IDENTIFICATION OF A NEW HUMAN nm23 GENE,nm23-H3b

Nm23 is a kind of effective tumor metastasis suppressor genes which included two types in human:nm23-H1 and nm23-H2. Amino acid identity between nm23-H1 and nm23-H2 was 88%.In this study,using a pair of primers to flank the part of coding sequence of nm 23,the 5'-translated sequence was amplified by polymerase chain reaction (PCR) from human normal liver genomic DNA.A 375-base pairs clone was charactertzed,which designated pnm23-H3b.The nm23-H3b nucleotide sequence between 40 bp and 70 bp is different from nm23-H1 and nm23-H2,and other sequences have 86%and 90%identical to nm23-H1 and nm23-H2,respectively.Southern blot containing BglⅡ-digested human liver genomic DNA hybridized to the entire nm23-H3b DNA and showed three bands at 10.5,7.9 and 4.0 Kb.These data demonstrate that the third human nm23 exists possibly.Therefore,nm23 may be considered a family of closely related genes.

Expression of the novel gene NM23-H1B in ovarian cancer

Objective:To study the expression of the human novel gene NM23-H1B in ovarian cancer. Methods: Totally 24 samples from patients with epithelial ovarian tumor at different clinical stages and 4 from normal ovaries were examined for NM23-H1B mRNA expression by RT-PCR and Northern blot. Results: All samples expressed NM23-H1B mRNA through RT-PCR, while the level of expression in ovarian tumor was higher than that of normal ovary. The results of Northern blot showed that NM23-H1B was overexpressed in ovarian cancer while lowexpressed in normal ovary or low malignant potential (LMP). The level of expression at early stage cancer(stageⅠand Ⅱ) was higher than those in advanced cancer(stage Ⅲ and Ⅳ). In early stage carcinoma, the expression level was involved in the differentiation of tumor cell, and well-differentiated cancer expressed NM23-H1B mRNA in comparatively higher level. Conclusion: The novel gene NM23-N1B is closely correlated with the ovarian cancer.

NM23基因与肿瘤相关性的研究进展

NM23基因在1988年被发现具有肿瘤转移抑制功能,该基因对肿瘤的侵袭、增殖及转移有一定的调节作用,抑制多种肿瘤细胞的转移,对肿瘤的发生发展、病理分期及其预后发挥着极其重要的作用。本文检索了国内外最新的NM23基因与肿瘤相关性研究报道,结果显示NM23基因在骨肉瘤、胃癌、膀胱癌等多种恶性肿瘤细胞中表达降低。此研究结果可以进一步了解NM23基因在相关肿瘤的发生、发展中的分子作用机制。

Alteration in Gene Expression Prof ile and Biological Behavior in Human Lung Cancer Cell Line NL9980 by Nm23-H1 Gene Silencing

Background and Objective Lung cancer is the leading cause of cancer death in both men and women. Tumor metastasis is an essential aspect of lung cancer progression. Nm23-H1 is

颊癌中肿瘤转移抑制基因nm23mRNA的表达 Ⅰ.Northern斑点杂交研究

通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交技术研究５２例颊癌及相关组织中肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１和ｎｍ２３－Ｈ２ｍＲＮＡ的表达。结果发现：颊癌组织中ｎｍ２３－Ｈ１和ｎｍ２３－Ｈ２ｍＲＮＡ表达比正常颊粘膜、白斑、癌旁粘膜均有不同程度增高。颊癌有转移组中ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ表达比无转移组明显降低，转移灶中ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ的表达更低（Ｐ＜０．０５）。１１例有转移颊癌患者中有９例（８１．８％）为ｎｍ２３－Ｈ１低表达；而１９例无转移颊癌，有１５例（７８．９％）为高表达（Ｐ＜０．０５）。ｎｍ２３－Ｈ２ｍＲＮＡ表达在有无转移组患者中无明显差异（Ｐ＞０．０５）。结果提示，在颊癌的转移过程中，ｎｍ２３－Ｈ１比ｎｍ２３－Ｈ２起着更重要的作用。ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ表达可作为预测有无颊癌淋巴结转移的一个有价值的指标。

