nm23—H1蛋白和c-erbB-2蛋白在人肝细胞癌中的表达

应用免疫组化检测68例肝细胞癌（HCC）及其癌旁肝组织中nm23－H1蛋白和c－erbB－2蛋白的表达。结果显示nm23－H1蛋白在癌旁肝组织中均呈强阳性表达，肝细胞癌组织中38／68（56％）例呈阳性表达。阳性产物主要定位于肿瘤细胞胞浆，nm23－H1蛋白表达与HCC肿瘤体积、组织病理学分型及分级无关，而与肝内或肝外转移呈负相关。结果表明nm23-H1在抑制HCC肝内或肝外转移中起着重要作用。有可能成为评价HCC病人预后的一项指标。

肝细胞癌和癌旁肝组织中转化生长因子-β1的表达与nm23-H1蛋白表达的关系

目的 探讨肝细胞肝癌中转化生长因子 - β1(transforminggrowthfactor - β1,TGF - β1) ,nm2 3-H1表达上的关系。方法 用免疫组化的方法研究了 4 5例肝癌石蜡标本切片的TGF - β1,及nm2 3-H1蛋白的表达 ,进而探讨了TGF - β1的表达与nm2 3-H1之间的关系。 结果 TGF - β1及nm2 3-H1与肝癌的转移均显著相关 ,而二者之间无相关性。结论 TGF - β1和nm2 3-H1表达无相关性 ,但二者均与肝癌的转移相关。

肝细胞癌CT表现与nm23-H1基因和CD44v6基因表达的研究

目的 探讨螺旋CT双期扫描对推测肝细胞癌(HCC)细胞中nm23-H1基因和CD44v6基因表达价值。材料与方法 36例经手术病理证实且行螺旋CT(SCT)双期增强扫描的HCC病例,观察其SCT表现特征:包膜、子灶、门静脉癌栓、肝门淋巴结转移、肝硬化、肿瘤的大小和强化特征。用免疫组织化学方法检测癌组织中nm23-H1基因和CD44v6基因表达情况。结果 HCC细胞中,nm23-H1阳性21例,阳性率为58.3％,转移高危组(子灶、门静脉癌栓、肝门淋巴结转移)nm23-H1基因的表达低于转移低危组(P<0.05);CD44v6阳性14例,阳性率为38.9％,转移高危组表达高于转移低危组(P<0.05),包膜欠完整组表达高于包膜完整和无包膜组(P<0.05),nm23-H1基因的表达与CD44v6基因的表达有关联(P<0.05)。结论 HCC的SCT表现与相关基因的表达有关,HCC SCT表现对推测nm23-H1基因和CD44v6基因的表达有一定价值。

nm23-H1基因在肺多形性癌组织中的表达及意义

目的 探讨 nm2 3- H1基因表达与肺多形性癌转移及预后的关系。方法 应用免疫组化 S- P法回顾性分析 2 0例肺多形性癌组织中 nm2 3- H1基因表达 ,并结合肺多形性癌的转移、侵袭力、肿块大小及预后进行分析。结果 nm2 3- H1基因在肺多形性癌中表达阳性率 ,有淋巴结转移组 (2 5 .0 % )低于无淋巴结转移组 (87.5 % ) (P<0 .0 1) ,有侵犯周围组织组 (12 .5 % )低于无侵犯周围组织组 (10 0 % ) (P<0 .0 1) ,肿块直径 >6 cm组 (4 2 .8% )与肿块直径 <6 cm组 (5 0 .0 % ) ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 nm 2 3- H1基因表达与肺多形性癌有无淋巴结转移、侵袭力强弱关系密切 ,而与肿块大小无关。 nm 2 3- H 1基因高表达预示肺多形性癌转移及侵袭力低 。

甲状腺乳头癌中P16和nm23-H_1蛋白的表达及其意义

目的 探讨抑癌基因P16及转移制基因nm 2 3 -H1在甲状腺乳头状癌中的表达及其与淋巴结转移的关系。方法 应用免疫组化方法检测 42例甲状腺乳头状癌及 11例良性甲状腺中P16,nm 2 3 -H1蛋白的表达 ,分析其与甲状腺乳状癌的发生及淋巴结转移的关系。结果 P16蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达明显低于良性甲状腺瘤组 ,两者之间其差异有显著性 ,nm2 3 -H1蛋白表达与甲状腺乳头状癌颈部淋巴结转移关系密切。结论 P16蛋白表达缺失与甲状腺乳头状癌发生有关 ,nm 2 3 -H1具有抑制甲状腺乳头状癌淋巴结转移的功能 ,其nm2 3

