基于NK相关基因的急性髓细胞白血病预后风险评估模型的建立

目的:通过分析NK细胞相关基因(NRGs)在急性髓细胞白血病(AML)中的表达模式及其与预后的关系,构建新型风险评分模型以评估AML患者的预后。方法:基于生物信息学的方法下载TCGA数据库中AML转录组数据。根据NRGs的表达不同,通过无监督聚类将AML患者分组,并分别分析不同亚组AML患者的生存差异、基因功能富集情况和免疫相关分析。根据亚组的差异表达基因,通过Cox生存分析以及LASSO回归分析构建基于NRGs的预后评估模型。最后收集AML患者的骨髓样本进行转录组测序,进一步验证预后评估模型中各基因与AML的相关性。结果:单因素Cox筛选与预后相关的NRGs,并根据其表达情况将AML患者分成3个亚组。生存分析以及富集分析、免疫浸润分析、免疫检查点分析均发现亚组2具有更好的临床预后,并且免疫微环境明显重塑。进一步根据三个亚组的差异表达基因,通过Cox联合LASSO回归分析构建风险评分模型,此风险评分模型与AML的临床预后显著相关。临床病例的转录组测序结果表明,风险模型的6个AML危险基因中,ADGRG1、LSP1、PDE7B在复发患者中的表达量较缓解患者上调,保护基因TBX1的表达量则下调。结论:本研究构建的AML患者风险评分模型可作为一种新的预后评估手段,具有较好的预测价值。

NK2同源盒1基因新发变异所致脑-肺-甲状腺综合征1例并文献复习

脑-肺-甲状腺综合征(BLTS)是一种全球罕见的涉及多器官且具有明显异质性的疾病。本文总结1例NK2同源盒1(NKX2-1)基因新发变异所致BLTS临床特征及诊疗经过,并复习相关文献,以提高临床医师对该病的认识。患儿男,3岁,出生时有急性呼吸窘迫综合征病史,后出现运动及言语发育落后、反复肺部感染、代偿性甲状腺功能减退,全外显子基因检测显示NKX2-1基因外显子1~2杂合缺失。因此,对于有急性呼吸窘迫综合征病史患儿表现出神经系统异常、反复呼吸道感染或甲状腺功能减退时,应及时进行基因检测以助于早期诊断。

NK4基因转染对裸鼠胰腺癌移植瘤生长的影响

背景与目的:NK4不仅是肝细胞生长因子的拮抗剂,而且是血管形成的抑制剂。研究已经证实NK4可以抑制肿瘤的生长和转移,但有关其在胰腺癌中的作用,目前少见文献报道。为此,本研究旨在探讨NK4基因在裸鼠体内的抗胰腺癌作用及其可能的机制。方法:建立裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,构建NK4基因真核细胞表达载体并转染入瘤体内,转染前后称其体重、瘤重和测肿瘤体积,采用免疫组织化学和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术对裸鼠胰腺癌组织中的凋亡细胞、增殖抗原和微血管密度进行观察和比较。结果:4周后,NK4转染组裸鼠移植瘤体积为(1.39±0.33)cm3,明显小于对照组和空载体组[(2.06±0.55)cm3和(1.90±0.36)cm3,P<0.01];其瘤重为(1.30±0.81)g,也显著低于对照组和空载体组[(3.45±1.88)g和(3.14±1.51)g,P<0.01],抑瘤率为62.29%。NK4转染组肿瘤细胞的凋亡指数为9.34±0.91,显著高于对照组和空载体组(4.13±0.79和3.94±1.03,P<0.001);而NK4转染组肿瘤细胞的增殖指数为53.88±4.30,与对照组间和空载体组比较无显著性差异(56.24±4.03和54.33±5.41,P>0.05);NK4转染组肿瘤组织的微血管密度为(12.24±4.63),明显低于对照组和空载体组(20.13±7.00和19.70±6.15,P<0.05)。结论:转染NK4基因可显著抑制裸鼠胰腺癌移植瘤的生长,其作用机制可能是通过抑制肿瘤新生血管的形成,促进肿瘤细胞凋亡。

