法探讨

采用菌株直接配对、显微镜观察菌丝融合和硝酸盐缺陷型 ( nit)突变体互补测试法 ,对 44个来自不同地区的玉米弯孢菌叶斑病叶中的新月弯孢菌 ( Curvularia lunata)菌株进行了营养体亲和性分析。在野生型菌株的两两配对中 ,C.lunata菌株接触产生 4种反应类型 ,但无明显的抗衡反应产生。在菌丝融合显微观察中 ,光学显微镜下只见大多数菌丝反应为一菌丝向另一菌丝无限靠近 ,未见融合 ,但在电子显微镜下 ,发现两菌丝细胞已不再是独立的。这些结果表明 ,因两菌落间的抗衡反应和菌丝融合特征都不明显 ,故不宜采用直接配对和显微观察来划分 C. lunata的营养体亲和群。在 nit突变体互补测试中 ,菌株在 KCl O3 浓度 1 .5 %~ 3.0 %的 KPS中诱导表明 ,2 .0 %~ 3.0 % KCl O3 适宜于大多数菌株。抗氯酸盐突变体在 Czapek培养基中能鉴定出 nit突变体 ,但在 MM上却不能。全部 364 0抗氯酸盐突变体在 Czapek中共鉴定出 2 40个稳定的 nit突变体 ,其中 nit1占 5 9.2 % ,nit3占 39.2 % ,Nit M占 0 .8% ,nit D( 3种氮源都不能利用 )占 0 .8%。44个菌株中 ,2 4个 ( 5 5 % )获得了 nit突变体 ,2 0个 ( 45 % )还没有 ,仅 2个菌株 ( 1 2 4和 1 5 5 )各获得了 1个 Nit M突变体。各菌株突变体类型间只有 Nit M与 nit1或 nit3是异?

向日葵黄萎病菌营养亲和性及致病力分化

为进一步研究向日葵黄萎病病原菌的变异规律及不同菌株致病力差异,本研究以采自于黑龙江、内蒙古东部和西部、河北、陕西、宁夏、新疆等向日葵黄萎病发生严重的地块,并经分离纯化后得到的120株菌株为材料,开展了菌株间营养亲和性、致病力分化研究。结果表明:利用硝酸盐营养缺陷型突变体(nit)技术可将120株菌株分为3个亲和群(VCGs),3个亲和群分别有89株、13株、7株,此外,还有11株未能鉴定出亲和群。通过对3个鉴别寄主的致病力测定,120株菌株可分为3个致病类型,强致病力(I)占7.3%,中等致病力(II)占52.7%,弱致病力(III)占40%,菌株致病力存在明显的差异。研究同时表明菌株间营养亲和性与地理位置没有明显的相关性,但与致病性类型具有一定的相关性。

粉被虫草无性型单孢子株间和单孢子株内的营养亲和性

在含5％氨酸钾的KMM和KPS培养基上,粉被虫草无性型以3种途径产生不利用硝酸盐的突变株（nit突变株）。（1）由菌落基质菌丝形成的快速生长气生菌丝角变;（2）菌落表面快速生长的气生菌丝;（3）菌落基质菌丝缓慢生长形成的基质菌丝角变。来自18个单孢子株的94个nit突变株中,64.8％的突变株是稳定的。配对试验结果表明:在全部19个配对中,单孢子株内配对率为57.9％,单孢子株间配对率为42.1％。在全部nit突变株中,Cp-14c3突变株与其它突变株间的配对率最高（18.2％）。单孢子株间配对率高的孢子株是Cp-14Cp-7,Cp-5和Cp-6,将来自Cp-14同一单孢子株的Cpe-14C3分别与Cp-14cl和Cp-14c4nit突变株配对后发现,它们形成的浓密生长配接线的颜色是不相同的,前者橙色,后者白色。统计结果发现,所试全部的单泡子株可分成11个营养亲和群（VCGs）,那些含有易与其它菌株配对的nit突变株的单孢子株,如Cp-1,Cg-4,Cp-5,Cp-6,Cp-7,Cp-13,和Cp-14等皆在同一营养亲和群内。用Hochest33258荧光染色观察发现,野生型菌株的菌丝和分生孢子单核,nit突变株的少量分生孢子中可见双核,互补配对形成的浓密菌丝丛中的分生孢子则常见双核。

蛹虫草(Cordycepsmilitaris)无性型的多型现象

在萨氏琼脂和PDA上，蛹虫草Cordycepsmilitaris（Vuill）Fr.无性型，蛹草拟青霉Paecilomycesmilitaris(Kob）Br.＆Sm．的一些单孢子株可自发产生突变，基于多型现象及其它形态特征可分三种类型：（1）具野生型菌株特征；产孢结构拟青霉型（Paecilomyces－type），稳定，菌落通常不自发产生角变，大多数单孢子株属此类群。（2）属此类群的单孢子株，在PDA上可形成亮褐色至橙黄色的角变，它们典型的产孢结构为瓶梗轮生，分生孢子常聚集成头状的轮枝孢型（Verticillium－type）。在查氏培养基上则相反，拟青霉型的产孢结构占优势。单孢子株Cm-71是这一类群的代表。（3）单孢子株Cm－42是在所观察单孢子株中形态特征独特的菌株。在PDA上菌丝生长纤细，蛛网状，产孢结构轮枝孢型。蛹草拟青霉对氯酸钾（KClO3）不敏感，在浓度为6％（W／V）的KMM培养基上，23～24℃14天菌落的直径仅1～2cm，无气生菌丝生长。各单孢子株形成的不利用硝酸盐突变株（nit突变株）的途径和形态特征，也可分成类似于粉被虫草CordycepspruinosaPeteh不利用硝酸盐突变株（nit突变株）的三种类型。

炭疽菌不利用硝酸盐突变体的筛选及鉴定

将从杉木和大叶黄杨上分离获得的８个胶孢炭疽菌（Colletoctrichum gloeosporioides）分离物培养在含氯酸钾的平板上，得到快速生长抗氯酸钾的不利用硝酸盐的突变体(Nit)。所有的突变体经鉴定分属于３种表现型，即硝酸还原酶结构位点（nit１），硝酸盐同化途径的专化调节位点（nit３），和钼辅因位点（nitM）。分离物发生突变的频率随氯酸钾浓度的增加而提高，并且不同的氮源在一定程度上会影响突变表型种类。除ＣＣ３外，所有的分离物都是自身亲和的，即不同表型的突变体能遗传互补，其中来源于杉木上的两个分离物属于同一个营养体亲和群（ＶＣＧ），其余的分离物属于不同的ＶＣＧ群。