重组Microdochium nivale还原糖氧化酶用于制备乳糖酸方法的研究

Microdochium nivale(M.nivale)还原糖氧化酶可以催化乳糖转化为乳糖酸,作者采用实验室保存的重组M.nivale还原糖氧化酶基因工程菌X33-p PICZαA-Mn CO,通过诱导在毕赤酵母中表达并制备了重组M.nivale还原糖氧化酶,通过单因素和正交实验考查了乳糖浓度,重组M.nivale还原糖氧化酶用量,反应温度,反应时间对乳糖酸转化率的影响。结果表明:重组M.nivale还原糖氧化酶催化乳糖制备乳糖酸的最适转化条件为:乳糖浓度5 mmol/L,酶的添加量为1.5 U/ml,反应温度为55℃,反应时间为48 h,最终反应乳糖酸的转化率接近100%。

用葡萄糖氧化酶法降低马铃薯颗粒全粉还原糖

观察了葡萄糖氧化酶 (GOD)对降低马铃薯颗粒全粉中葡萄糖及还原糖的作用。结果表明 ,当控制马铃薯颗粒全粉的水分在 5 0 %～ 60 % ,酸度为 3 5 ,温度为 3 9℃时 ,GOD的酶解降糖速度最快。在此条件下用GOD(5 0 0U/kg产品 )反应 1 80min ,可以使原料中的葡萄糖减少 80 %～ 90 % ,还原糖减低 3 0 %以上。

液体培养条件下绿色木霉Tr9701胞外酶及还原糖动态变化研究

为提高绿色木霉 Tr9701的发酵速率，实现其有效开发，对绿色木霉 Tr9701液体培养过程中不同胞外酶活性和还原糖含量的动态变化进行了研究。结果表明，在25℃、110 r／min 恒温振荡培养条件下，绿色木霉菌丝体生物量在第6～10天达到峰值；发酵液 pH 值在第6～10天发生转折逐渐上升，后基本保持平稳；胞外蛋白、胞外还原糖分别在第6，12天达到峰值，胞外愈创木酚氧化酶及多酚氧化酶活性以5～6 d 为一个周期呈现曲线式的增强；其胞外淀粉酶、胞外羧甲基纤维素酶等酶的活性在培养前期有明显升高，且其液体发酵产羧甲基纤维素酶活性明显高于淀粉酶和蔗糖转化酶。为实现绿色木霉 Tr9701规模发酵技术，应在其液体发酵过程中，依据菌丝体生物量、胞外酶和还原糖等动态变化确定其相应的发酵周期。

皱马鞍菌液体培养过程中胞外酶及还原糖的动态变化

对皱马鞍菌(Helvella crispa)液体培养过程中不同胞外酶活性和还原糖含量的动态变化进行了研 究。结果表明,在28 ℃、110 r,／min恒温振荡培养条件下,皱马鞍菌菌丝体生物量在第13天达峰值(9．40 g／L);发酵 液pH值逐渐上升,从第9天(8．24)后基本保持平稳;胞外蛋白含量于第6天达峰值(8．30 mg／mL);胞外还原糖 含量急剧上升,至第3天达峰值(20．43 mg／mL),之后迅速下降,到第8天降为1．38 mg／mL,此后一直维持在1 mg／mL水平。皱马鞍菌对碳水化合物的利用顺序为淀粉、纤维素、木质素。淀粉酶的活性高峰出现在第3天,并一 直保持在较高水平;CMC酶6 d后急剧分泌,第7天达峰值,之后又急速下降;愈创木酚氧化酶和多酚氧化酶活性 高峰出现最晚,均在第14天。酸性蔗糖转化酶活性在培养期间始终很低,而中性蔗糖转化酶活性呈阶梯上升趋势。

还原型谷胱甘肽对4种血糖检测方法结果的影响

血糖是临床上诊断和治疗糖代谢异常和糖尿病重要的监测指标之一，准确测定血糖水平对临床判断病情和治疗非常重要。目前检测血糖的方法有很多种，常见的有葡萄糖己糖激酶（HK）法、葡萄糖氧化酶（GOD）法、葡萄糖脱氢酶电极（GDH-NAD＋-PQ）法和葡萄糖氧化酶电极（GOD-electrode）法，以及微芯片电泳法［1］等，不同的检测方法各有优缺点［2］，灵敏度、稳定性和抗干扰能力也各不相同，一些因素可干扰血糖检测结果，这些因素包括血清标本、检测试剂、设备和一些药物使用等，所以研究血糖测定的干扰因素对于减少误诊率有重要意义［3］。