nm23-H_1肿瘤转移抑制基因在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的：研究ｎｍ２３－Ｈ１基因在肝癌中的表达。方法：应用免疫组化方法对１０４例肝细胞癌组织进行了ｎｍ２３－Ｈ１基因蛋白产物的检测，并结合术后随访资料分析了ｎｍ２３－Ｈ１的表达与患者预后的关系。结果：肝癌组织中ｎｍ２３－Ｈ１阳性产物主要表达在细胞浆内，阳性表达率为５１．９２％（５４／１０４）。ｎｍ２３－Ｈ１蛋白的表达与癌旁伴肝硬化病变以及肝细胞癌的侵袭生长和门静脉癌栓转移呈负相关。值得注意的是，ｎｍ２３－Ｈ１基因在肝癌切除术后无瘤生存期大于５～１０年以上病例中的阳性表达率高达８０％（２４／３０），而在术后１２～３２个月复发病例中的阳性表达率仅占２６．０９％（１２／４６）。结论：ｎｍ２３－Ｈ１低表达与癌肿复发密切相关，高表达是患者术后长期生存的一个重要因素。临床开展ｎｍ２３－Ｈ１基因的检测，对癌肿转移的早期诊断、确定合理治疗方案、提高治疗效果具有重要意义。

Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响

目的 :研究ras癌基因和nm2 3抑癌基因的高表达对细胞膜磷脂酶D(PLD)活性的影响。方法 :用ras癌基因和nm2 3抑癌基因构建的重组质粒 ,分别转染人肝癌细胞株 772 1,建立了高表达ras癌基因和nm2 3抑癌基因的H ras 772 1和nm2 3 H 772 1细胞株 ,测定 772 1、mock细胞 (空载体转染的 772 1细胞 )、H ras 772 1和nm2 3 H 772 14种细胞中 ,细胞膜PLD酶活性和PLD酶蛋白表达量。结果 :在H ras 772 1细胞中 ,PLD酶活性比 772 1、mock细胞中PLD酶活性显著升高。nm2 3 H 772 1细胞中 ,酶活性却显著降低。但在二种细胞中 ,PLD酶蛋白的量未见显著变化。结论 :ras癌基因和nm2 3抑癌基因的高表达对PLD酶活性的影响 ,可能主要是通过影响PLD酶活性的调节因素来实现的。

转移抑制基因nm23在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的:探讨转移抑制基因nm23与膀胱移行细胞癌转移之间的关系。方法：应用Northernblot技术分析12例膀胱移行细胞癌和6例肉眼未见异常的癌旁膀胱粘膜nm23-H1和nm23-H2基因的表达。结果：膀胱移行细胞癌组nm23-H1mRNA表达水平较癌旁膀胱粘膜组显著升高，有盆腔淋巴结转移的膀胱程行细胞癌组的nm23-H1mRNA表达显著高于无盆腔淋巴结转移组（P＜0．05），而nm23-H2mRNA在各组间的表达无显著性差异。结论：nm23基因在膀胱移行细胞癌的转移调节中起重要作用。

抑癌基因p53、nm23、p16在儿童胚芽细胞肿瘤中的表达及意义

目的 初步探讨抑癌基因 p5 3、nm2 3、p1 6在儿童胚芽细胞肿瘤中的表达及意义。 方法 对 30例儿童胚芽细胞肿瘤石蜡标本进行免疫组织化学染色 ,观察肿瘤组织中抑癌基因 p5 3、nm2 3、p1 6的表达情况。 结果 在 30例肿瘤标本中有较高的 p5 3阳性表达率和p1 6阴性表达率 ,均达 6 3.3% (1 9/30 ) ,有约 5 0 %的病例呈nm2 3阳性表达 (1 6 /30 ) ,但三种抑癌基因的表达与发病年龄、临床分期、预后及肿瘤部位无明显相关性 (P >0 .0 5 )。结论 儿童胚芽细胞肿瘤的发生发展可能与抑癌基因p5 3的突变和 p1