实时荧光定量PCR检测转基因玉米NK603品系特异片段的测量不确定度

应用转基因玉米NK603品系特异实时定量PCR方法,测定含量为2%的转基因玉米NK603样品中旁侧片段(品系特异片段)的含量,并从扩增反应、数据处理以及微量移液器等不确定度来源,评定了测量的不确定度。结果表明,u A=0.0008,u B=0.001,u C=0.001,U=0.002,测量结果为1.9%±0.002。NK603品系特异实时定量PCR方法检测结果的主要不确定度来自检验过程中的随机效应。

NK4基因在重组腺病毒中的表达与初步鉴定

目的 构建含有肝细胞生长因子 (HGF)NK4基因的重组腺病毒载体 ,为应用HGF/NK4进行肿瘤基因治疗奠定实验基础。方法 应用AdEasy腺病毒载体系统 ,将PCR扩增所得的NK4基因片段与穿梭质粒pShuttle CMV进行连接 ,获得重组质粒pShuttle CMV NK4 ,将该质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy 1共转化大肠杆菌BJ5 183获得重组腺病毒质粒pAdCMV NK4 ,用该质粒转染 2 93细胞包装产生出重组腺病毒rvAdCMV NK4。重组腺病毒分别经电子显微镜技术及RT PCR、WesternBlot等方法进行鉴定。结果 得到含有NK4基因的重组腺病毒rvAdCMV NK4 ,电子显微镜下可见典型腺病毒颗粒形态 ,RT PCR及WesternBlot分析显示rvAdCMV NK4感染 2 93细胞后NK4基因可有效转录并表达。结论 成功构建出含有NK4基因的重组腺病毒rvAdCMV NK4 ,为下一步开展关于NK4基因的肿瘤治疗提供了基础。

实时荧光定量PCR检测转基因玉米NK603结构特异基因的测量不确定度研究

应用四川省农业科学院分析测试中心实验室建立的转基因玉米NK603结构特异实时定量PCR方法测定含量为2%的转基因玉米NK603样品中结构特异片段的含量,并从扩增反应、数据处理以及微量移液器等不确定度来源,评定了测量的不确定度。结果表明,uA=0.0003,uB=0.001,uC=0.001,U95=0.002,测量结果为1.6%±0.002%。NK603结构特异实时定量PCR方法检测结果的主要不确定度来自检验过程中的随机效应。

转染NK4基因对人胰腺癌SW1990细胞生物学特性的影响

背景与目的:肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)通过其受体c-Met的激活,在调节肿瘤侵袭和转移和血管形成中具有重要作用。NK4不仅是HGF的拮抗剂,也是血管形成的抑制剂,阻断HGF/c-Met途径和肿瘤血管的形成可成为抗肿瘤治疗的策略之一。为此,我们构建NK4基因真核细胞表达载体并进行转染研究,探讨NK4基因在胰腺癌细胞中的表达及其对胰腺癌细胞生物学特性的影响。方法:对重组pcDNA3/hNK4质粒进行酶切,将NK4基因克隆到真核表达载体pRC/CMV2,应用脂质体将重组pRC/CMV2-hNK4质粒转入胰腺癌SW1990细胞中,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹(Westernblot)分别检测转染的肿瘤细胞中NK4mRNA和蛋白的表达并筛选出高表达的细胞克隆。采用Transwall小室和Matrigel侵袭小室测定转染NK4基因对胰腺癌细胞运动和侵袭的影响。结果:转导NK4基因的SW1990细胞可表达并分泌NK4,RT-PCR扩增出预期的453bp片段,Westernblot显示有50000的NK4蛋白,转染NK4基因对胰腺癌细胞SW1990的生长无抑制作用(P>0.05),但可显著抑制HGF或成纤维细胞所诱导胰腺癌细胞的运动和侵袭(P<0.01),而转染空载体则无此作用(P>0.05)。结论:转染NK4基因可抑制胰腺癌细胞的运动和侵袭,在胰腺癌抗转移治疗中可能具有重要作用。