维生素C、还原型谷胱甘肽对三种葡萄糖测定方法干扰和探讨

目的探讨维生素C、还原型谷胱甘肽对葡萄糖氧化酶(GOD)法,己糖激酶(HK)法、酶电极法测定血糖的影响。方法用GOD法、HK法、酶电极法分别测定加入不同浓度的维生素C、还原型谷胱甘肽混和血清,对其结果进行分析比较。结果维生素C、谷胱甘肽对氧化酶法有显著的负干扰作用,测定值与干扰浓度成负相关关系,而己糖激酶法、酶电极法则能有效排除这些干扰,当血糖过低时,采用不同方法测定,可有效区分真性低血糖与假性低血糖。结论临床上,可通过己糖激酶法或者酶电极法加以判断患者是否有用大量类似维生素C和还原型谷胱甘肽类的具有还原性的药物,以排除干扰为临床提供准确血糖值数据。

小檗碱联合骨髓间充质干细胞对高糖损伤下血管内皮细胞能量代谢的影响

目的研究黄连的主要有效成分小檗碱联合骨髓间充质干细胞对于高糖作用下血管内皮细胞能量代谢的影响。方法 1 MTT法检测细胞增殖以及活性情况;2流式细胞术检测细胞周期;3彗尾法检测细胞DNA损伤情况;4HPLC测定细胞中ATP、ADP、AMP含量,能荷EC值;5 RTPCR法测定CCR、COX mRNA表达;6 Western blot法检测COX、CCR的蛋白表达。结果 1高糖干预损伤后的血管内皮细胞活性明显降低、增殖能力减弱,S+G_2期的细胞数量明显减少,出现一定程度的DNA损伤,而小檗碱、骨髓间充质干细胞及其联合使用均能不同程度提高细胞活性和增殖能力,增加S+G2期的细胞数量,促进DNA的修复(P<0.01),且小檗碱联合干细胞组的效应优于单用组;2血管内皮细胞经高糖干预损伤后ATP和ADP含量减低、AMP含量增多、EC值明显降低,小檗碱、骨髓间充质干细胞及其联合使用均能提高ATP和ADP含量(P<0.01);且小檗碱联合干细胞的效应优于单用组;3血管内皮细胞经高糖干预损伤后,COX、CCR mRNA和蛋白表达明显降低,经小檗碱、骨髓间充质干细胞及其联合使用干预后,CCR、COX mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01或P<0.05),且小檗碱联合干细胞的上调作用最为明显。结论小檗碱、骨髓间充质干细胞以及两者联合使用对于高糖损伤后血管内皮细胞能量代谢的改善具有促进作用,其机制可能是小檗碱、骨髓间充质干细胞可上调COX和CCR mRNA和蛋白的表达,从而介导葡萄糖类氧化物的水解,改善血液环境,增加血管内皮细胞的葡萄糖供应和摄取,从而改善高糖损伤后血管内皮细胞的能量代谢。

益脑康胶囊对脑缺血再灌注小鼠氧化应激损伤的作用研究

目的:基于过氧化损伤相关分子醛糖还原酶(aldose reductase,AR)及NADPH(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate)氧化酶(nadph oxidase,NOX)亚型,探讨益脑康胶囊对脑缺血再灌注模型小鼠的作用机制。方法:90只C57健康雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、益脑康高、中、低剂量组,采用线栓法制备短暂性大脑中动脉缺血再灌注模型,给药后观察记录各组小鼠神经功能缺损评分,氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法检测小鼠脑梗死体积,ELISA法检测缺血半暗带区过氧化产物活性氧(reactive oxygen species,ROS)、4-羟基壬烯醛(4-Hydroxynonenal,4-HNE)和8-羟基-2′-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine,8-OHDG)的含量,荧光定量PCR和Western Blot法检测缺血半暗带区AR、NOX1、NOX2、NOX4 mRNA和蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组的神经功能缺损评分、脑梗死体积明显增加(P<0.05,P<0.01),ROS、4-HNE、8-OHDG表达与AR、NOX1、NOX2、NOX4在mRNA和蛋白水平的表达均显著增加(P<0.01)。与模型组比较,益脑康中、高剂量组脑缺血再灌注损伤后神经功能缺损评分、脑梗死体积明显降低(P<0.05),ROS、4-HNE、8-OHDG的表达和AR、NOX1、NOX2、NOX4在mRNA和蛋白水平的表达均明显降低(P<0.01)。结论:益脑康胶囊通过减少AR及NOX1、NOX2、NOX4等过氧化损伤分子的表达,对脑缺血再灌注小鼠发挥神经保护作用。