转移抑制基因nm23-H_1蛋白表达与结直肠癌的关系

目的:研究转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１蛋白表达与结直肠癌生物学行为的关系,探讨ｎｍ２３－Ｈ１基因表达在结直肠癌发牛发展中的作用。方法:采用免疫组化技术,对４６例结直肠癌组织中ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达状态进行定位观察。结果:结直肠癌ｎｍ２３－Ｈ１基因蛋白阳性表达率为４３．５%;ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达与结直肠癌的分化程度及肿块大小无显著性差异(Ｐ＞０．０５),但与结直肠癌的淋巴结转移、临床分期以及侵犯深度有相关差异(Ｐ＜０．０５);随着转移的发生、侵犯深度的增加以及疾病向晚期发展,ｎｍ２３－Ｈ１基因的阳性表达率逐渐下降,直至完全失活。结论:作为肿瘤转移抑制基因,ｎｍ２３－Ｈ１基因在调控癌细胞增殖、抑制癌细胞转移方面起着重要的作用;ｎｍ２３－Ｈ１蛋白可作为临床判断结直肠癌侵袭转移、临床分期和患者预后的指标之一。

野生型和突变型nm23-H1基因原核表达载体的构建、表达及纯化

背景与目的nm23-H1基因是一个肿瘤转移抑制基因,但关于nm23-H1基因抑制肿瘤转移的生化机理目前并不清楚。该实验目的就是构建nm23-H1野生型和P96S、H118F突变型原核表达载体,并在大肠杆菌中表达及纯化。方法通过PCR方法扩增野生型和突变型nm23-H1目的片断,利用基因重组技术构建pET28a-nm23-H1野生型和突变型原核表达载体,并进行酶切和测序鉴定,鉴定正确克隆转化BL21(DE3)溶源菌,进行蛋白表达及可溶性分析,同时采用镍柱亲和层析法进行纯化,应用Western blot方法对纯化后蛋白进行鉴定检测。结果通过酶切和测序鉴定,pET28a-nm23-H1野生型和突变型原核表达载体序列正确,编码框正确。转化溶源菌后能够表达目的蛋白,蛋白表达量高,且均为可溶性蛋白,Western blot检测结果提示野生型和突变型nm23-H1蛋白分子量为20kDa,与预计值相符。结论成功构建pET28a-nm23-H1野生型和P96S、H118F突变型原核表达载体,所表达蛋白可用于下一步实验研究。

nm23-H1、p16蛋白在大肠肿瘤中的表达及其意义

目的 探讨大肠癌、大肠腺瘤及正常粘膜中nm 2 3 H 1,p16蛋白的表达。方法 应用免疫组化ABC法对 3 0例大肠癌、2 5例大肠腺瘤及 2 5例正常大肠粘膜中nm 2 3 H 1、p16蛋白的表达进行测定。 结果 大肠癌组织中nm 2 3 H 1与 p16阳性表达率分别为 66.7%和 40 .0 % ;p16在大肠癌中的表达水平明显低于正常大肠粘膜及腺瘤中的表达 (P <0 .0 5 ) ,而nm 2 3 H 1表达在各组间虽呈下降趋势 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;两者在大肠癌中的表达存在相关关系 (P <0 .0 5 ) ,并与癌组织的分化程度、有无淋巴结转移及患者的生存时间等均有明显相关性 (P <0 .0 5 )。结论 抑癌基因 p16的失活、nm 2 3 H 1基因的低表达可能与大肠癌的发生、发展、转移及预后有关。