NK4基因在人胰腺癌细胞中的表达及其对血管内皮生长的影响

目的 :构建NK4基因真核表达载体并进行转染研究。方法 :对重组质粒pcDNA3/hNK4进行酶切 ,将目的基因NK4克隆到较强的真核表达载体pRC/CMV2中 ,应用脂质体将NK4基因转染到胰腺癌细胞株SW1990中 ,G4 18筛选获得稳定表达克隆 ,采用RT -PCR及Westernblot鉴定及筛选出高转录和高表达的细胞克隆。以MTT法检测转染重组质粒pRC/CMV2 -hNK4的细胞克隆表达产物对血管内皮细胞生长的影响。结果 :在转染NK4基因的SW1990细胞克隆中 ,RT -PCR能扩增出NK4mRNA预期的 4 5 3bp片段 ,但强弱不同 ,Westernblot显示均有约 5 0kD的NK4蛋白的表达。其上清可显著抑制血管内皮细胞的生长。结论 :重组质粒pRC/CMV2 -hNK4是一种高效真核表达载体 ,并且能够在SW1990细胞中高表达 ;NK4能够抑制血管内皮细胞的生长 ,提示其在肿瘤基因治疗中可能具有重要意义。

共表达人B7—1和HGF／NK4基因的重组腺病毒的制备及初步鉴定

目的构建能同时表达B7—1和HGF／NK4基因的重组腺病毒载体，同时制备相应的复制缺陷型重组腺病毒，检测其在喉癌细胞中的表达。方法构建以串联方式携带人B7-1和HGF／NK4基因的重组穿梭载体pAdtrack-NK4-B7-1。Pme I线性化后与腺病毒载体pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183，通过同源重组得到重组腺病毒载体pAd—NK4-B7—1。将重组腺病毒载体转染HEK293包装细胞制备重组腺病毒，应用病毒悬液感染人喉癌细胞株。用RT-PCR检测感染细胞中B7-1和NK4基因mRNA表达。结果酶切鉴定证实阳性pAdTrack—NK4-B7—1重组穿梭载体含有目的基因B7-1和HGF／NK4，同源重组后制备的病毒载体DNA经酶切鉴定获得了阳性重组腺病毒载体，该载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装，转染3d后可以观察到绿色荧光蛋白（GFP）表达并逐渐增多、增强。制备的Ad—NK4-B7在体外能有效感染Hep-2细胞，感染后可维持6d高水平的B7—1和NK4基因的表达，整体表达可持续2周。结论成功构建了同时表达B7．1和NK4基因的重组腺病毒载体并制备出重组腺病毒颗粒，该病毒能有效地感染喉癌细胞并表达高水平的NK4和B7-1基因，为进一步研究B7—1和NK4基因的功能及应用B7—1和NK4进行喉癌的联合基因治疗提供了依据和素材。

携带白细胞介素2和NK4双基因真核共表达质粒的构建及活性观察

目的 构建同时携带白细胞介素2（IL-2）和NK4基因的真核表达载体（pIRES-IL-2-IRES-NK4）,观察其在防治肿瘤中的潜在应用前景.方法 根据Pubmed上公布的IL-2及NK4 mRNA序列,设计扩增IL-2及NK4 cDNA的特异性引物,以PBV220-IL-2质粒和PCAGGS/hNK4质粒为模板,分别扩增IL-2及NK4基因,并将IL-2及NK4基因分别克隆在真核表达载体pIRES-SEQ的XhoI、MLuI位点和SalI、NotⅠ位点.获得同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4.该重组质粒转染肝癌细胞HepG2后,检测目的基因的转染表达及表达产物对HepG2细胞增殖的影响.结果 通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实携带IL-2和NK4双基因的真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4构建成功.用pIRES-IL-2-IRES-NK4转染HepG2细胞后24 h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表达,48 h时荧光更强;逆转录聚合酶链反应结果表明转染pIRES-IL-2-IRES-NK4质粒细胞的IL-2及NK4基因表达明显增强.酶联免疫吸附测定检测结果表明,转染组细胞较对照组细胞培养上清中IL-2及NK4蛋白表达水平明显增强.转染组48 h后的IL-2、NK4蛋白表达水平为2.139、1.956 mg/L,明显高于未转染组的0.492、0.620 mg/L.四甲基偶氮唑盐法结果表明转染真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4的细胞表达上清,有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,且有剂量效应关系.结论 本研究成功构建了同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4,该质粒可有效转染肝癌细胞,且转染细胞表达上清有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,提示该重组质粒有潜在防治肿瘤的应用前景.