不同钙浓度对两种岩溶植物幼苗生长及其酶活性的影响

该研究采用砂培法,以狗骨木(Swida wilsoniana)和南酸枣(Choerospondias axillaris)两种岩溶植物为研究对象,用不同钙离子(Ca^(2+))浓度(设为5、35、70、150、300 mmol·L^(-1)的5个水平)的营养液进行培养,研究其对两种植物的生长及酶活性的影响。结果表明:狗骨木和南酸枣的株高在5 mmol·L^(-1)时最大,之后随Ca^(2+)浓度上升呈下降趋势,南酸枣在300 mmol·L^(-1)时有所回升。两种植物的根、枝、叶生物量和总生物量随着Ca^(2+)浓度增加而减少。狗骨木叶、枝、根的生物量分配比率为根>枝>叶,南酸枣在35 mmol·L^(-1)时表现为根>枝>叶,其他在Ca^(2+)浓度下均为枝>根>叶,叶生物量分配少。狗骨木和南酸枣的丙二醛(MDA)含量在150 mmol·L^(-1)时最低,且狗骨木的低于南酸枣。钙胁迫下,与南酸枣相比,狗骨木维持较高的过氧化氢酶(CAT)活性和可溶性糖含量。两种植物在5和150 mmol·L^(-1)的Ca^(2+)浓度下各项指标处于较适水平,而在300 mmol·L^(-1)的高钙离子浓度下受到明显的胁迫,对比两种植物,狗骨木较南酸枣在高钙浓度下有更好的适应性。

视黄醇类X受体激动剂抑制高糖诱导内皮细胞氧化应激

背景还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶是在高糖环境下内皮细胞活性氧离子(ROS)产生的重要来源,视黄醇类X受体(RXR)能够抑制高糖诱导下内皮细胞ROS的生成,但对NADPH氧化酶的表达水平的影响尚不清楚。目的探讨高糖干预下血管内皮细胞NADPH氧化酶NOX4、gp91phox和p22phox亚基表达水平的变化及RXR激动剂的影响。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),以33mmol/L葡萄糖干预,模拟糖尿病患者体内环境,通过流式细胞学方法检测细胞内的ROS水平,采用干扰RNA(siRNA)技术检测NADPH氧化酶NOX4、gp91phox和p22phox亚基在高糖诱导下内皮细胞产生氧化应激反应中的作用,分别应用实时荧光定量PCR和免疫印迹杂交的方法检测NADPH氧化酶各亚基的表达水平。结果高糖处理后HUVECs内ROS的水平显著增加(6.58±0.24对2.47±0.12,P<0.05)。siRNA检测结果显示NOX4、gp91phox和p22phox亚基参与了高糖诱导下HUVECs内ROS的生成过程。高糖处理显著上调NADPH氧化酶NOX4、gp91phox和p22phox亚基的mRNA水平(NOX4:0.390±0.020比0.110±0.006,P<0.05;gp91phox:0.480±0.040比0.090±0.005,P<0.05;p22phox:0.025±0.002比0.005±0.001,P<0.05)和蛋白水平。RXR激动剂9-cis-RA和SR11237抑制高糖诱导下ROS生成,以及NADPH氧化酶NOX4、gp91phox和p22phox各亚基mRNA和蛋白水平的表达。结论RXR激动剂通过下调高糖诱导下内皮细胞NADPH氧化酶的表达,对抗高糖诱导内皮细胞产生的氧化应激反应。

马铃薯主粮化新品种营养品质分析与评价

为筛选适应马铃薯主粮化优质品种,以当地主栽品种新大坪、陇薯6号为对照,对10个引进品种的营养品质、矿物质含量、还原糖含量、多酚氧化酶活性等品质进行了综合分析。结果表明,青薯9号、冀张薯8号、陇薯10号等3个品种产量高,抗性强,营养品质好,矿物质含量丰富,还原糖含量低,多酚氧化酶活性低,是良好的马铃薯全粉加工原料,符合马铃薯主粮化品种要求,具有良好的主粮化开发前景,可在干旱半干旱地区大面积示范种植。