转化生长因子TGF-β及抑癌基因nm23-H_1在前列腺癌组织中的表达与意义

目的研究抑癌基nm2 3 H1及TGF β在前列腺癌组织中的表达与意义。 方法采用鼠抗人nm2 3 H1及TGF β单克隆抗体及免疫组织化学SABC法。 结果在 40例前列腺癌组织标本中 ,nm2 3 H1在高、中、低分化前列腺癌组织中的阳性表达率分别为 70 % (7/ 10 )、6 8 75 % (11/ 16 )、2 1 42 %(3/ 14) ;临床分期阳性率分别为T16 6 7% (10 / 15 )、T2 6 3 36 % (7/ 11)、T333 3% (2 / 6 )、T4 2 5 % (2 / 8)。TGF β在高、中、低分化前列腺癌组织中的阳性表达率分别为 30 % (3/ 10 )、31 2 5 % (5 / 16 )、71 42 % (10 /14) ;临床分期阳性率分别为T14 0 % (6 / 15 )、T2 45 5 % (5 / 11)、T35 0 % (3/ 6 )、T4 5 0 % (4/ 8)。nm2 3 H1在高、中分化前列腺癌组织中的表达强于在低分化前列腺癌组织中的表达 (P <0 0 1) ,T1、T2 期阳性表达强于T3、T4 期 (P <0 0 1)。TGF β在高、中分化前列腺癌组织中的表达弱于低分化前列腺癌组织 (P <0 0 1) ,而其在不同临床分期的表达差异无显著意义 (P >0 0 5 )。结论抑癌基因nm2 3 H1表达与前列腺癌分化程度及临床分期呈负相关 ;TGF β表达与前列腺癌病理分化呈正相关 ,而与其临床分期无关。因而借助nm2 3 H1与TGF

nm23蛋白在非小细胞肺癌患者肺癌组织和淋巴结表达的临床意义

目的探讨ｎｍ２３基因与肺癌转移的关系。方法采用链霉抗生物素蛋白－过氧化物酶（Ｓ－Ｐ）快速免疫组织化学法检测４９例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者肺癌组织和４９份配对淋巴结标本ｎｍ２３基因产物－核苷二磷酸激酶（ＮＤＰＫ／ｎｍ２３）。结果ＮＤＰＫ／ｎｍ２３在ＮＳＣＬＣ的肺癌组织表达为５７．１４％（２８／４９），其中鳞癌为６０．８７％（１４／２３），腺癌为５３．８５％（１４／２６）。２６例伴淋巴结转移的肺癌标本中阳性１６例（６１．５４％）。ＮＤＰＫ／ｎｍ２３表达与淋巴结转移没有负相关，在淋巴结转移灶有较高表达（５３．８５％，１４／２６）。结论ｎｍ２３基因在肺癌的发生、转移中可能起着不同的作用。

肿瘤转移抑制基因KISS-1和NM23-H1的原核表达与纯化

从人胎盘组织和乳腺癌细胞中克隆得到肿瘤转移抑制基因KISS-1和NM23-H1,经Blast比对分析与GenBank公布序列同源性达100%。NM23-H1在大肠杆菌中成功表达,大部分为可溶性蛋白,占总蛋白50%以上,经纯化后纯度达到90%;而KISS-1需要与载体的部分序列融合才能够得到有效表达,表达产物为不可溶的包涵体蛋白,占包涵体总量的70%以上,经纯化后KISS-1蛋白可能形成多聚体结构。

胰腺癌中nm23基因的表达

目的 探讨nm23基因及蛋白在胰腺癌中的表达水平及其与转移的关系。方法 用Northern blot分析、原位杂交及免疫组织化学法分别对16例正常胰腺及29例胰腺癌中的nm23基因及蛋白的表达进行检测。结果 nm23在胰腺癌组织中的表达高于正常胰腺组织,无转移的胰腺癌组织nm23表达高于有转移的胰腺癌组织。结论 nm23与胰腺癌的转移和恶化密切相关。

卵巢上皮性癌中新基因NM23-H1B的表达

目的 研究人类新基因NM 2 3 H1B与卵巢癌的关系。方法 收集 2 0 0 3年 4月～ 2 0 0 4年 2月经病理证实的卵巢癌手术切除标本 2 0例及卵巢交界性肿瘤 4例 (卵巢瘤组 ) ,正常卵巢组织 4例 (对照组 )。采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、Northern杂交测定NM 2 3 H1BmRNA的表达。结果 采用RT PCR在所有的标本中均检测到NM 2 3 H1B基因mRNA的表达 ,其在正常卵巢组织中表达较低 ,而所有的卵巢肿瘤中其表达均出现明显上调 ,早期卵巢癌中的表达高于晚期。Northern杂交显示 ,NM 2 3 H1B基因在正常卵巢组织的表达量较低 ,交界性肿瘤中的表达则与正常组织中相似 ,而在卵巢癌组织中表达明显增高 ,早期卵巢癌中的mRNA表达量高于晚期卵巢癌 ,早期卵巢癌中似乎在分化好 (Ⅰ级 )的表达量明显高于分化较差 (Ⅱ、Ⅲ级 )者。结论 NM 2 3