5-脱氧氮杂胞苷上调肺癌细胞p16_(INK4A)基因表达的作用观察

肺癌细胞 SPC- A1经 5 -脱氧氮杂胞苷 (5 - Aza- cd R)处理后 ,应用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)及免疫细胞化学检测其在 m RNA和蛋白质水平的变化 ,同时 MTT法观察肺癌细胞 SPC- A1增殖能力的改变。结果表明经 5 -Aza- cd R处理后 ,肺癌细胞 SPC- A1中 p16 INK4A基因的 m RNA及蛋白质表达都有所上调 ,MTT法亦显示处理后的 SPC-A1细胞增殖速率减缓。说明 5 - Aza- cd R通过对 p16 INK4A基因 5 ` CPG岛的去甲基化作用 ,上调 p16 INK4A基因的 m RNA转录及蛋白表达 。

携带NK4与IL-2基因的重组减毒沙门氏菌对小鼠肿瘤的防治作用

目的：本研究是在前期细胞水平实验的基础上将携带NK4基因或IL-2基因真核表达载体的减毒沙门氏菌（Ty21a-PcDNA4-NK4及Ty21a-PcDNA4-IL2）通过口服方式给药，观察外源基因在小鼠体内分布、产生的免疫效应及抗肿瘤的作用，探讨减毒沙门氏菌作为口服基因治疗载体的可行性及NK4基因、IL-2基因在体内的抗肿瘤作用。

HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒表达系统的构建与鉴定

目的：构建靶向结肠癌细胞的人端粒酶逆转录酶HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒并对该表达体系进行鉴定。方法：根据GenBank中的HTERT启动子（HTERTp）序列设计引物，以人胚肾293细胞提取基因组DNA为模板，PCR扩增HTERTp，并将HTERTp序列克隆入pDC312质粒中，构建成HTERTp调控的腺病毒质粒pSG—HTERTp；NK4 cDNA酶切并回收克隆至pSG—HTERTp载体中，构建成pSG—HTERTp／pA—NK4穿梭质粒，脂质体法在293细胞中包装重组腺病毒；噬斑分析法筛选单克隆重组腺病毒；RT-PCR检测NK4基因的转录；Western Blot检测NK4蛋白的表达。结果：成功构建出成功构建出HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒，滴度为4．5×10^9空斑形成单位（pfu）／mL，且PCR扩增及western bolt电泳均呈阳性表达。结论：成功构建出HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒，为进一步研究NK4基因的作用机制打下实验基础。

异基因反应性NK细胞在供者淋巴细胞输注治疗单倍体相合造血干细胞移植后肺癌复发中的作用研究

本研究旨在探讨预处理中异基因反应性NK细胞(allo-reactive NK cells,Allo-NK)在供者淋巴细胞输注(DLI)治疗单倍体相合造血干细胞移植后肺癌复发中的作用。采用免疫磁珠富集F1供鼠(H-2d/b)脾脏allo-NK,流式细胞术和LDH法检测其异体反应性。建立小鼠单倍体相合造血干细胞移植后肺癌复发模型,采用放射性核素标记法追踪DLI的体内分布。比较不同处理组小鼠的肿瘤大小、淋巴细胞浸润程度,采用RayBio(小鼠细胞因子抗体芯片检测血清中22种细胞因子的变化。结果表明:在移植后24-48小时,allo-NK组的回输供者淋巴细胞在受者肺脏、脾脏、肾脏中明显蓄积,浓度最高,时间最长。化疗+DLI组与化疗+PBS组的肿瘤体积相比无明显区别,但allo-NK+DLI组的肿瘤体积显著小于化疗+DLI组(p<0.05)和allo-NK+PBS组(p<0.01)组,且镜下可观察到肿瘤局部较多的淋巴细胞浸润。allo-NK+DLI组中MCP-1、IL-17、IL-12和MCP-5较对照组分别升高1.56、1.36、1.20、1.17倍;而IL-10降低42.8%。结论:allo-NK可以延长DLI在宿主体内停留时间,促进炎性因子和Th1类细胞因子分泌,抑制肿瘤生长,提高DLI治疗移植后肺癌复发的疗效。