高糖与高尿酸通过醛糖还原酶通路协同作用加重内皮细胞损伤

目的寻找高血糖与高尿酸血症协同加重内皮细胞损伤的共同作用靶点和分子机制,为糖尿病合并高尿酸血症患者心血管疾病的保护提供干预靶点。方法用人脐静脉内皮细胞系(HUVEC-C)给予高糖(30 mmol/L,HG)、高尿酸(600μmol/L,UA)和高糖(HG)+高尿酸(UA)联合培养48 h。利用10μmol/L阿司他丁阻断醛糖还原酶(AR)的活性。实时定量PCR检测内皮型一氧化氮合成酶(e NOS)和AR mRNA的表达;Western blot检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)、NOX4、e NOS和AR蛋白的表达;共聚焦显微镜检测细胞内ROS的活性;一氧化氮(NO)试剂盒检测NO活性。结果与单独HG组和UA组相比,HG+UA共培养组明显降低e NOS mRNA水平和蛋白表达,减少NO产生,增加内皮细胞胞内ROS活性;HG+UA共培养明显上调AR mRNA水平和蛋白表达。应用AR抑制剂能够明显增加HG+UA组内皮细胞e NOS mRNA水平和蛋白表达,增加内皮细胞NO的分泌水平。AR抑制剂能够明显下调HG+UA组内皮细胞NOX4的蛋白表达,对NOX2无影响;降低细胞内ROS的含量。结论高血糖和高尿酸协同作用通过激活醛糖还原酶途径下调内皮细胞e NOS的表达,增加ROS活性,减少NO的产生,加重内皮细胞功能障碍;而抑制醛糖还原酶,能够通过抑制NOX4表达,阻断这种协同损伤作用。

我国马铃薯加工现状分析及对策建议(二)

四、我国马铃薯加工产业发展存在的问题1.缺乏满足加工的马铃薯专用型品种。马铃薯加工需要特定的加工品种,原料品种对产品的质量有直接影响。加工品种要求薯块大而均匀,芽眼浅,薯肉白,无空心,干物质含量高于19%,还原糖含量低于04%,龙葵素含量低,多酚氧化酶活性低,无明显病虫害及腐烂症状,机械损伤率低,耐贮藏。而我国多年的育种工作重产量轻品质,导致专用加工品种的缺乏,多数加工品种靠国外引进,造成大量的外汇损失。虽然＂九五＂以来我国开始明确了品质育种工作,但至今仍没有一个过硬的加工品种可与＂夏波蒂＂、＂布尔班克＂等国外老牌加工品种相抗衡。

国家1类糖尿病肾病新药WJ-39获批临床

2022年7月22日,沈阳药科大学王绍杰教授课题组与宁夏康亚药业股份有限公司联合研发的WJ-39获得国家1类化学新药临床研究批文(受理号:CXHL2200287,药物临床试验批准通知书编号:2022LP01129)。WJ-39是一种基于糖尿病并发症关键靶点醛糖还原酶结构设计的喹啉酮乙酸类化合物,主要用于糖尿病肾病的治疗,改善肾功能。作用机制研究表明,WJ-39能够激活Nrf2通路、增加内源性抗氧化酶产生,对DN大鼠肾脏氧化应激损伤具有显著的抑制作用。

国家1类糖尿病肾病新药WJ-39获批临床

2022年7月22日,沈阳药科大学王绍杰教授课题组与宁夏康亚药业股份有限公司联合研发的WJ-39获得国家1类化学新药临床研究批文(受理号:CXHL2200287,药物临床试验批准通知书编号:2022LP01129)。W J-39是一种基于糖尿病并发症关键靶点醛糖还原酶结构设计的喹啉酮乙酸类化合物,主要用于糖尿病肾病的治疗,改善肾功能。作用机制研究表明,WJ-39能够激活Nrf2通路、增加内源性抗氧化酶产生,对DN大鼠肾脏氧化应激损伤具有显著的抑制作用。

球型脂联素对高糖诱导胰岛β细胞株NIT-1活性氧簇产生的影响

β细胞功能障碍是2型糖尿病发病机制的一个重要环节；但长期高血糖如何损害β细胞功能的分子机制仍未完全清楚。研究表明氧化应激参与β细胞的“葡萄糖毒性”。球型脂联素（globular adiponectin，gad）与机体氧化应激水平有关，可能是通过还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸[NAD（P）H]氧化酶相关机制，而NAD（P）H氧化酶途径是B细胞中活性氧簇（ROS）产生增加的重要途径之一。本实验探讨gAd对高糖诱导胰岛β细胞株NIT-1ROS的产生是否有影响，及其可能的相关机制。

