NPRL2调控去势抵抗型前列腺癌对奥拉帕尼的敏感性

目的探讨NPRL2在改善去势抵抗型前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)对Olaparib敏感性的作用。方法收集良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)、普通前列腺癌(prostate cancer,PCa)和CRPC患者手术标本进行NPRL2的免疫组化染色,观察NPRL2在上述组织中的表达差异。Western blot检测正常前列腺上皮细胞RWPE-1、前列腺癌细胞LNCaP和耐恩杂鲁胺的去势抵抗型前列腺癌细胞LNPER中NPRL2蛋白的表达情况。通过慢病毒转染到CRPC细胞建立NPRL2的过表达和干扰,实时定量荧光PCR(qPCR)和Western blot验证NPRL2过表达和干扰效率,蛋白免疫印迹检测ATM蛋白表达。CCK-8法检测细胞增殖和细胞毒性,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室侵袭和迁移实验检测细胞侵袭转移。结果免疫组化结果显示NPRL2在CRPC组织中呈现高表达。Western blot结果显示NPRL2在RWPE-1细胞中低表达,在LNCaP和LNPER细胞中高表达,并成功构建过表达和干扰NPRL2的稳定株,q PCR及Western blot结果显示慢病毒转染能明显增高和降低NPRL2的mRNA和蛋白水平(P <0. 01)。CCK-8、流式细胞术和Transwell实验结果显示,与阴性对照比较,沉默NPRL2联合Olaparib能明显抑制细胞生长、阻止细胞侵袭转移和促进细胞凋亡(P <0. 01)。NPRL2与ATM表达呈正相关,NPRL2过表达联合Olaparib显著增加ATM表达。结论沉默NPRL2可增加CRPC细胞对Olaparib的敏感性。

CTP-NPRL2融合蛋白对肾癌原代细胞迁移侵袭能力的抑制及机制研究

目的将原核表达的氮酶调节因子2(nitrogen permease regulator 2-like,NPRL2)融合蛋白通过胞浆转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)转入肾癌原代细胞内,观察其对肾癌原代细胞迁移侵袭的影响,并分析与肾癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系。方法胶原酶消化法培养肾癌原代细胞;构建原核表达质粒pET15b-CTP-NPRL2和pET15b-NPRL2,表达融合蛋白CTP-NPRL2和NPRL2,并通过Western blot鉴定目的蛋白的表达。将培养成功的原代细胞分为BLANK组、NPRL2组和CTP-NPRL2组。免疫荧光检测目的蛋白的细胞定位;Transwell迁移侵袭实验检测导入NPRL2蛋白后,对肾癌细胞迁移侵袭能力的影响;Real-time PCR检测Raptor、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤粘蛋白(Fibronectin)m RNA表达水平;Western blot检测Raptor、E-cadherin、Vimentin、Fibronectin蛋白表达水平。结果成功培养出肾癌原代细胞并通过鉴定;测序结果及Western blot检测结果显示质粒构建成功并表达出目的蛋白;免疫荧光检测结果显示CTP-NPRL2融合蛋白可以穿过胞膜并定位于胞浆;迁移和侵袭实验显示CTP-NPRL2组肾癌细胞迁移侵袭能力明显下降(P<0.05);Real-time PCR和Western blot检测结果显示CTP-NPRL2组Raptor、Vimentin与Fibronectin的m RNA、蛋白表达水平与NPRL2组和BLANK组相比明显降低(P<0.05),而E-cadherin的mRNA、蛋白表达水平与NPRL2组与BLANK组相比明显升高(P<0.05)。结论 NPRL2可能通过与Raptor相互作用影响mTORC1的活性,进而调节EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Fibronectin的表达量,影响肾癌细胞的迁移侵袭能力。