转基因玉米NK603基体标准物质研制

转基因安全管理和标识制度的实施需要标准化的检测方法和转基因检测标准物质,转基因标准物质是获得准确、可靠、可比检测结果的保证。目前,转基因玉米NK603已在我国批准进口用作加工原料,其安全监管亟须制备标准物质。本研究将筛选后的转基因玉米NK603杂合种子和对应的非转基因受体种子,按转基因质量分数为60.0 mg g^(–1)、100.0 mg g^(–1)、1000 mg g^(–1)(理论值)的比例配置了3个梯度浓度水平的转基因基体标准物质。利用二重微滴数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)对研制的标准物质进行均匀性与稳定性检测。结果表明:研制的标准物质均匀性良好,可在60℃下运输14 d,稳定性不低于6个月。同时,由8家实验室采用二重ddPCR方法联合测定标准物质NK603转化体与内标基因的拷贝数比值,其标准值及不确定度为:(2.75±0.26)%、(4.68±0.39)%、(51.8±3.7)%。本批标物使用时最小取样量100 mg。可用于转基因食品和饲料中转基因成分NK603的定性和定量检测以及转基因玉米特异性检测方法的评价和实验室质量控制等领域。

奥沙利铂联合NK4基因对大肠癌HCT116细胞凋亡的影响

目的观察奥沙利铂联合NK4基因对HCT116细胞增殖、凋亡的影响。方法使用Effectene转染试剂,将pcDNA3.1-NK4质粒转染至大肠癌HCT116细胞中,常规条件下培养24h。不同奥沙利铂药物浓度处理HCT116细胞,CCK-8法测定细胞的OD值,分析在不同奥沙利铂药物浓度下对HCT116细胞毒性的影响;检测奥沙利铂最低药物浓度联合NK4基因对HCT116细胞凋亡的影响。结果当奥沙利铂药物浓度为12.5μg/mL时,显著抑制细胞的增殖;奥沙利铂(12.5μg/mL)联合NK4基因处理组与奥沙利铂处理组比较,显著诱导HCT116细胞的凋亡,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论与奥沙利铂组相比,奥沙利铂联合NK4基因后HCT116细胞的凋亡率显著升高。

转基因玉米NK603转化体/zSSIIb内标基因二重微滴数字PCR方法的建立及应用

【目的】批准进口的转基因玉米NK603是中国转基因生物安全监管的主要对象。转基因安全监管需要标准物质和标准检测方法,建立转基因玉米NK603的数字PCR(dPCR)方法将为转基因玉米NK603的定量检测和标准物质研制提供精准测量技术。【方法】采用人工合成技术构建标准质粒分子pUC57-NK603;将NK603转化体与不同的玉米内标基因引物/探针一一组合,遴选与NK603转化体特异性PCR具有相同扩增能力的玉米内标基因PCR方法;设置二重微滴数字PCR(ddPCR)的退火温度梯度和引物/探针浓度梯度,优化二重ddPCR的反应体系和反应条件;用梯度稀释的标准质粒溶液作模板,考察二重ddPCR的检测极限、定量极限和动力学范围;将转基因玉米NK603种子粉末和非转基因玉米种子粉末混合,配制质量分数分别为100%、10%和6%的盲样,考察二重ddPCR的定量准确性。【结果】用标准质粒分子pUC57-NK603作为二重ddPCR的质控对照,通过考察二重ddPCR反应热图的微滴信号强度、阳性微滴与阴性微滴分辨率、雨滴数量、NK603转化体与内标基因拷贝数比值测量值与预期值的一致性,确定将NK603转化体特异性PCR方法与内标基因zSSIIb PCR方法组合,建立NK603/zSSIIb二重ddPCR方法。二重ddPCR反应体系中NK603转化体和zSSIIb内标基因的引物/探针浓度相同,均为400 nmol·L^(-1)/200 nmol·L^(-1),在60℃退火延伸。NK603/zSSIIb二重ddPCR的检测极限是2 copies DNA模板,定量极限是48 copies DNA模板,动力学范围是10—60000 copies DNA。应用NK603/zSSIIb二重ddPCR方法可准确定量玉米盲样中的NK603转化体含量,定值结果变异系数小于25%;dPCR定量结果与荧光定量PCR(qPCR)定量结果无显著差异,且具有更高的精确性。【结论】内标基因的选择会影响dPCR定量结果的准确性,在建立dPCR方法的过程中,要用具有准确量值的样品作为质控对照,评估内标准基因的适用性。以人工合成的标准质粒分子pUC57-NK603为质控对照,建立了NK603/zSSIIb二重ddPCR方法。应用建立的二重ddPCR定值方法进行标准物质的研制和定值,已成功研制出转基因玉米NK603有证标准物质。