肿瘤转移抑制基因nm23-H_1 mRNA在乳腺癌中的转录表达

目的 探讨nm23-H1基因mRNA在乳腺癌组织中的表达及其与临床的关系.方法 采用半定量RT—PCR方法,检测30例乳腺癌组织nm23-H1的表达.结果 ①淋巴结阳性的原发灶组织nm23-H1 mRNA表达明显低于淋巴结阴性的原发灶组织,Ⅲ期乳腺癌组织nm23-H1 mRNA水平较I、Ⅱ期的明显低.②多因素分析发现淋巴结转移与nm23-H1 mRNA的表达有显著性相关.结论 nm23-H1基因mBNA表达强度与淋巴结转移呈负相关.在乳腺癌转移过程中,nm23-H1 mRNA起重要的作用.

Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受体Flt-1在结直肠癌中的表达及临床意义

背景与目的:近年来的研究表明,多种生物学指标与结直肠癌发生、发展以及手术后的复发转移、预后有关。本研究旨在探讨人结直肠癌组织中Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受体Flt-1的表达与各临床病理参数及预后的关系及临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法,检测72例结直肠癌组织及其对照癌旁正常黏膜组织中Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受体Flt-1表达的状况,分析其与临床病理参数及复发转移的关系。结果:在结直肠癌中Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受体Flt-1的表达率分别为62.5%(45/72)、66.7%(48/72)、55.5%(40/72)、61.1%(44/72)、79.2%(57/72),均显著高于对照癌旁正常黏膜组织(P<0.01)。Survivin表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期及术后复发转移有关;MMP-2表达与淋巴结转移、TNM分期、术后复发转移有关;nm23-H1表达与淋巴结转移、TNM分期相关;VEGF表达与浸润深度、TNM分期及术后复发转移有关;而受体Flt-1表达与临床病理及预后因素均无关。结论:Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF与结直肠癌的发生、发展密切相关,联合检测多个相关基因的表达能更准确地判断结直肠癌的生物学特征及预后判断。

nm23-H1基因逆转人高转移大细胞肺癌细胞L9981转移表型的分子机制

背景与目的:nm23-H1基因已被证明是转移抑制基因,转染野生型nm23-H1基因可以逆转肿瘤的恶性转移表型,但是nm23-H1基因抑制或逆转肺癌转移的分子机制却知之甚少,我们在建立转nm23-H1基因的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981-nm23-H1的基础上,进一步探讨nm23-H1基因抑制肺癌转移的分子机制。方法:应用MTT法和改良的Boyden小室法分析转基因前后细胞的体外增殖能力及体外侵袭力的变化,体内实验分析转基因前后细胞在裸鼠体内的成瘤性及肺转移能力的改变,同时应用RT-PCR和Westernblot分别检测各组细胞中转移相关基因β-catenin、E-Cadherin、CD44S、CD44V6、MMP-2、TIMP-1、VEGF、基因mRNA及蛋白表达水平。结果:(1)转基因细胞株L9981-nm23-H1的体外增殖能力[(0%vs.(19.5±2.9)%]、克隆形成能力(10.3±0.7vs.21.7±1.3)及侵袭力显著低于L9981细胞(31.0±3.0vs.151.0±6.3)(P<0.01);(2)nm23-H1基因在裸鼠体内的抑瘤率显著增高(82.6%vs.0%),且转染nm23-H1基因的L9981细胞裸鼠体内移植瘤肺转移显著降低(0%vs.100%)(P<0.01);(3)nm23-H1基因能够上调β-catenin、E-Cadherin、TIMP-1基因mRNA及蛋白表达,下调VEGF、CD44V6和MMP-2基因mRNA及蛋白表达(P<0.01);(4)nm23-H1表达上调CD44S基因mRNA表达(P<0.01),而对其蛋白表达?