结直肠癌癌组织NPRL2、PIVKA-Ⅱ的表达水平及临床意义

目的研究结直肠癌癌组织氮透性调节剂样2(NPRL2)、人异常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)的表达水平及临床意义。方法回顾性分析十堰市太和医院2015年3月至2017年3月收治的68例择期行根治术治疗的结直肠癌患者的临床资料。利用免疫组化检测结直肠癌组织、癌旁组织及正常结肠组织标本中NPRL2、PIVKA-Ⅱ的蛋白表达水平,分析两者与患者临床特征及3年生存率之间的关系,并利用Spearman分析NPRL2、PIVKA-Ⅱ的相关性。结果结直肠癌组织中NPRL2蛋白阳性表达率(32.35%)显著低于癌旁组织(88.24%)及正常结肠组织(90.00%),PIVKA-Ⅱ的蛋白阳性表达率(54.41%)显著高于癌旁组织(2.94%)及正常结肠组织(0),差异有统计学意义(P<0.05);Dukes分期C、D期结直肠癌组织中NPRL2的蛋白阳性表达率(21.88%、8.33%)显著低于A+B期(58.33%),Dukes分期C、D期PIVKA-Ⅱ的蛋白阳性表达率(75.00、100.00%)显著高于A+B期(4.17%),差异有统计学意义(P<0.05);NPRL2的蛋白阳性表达率与肿瘤淋巴转移、肝转移、临床TNM分期有关(P<0.05),PIVKA-Ⅱ的蛋白阳性表达率与肿瘤的肝转移、临床TNM分期有关(P<0.05);68例结直肠癌患者有32例患者死亡,3年生存率为52.94%。NPRL2蛋白阳性表达患者的3年生存率(77.27%)显著高于蛋白阴性表达(41.30%),PIVKA-Ⅱ蛋白阳性表达组患者的3年生存率(37.84%)显著低于蛋白阴性组(70.97%),差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析结果显示,结直肠癌组织中NPRL2蛋白与PIVKA-Ⅱ蛋白的阳性表达率呈负相关(r=-0.438,P<0.05)。结论在结直肠癌组织中NPRL2表达降低、PIVKA-Ⅱ表达升高,且与临床病理参数有一定的关联,同时对于预后评估也有一定的参考价值。

NPRL2对结肠癌HT29细胞系自噬和凋亡的影响

目的:探讨NPRL2对人结肠癌细胞自噬的影响,并进一步探讨自噬和凋亡的关系。方法:构建过表达NPRL2慢病毒载体,转染至HT29细胞。检测转染48h后NPRL2、LC3B和p62蛋白表达量,吖啶橙染色检测细胞自噬。用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理转染后细胞,测定细胞增殖,细胞死亡,细胞caspase-3活性,细胞凋亡和caspase-3、Bax、Bcl-2、LC3B及p62的蛋白表达量,吖啶橙染色检测细胞自噬。结果:免疫印迹法检测结果表明NPRL2能够激活HT29细胞的自噬。前期研究结果表明,NPRL2能够促进HT29细胞凋亡。进一步研究NPRL2激活的自噬与凋亡之间的关系,结果表明3-MA抑制由NPRL2诱导的自噬,降低细胞活力,抑制其增殖,促进其凋亡,并促进活化caspase-3和Bax的表达,抑制Bcl-2的蛋白表达和细胞自噬。结论:NPRL2能够促进HT29细胞的自噬,但这种自噬抑制了NPRL2引起的细胞凋亡,通过抑制3-MA抑制NPRL2引起的自噬能够有效地促进结肠癌细胞的凋亡。

NPRL2基因的研究进展

氮渗透酶调节酶2(NPRL2)基因既往被称为肿瘤候选基因4,定位于人染色体3p21.3区域。该基因目前已在肺癌、乳腺癌、肾癌、结直肠癌、前列腺癌和膀胱癌等多种肿瘤和某些非肿瘤疾病(如癫痫等)中得到研究,但有关其机制的报道存在差异。近年来,研究发现NPRL2在细胞氨基酸缺乏状态下参与mTORC1信号通路的调控并能影响细胞自噬。鉴于该基因功能的多样性和在肿瘤等疾病中的重要性,该文梳理了NPRL2基因分子结构、细胞组织分布、生物功能学的研究现况并作一综述,以便于为该基因的后续研究提供信息便利。

双歧杆菌介导CTP-NPRL2对裸鼠肾癌生长及凋亡的影响

目的探讨双歧杆菌介导CTP-NPRL2对裸鼠肾癌生长及凋亡的影响。方法构建pET15b-CTP-NPRL2并电转双歧杆菌,Western blot验证蛋白表达。采用肾癌细胞悬液皮下注射法建立裸鼠肾癌模型,并分为观察组与对照组(每组8只),分别经尾静脉注射携带pET15b-CTP-NPRL2的双歧杆菌与生理盐水,每周1次,4周后处死裸鼠,称取裸鼠及荷瘤质量,TUNEL法检测肾癌组织凋亡。结果观察组与对照组裸鼠质量分别为(26.24±1.98)g、(23.28±2.17)g,荷瘤质量分别为(1.37±0.12)g、(1.68±0.18)g,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。TUNEL检测显示观察组凋亡指数(23.27±5.14)%明显高于对照组(10.37±2.58)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论双歧杆菌介导CTP-NPRL2对裸鼠肾癌生长具有抑制功能,并明显增加了肾癌细胞的凋亡。

肝细胞癌组织中抑癌基因NPRL2的表达及其意义

肝细胞癌（HCC）为原发性肝癌，其发生、发展是由于环境、遗传和生活环境等因素通过不同的途径激活原癌基因、抑制抑癌基因导致细胞增殖和凋亡失调所致。NPRL2（nitrogen permease regulator-like2）是新发现的人抑癌基因，位于人基因组3p21．3区域。