MUC1嵌合抗原受体-基因工程NK细胞治疗难治/复发恶性实体肿瘤患者的护理

总结了MUC1 CAR-NK细胞治疗难治/复发恶性实体肿瘤患者临床效果与整体护理措施。12例难治/复发恶性实体肿瘤患者接受MUC1 CAR-NK细胞治疗,制定并实施相应的整套护理流程,着重加强对患者预处理的护理,细胞回输的护理,肿瘤溶解综合征(TLS)的观察与护理,同时采取心理护理等措施。12例难治/复发恶性实体肿瘤患者中,6例发热,其中短暂发热1例,发热伴畏寒寒颤5例;另外6例患者无明显症状,无严重不良反应。11例患者顺利出院,1例患者因疾病原因消化道大出血抢救无效死亡。通过对接受MUC1 CAR-NK细胞治疗的12例难治/复发恶性实体肿瘤患者的精心医治及整体护理,避免了TLS的发生,帮助患者克服了恐惧心理,特别是对其可能产生的各种并发症的系统护理,使MUC1 CAR-NK细胞治疗的风险降低到最小化,值得临床推广应用。

携带IL-2/NK4双基因减毒沙门氏菌TPIN的遗传稳定性研究

对携带IL-2/NK4双基因减毒沙门氏菌TPIN的遗传稳定性进行研究。将TPIN连续传40代,取10代、20代、30代、40代菌落进行鉴定,包括菌落和菌体的形态、质粒的纯度和浓度、目的基因片段、双酶切结果及转染人肝癌细胞(HepG2)后目的基因体外表达活性。结果表明,每10代的菌落和菌体形态一致,其所含质粒的纯度和浓度在传代过程中无明显变化,PCR扩增的目的基因条带大小一致,双酶切鉴定结果正确,转染HepG2细胞后,每代间所表达目的蛋白浓度无明显差异。TPIN作为消化道肿瘤的生物治疗药物,在遗传方面有较好的稳定性,可进一步进行大量生产。

NKX2-5基因63A>G突变对先天性心脏病相关基因表达的影响

目的探讨NK2同源异型框5(NKX2-5)基因63A>G突变对先天性心脏病相关基因表达的影响。方法构建绿色荧光蛋白(GFP)空载质粒、NKX2-5质粒和NKX2-563A>G质粒,将其分别转染至P19细胞,并分别设为GFP组、NKX2-5组和NKX2-563A>G组。通过荧光镜观察和检测GFP蛋白表达情况以评价转染效果。检测3组P19细胞转染后的细胞周期、细胞增殖情况,NKX2-5、GATA结合蛋白4(GATA4)、T盒转录因子5(TBX5)以及三者下游信号通路基因的mRNA表达水平。结果成功构建稳定转染细胞株。转染后,NKX2-5组的细胞增殖能力和S期细胞比例低于GFP组,而G_(1)期细胞比例高于GFP组;NKX2-563A>G组的细胞增殖能力和S期细胞比例高于NKX2-5组,而G 1期细胞比例低于NKX2-5组(均P<0.05)。3组P19细胞中NKX2-5、GATA4、TBX5的mRNA表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05);但NKX2-5组骨形成发生蛋白4(BMP4)和心肌细胞增强因子2C(MEF2C)的mRNA表达水平高于GFP组,而NKX2-563A>G组BMP4和MEF2C的mRNA表达水平低于NKX2-5组(均P<0.05)。结论NKX2-5基因可抑制心肌细胞的增殖,而NKX2-5基因63A>G突变或可通过影响BMP4和MEF2C等基因的表达从而调控心肌细胞的细胞周期及增殖。