鼻咽癌中血管内皮生长因子和转移抑制基因nm23的表达及其临床意义

目的 探讨肿瘤组织中血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)和转移抑制基因nm2 3的表达作为判断鼻咽癌患者预后因素的意义。方法 选择 1991年 1月～ 1995年 12月就诊于武汉大学中南医院肿瘤放射化学治疗科 ,并随诊 4年以上的 75例鼻咽癌患者 ,通过免疫组化SP法检测其鼻咽癌活体组织检查标本中VEGF和nm2 3的表达 ,分析它们与鼻咽癌患者的复发、转移、生存期及两者之间的相关性 ,并用Cox回归模型进行多因素分析。结果 鼻咽癌活体组织检查标本中VEGF的阳性表达率和nm2 3的阴性表达率分别为 5 4 7%和 5 6 0 %。VEGF阳性表达和nm2 3的阴性表达与鼻咽癌患者发生转移 (分别为P =0 0 181,P =0 0 0 91)和较短的生存期 (分别为P =0 0 136 ,P =0 0 2 0 7)有相关性 ,未发现它们与鼻咽癌复发 (分别为P =0 176 3,P =0 1188)及两者之间 (P =0 16 43)有相关性。经Cox回归模型多因素分析 ,VEGF和nm2 3的表达均可作为判断鼻咽癌预后的因素 (P =0 0 132 ,P =0 0 10 2 )。结论 鼻咽癌活体组织检查标本中VEGF和nm2 3的表达可作为预测鼻咽癌患者的预后因素。

口腔鳞癌组织中nm23-H_1基因的mRNA表达及临床意义

目的 研究口腔鳞癌中ｎ ｍ２３ － Ｈ１ 基因的ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达情况及其与口腔鳞癌颈淋巴结转移的关系。方法 采用斑点杂交的方法检测８ 例口腔鳞癌，２ 例正常口腔粘膜中ｎ ｍ２３ － Ｈ１ 基因的ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达情况。结果 ２例正常口腔粘膜中ｎｍ２３ － Ｈ１ 基因的ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达水平均较高；４ 例手术时无颈淋巴结转移的口腔鳞癌组织中３ 例ｎｍ２３ － Ｈ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 呈相对高表达，１ 例表达水平较低；而伴有颈淋巴结转移的４ 例口腔鳞癌组织中ｎｍ２３ － Ｈ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 均为相对低表达。结论 提示ｎｍ２３ － Ｈ１ 基因ｍ Ｒ Ｎ Ａ

“治癌灵”穴位贴敷联合针刺对H22肝癌小鼠Nm23-H1表达的影响

目的:观察"治癌灵"穴位贴敷联合针刺对H22移植性肝癌小鼠肿瘤转移抑制基因Nm23-H1蛋白水平表达的调节作用,探讨该疗法对肿瘤的抑制作用是否与提高Nm23-H1的表达有关。方法:选取健康雄性昆明种小鼠50只,采取完全随机分组法,依照随机数字表法选取10只小鼠,设为正常组,余者造模,经正常饲养7天后,随机分为模型组、穴位贴敷组、针刺组、综合组,每组10只。于雄性昆明种小鼠前肢右腋皮下接种0.2 m L H22肿瘤细胞悬液进行造模。计算瘤重和小鼠肿瘤生长抑制率,采用免疫组化法检测瘤细胞中Nm23-H1的含量。结果:与模型组比较,各组均能抑制瘤体生长(P<0.05),明显改善小鼠的生存质量,且综合组优于穴位贴敷组和针刺组(P<0.05);与模型组比较,各组均能明显提高Nm23-H1蛋白表达水平(P<0.01),综合组优于穴位贴敷组和针刺组(P<0.05)。结论:"治癌灵"穴位贴敷及针刺均可提高H22移植性肝癌小鼠Nm23-H1蛋白表达水平,进而抑制癌细胞的生长及肿瘤侵袭转移,改善生存质量,且穴位贴敷联合针刺疗法疗效更佳。