金线莲干预2型糖尿病的“关键成分-潜在靶标-核心通路”网络挖掘及实验验证

目的 运用网络药理学和动物实验相结合的方法,多维度挖掘金线莲Anoectochilus roxburghii治疗2型糖尿病的作用机制,为金线莲的开发利用提供依据。方法 通过文献检索建立金线莲化合物数据库,检索Swiss Target Prediction数据库和Similarity ensemble approach数据库获取金线莲化合物的作用靶标,检索Disgenet和GeneCards数据库获得2型糖尿病的相关靶标。利用软件Venny 2.1筛选出金线莲与2型糖尿病的共有靶标。运用String数据库构建共有靶标的蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,通过NetworkAnalyzer工具和MCODE插件进行拓扑分析、基因簇分析及核心靶标的筛选。通过基因注释工具DAVID对核心靶标进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析。采用高糖、高脂饲料诱导结合小剂量链脲佐菌素(40 mg/kg)一次性ip构建2型糖尿病大鼠模型,将造模成功大鼠分为对照组、模型组、二甲双胍组和金线莲高、中、低剂量组,持续给药3周,采用酶联免疫法检测大鼠给药后血清中相应预测的8种靶标的水平。结果 从数据库中获得80个金线莲化学成分,金线莲成分作用靶标与2型糖尿病的共有靶标有249个。金线莲治疗2型糖尿病的关键活性成分为槲皮素、异鼠李素、金线莲苷、齐墩果酸和熊果酸,主要调控靶标包括白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(protein tyrosine phosphatase-1B,PTP-1B)、花生四烯酸-5-脂加氧酶(arachidonic acid-5-lipoxygenase,ALOX-5)、环氧化酶-2(cyclooxygenenase-2,COX-2)、醛糖还原酶(aldose reductase,AR)、细胞色素P4501B1(cytochrome P4501B1,CYP1B1)、细胞色素P45019A1(cytochrome P45019A1,CYP19A1)及乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)。动物实验结果显示,与模型组相比,金线莲各剂量组大鼠血清IL-2、ALOX5、CYP1B1和CYP19A1水平不同程度升高,COX-2、AR、PTP1B和AChE水平不同程度降低。结论 金线莲可以通过减少炎症信号通路关键酶的表达,改善胰岛素抵抗从而发挥降血糖的作用,具有多成分、多靶标及多通路的治疗特点,值得临床推广运用。

国家1类糖尿病肾病新药WJ-39获批临床

2022年7月22日,沈阳药科大学王绍杰教授课题组与宁夏康亚药业股份有限公司联合研发的WJ-39获得国家1类化学新药临床研究批文(受理号:CXHL2200287,药物临床试验批准通知书编号:2022LP01129)。WJ-39是一种基于糖尿病并发症关键靶点醛糖还原酶结构设计的喹啉酮乙酸类化合物,主要用于糖尿病肾病的治疗,改善肾功能。作用机制研究表明,WJ-39能够激活Nrf2通路、增加内源性抗氧化酶产生。

国家1类糖尿病肾病新药WJ-39获批临床

2022年7月22日,沈阳药科大学王绍杰教授课题组与宁夏康亚药业股份有限公司联合研发的WJ-39获得国家1类化学新药临床研究批文(受理号:CXHL2200287,药物临床试验批准通知书编号:2022LP01129)。W J-39是一种基于糖尿病并发症关键靶点醛糖还原酶结构设计的喹啉酮乙酸类化合物,主要用于糖尿病肾病的治疗,改善肾功能。作用机制研究表明,WJ-39能够激活Nrf2通路、增加内源性抗氧化酶产生。

国家1类糖尿病肾病新药WJ-39获批临床

2022年7月22日,沈阳药科大学王绍杰教授课题组与宁夏康亚药业股份有限公司联合研发的WJ-39获得国家1类化学新药临床研究批文(受理号:CXHL2200287,药物临床试验批准通知书编号:2022LP01129)。WJ-39是一种基于糖尿病并发症关键靶点醛糖还原酶结构设计的喹啉酮乙酸类化合物,主要用于糖尿病肾病的治疗,改善肾功能。作用机制研究表明,WJ-39能够激活Nrf2通路、增加内源性抗氧化酶产生,对DN大鼠肾脏氧化应激损伤具有显著的抑制作用。