胃癌及区域淋巴结CD44v6、nm23-H1表达与其病理特征及预后关系的研究

目的:探讨胃癌及其区域淋巴结CD44V6、nm23-H1表达与胃癌病理特征及预后的关系。方法:本研究采用SP免疫组织化学方法对110例胃癌及613枚区域淋巴结组织中的CD44V6、nm23-H1的表达进行检测。结果:在胃癌原发灶和在淋巴结转移灶,CD44V6阳性表达率分别为65.5%和89.4%,nm23-H1阳性表达率分别为39.1%和16.8%。CD44V6、nm23-H1表达率与胃癌的组织学类型、浸润深度、淋巴结转移密切相关。胃癌原发灶CD44V6阳性表达组5年生存率显著低于阴性表达组(P<0.01);nm23-H1阳性表达组5年生存率显著高于阴性表达组(P<0.01)。结论:对胃癌组织进行CD44V6、nm23-H1蛋白的检测,有助于预测胃癌进程和淋巴结转移的诊断,以及评估胃癌患者的预后。

Nm23-H1/NDPK-A基因在大肠杆菌中的高效表达及产物纯化的研究

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增人二磷酸核苷激酶Ａ亚基（ＮＤＰＫ－Ａ）基因，即ｎｍ２３－Ｈ１／ＮＤＰＫ－Ｋ基因的编码序列，经序列分析后，定向克隆于表达质粒载体ｐＢＶ２２０，在大肠杆菌ＤＨ５α中高效表达出重组人ＮＤＰＫ－Ａ．表达产物为可溶性的非融合蛋白，占菌体总蛋白４２％．斑点ＥＬＩＳＡ法鉴定表明表达产物与ＮＤＰＫ－Ａ标准抗血清呈阳性反应．以ＤＥＡＥ纤维素弱阴离子交换层析、ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅ染料亲和层析结合高效液相排阻色谱技术纯化ｒＮＤＰＫ－Ａ，得纯度为９６．７％的目标蛋白．以反相高效液相色谱法进行酶活性分析，表明纯化的ｒＮＤＰＫ－Ａ能催化ＡＴＰ＋ＵＤＰ＝ＡＤＰ＋ＵＴＰ的反应，比活性为８００Ｕ／ｍｇ蛋白．

肿瘤转移抑制基因nm23-H1对不同宫颈癌细胞侵袭和增殖的作用

背景与目的:nm23-H1是一种多效性基因,其抑癌作用有一定的组织特异性。本研究目的在于探讨nm23-H1对不同宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用。方法:将真核表达载体pcDNA3.1-nm23-H1转染入宫颈癌细胞,Transwell小室法检测转染前后细胞侵袭性改变。MTT法绘制生长曲线,比较细胞增殖能力。流式细胞仪检测细胞周期改变。结果:与亲本细胞Caski、SiHa和空载体转染细胞Caski-3.1、SiHa-3.1相比,pcDNA3.1-nm23-H1转染细胞Caski-N和SiHa-N的侵袭力和增殖受到明显抑制(P<0.05),G2/M期和S期细胞比例降低(P<0.05),而G0/G1期细胞比例明显增加(P<0.05)。nm23-H1对HeLa细胞增殖、侵袭及细胞周期均无明显影响(P>0.05)。结论:nm23-H1对不同宫颈癌细胞的增殖和侵袭等细胞表型可产生细胞特异性的抑制作用。

PTEN、nm23-H1和Syk在大肠癌中的表达及意义

目的检测PTEN、nm23-H1和Syk蛋白在大肠癌中的表达,探讨其与大肠癌发生、发展、浸润和转移的关系。方法采用免疫组化SP法检测60例大肠癌组织及30例正常大肠黏膜中PTEN、nm23-H1和Syk的表达,分析三者与大肠癌临床病理特征的关系。结果正常大肠黏膜中PTEN、nm23-H1和Syk的阳性表达率分别为90.0%(27/30)、93.3%(28/30)和96.7%(29/30),而在大肠癌组织中分别为36.7%(22/60)、41.7%(25/60)和31.7%(19/60),差异均有统计学意义(P<0.01)。大肠癌中3种蛋白的表达与年龄、性别、肿瘤大小和发生部位均无关(P>0.05),PTEN、Syk表达与大肠癌的浸润程度、淋巴结转移、分化程度及Duke's分期有关,nm23-H1表达与浸润程度、淋巴结转移及Duke's分期有关。大肠癌中3种蛋白表达两两呈正相关。结论 PTEN、nm23-H1和Syk表达与大肠癌发生、发展、浸润及转移密切相关,联合检测是判断大肠癌生物学行为的重要指标。

利用定点突变技术构建突变nm23-H_1和EGFP融合基因

背景与目的以前的研究已经证明nm23H1基因是肿瘤转移抑制基因,但其抑制肿瘤转移的分子机制目前还不完全清楚。基因定点突变技术可以精确地改变基因的特定碱基序列,获得突变蛋白质。本研究的目的是应用基因定点突变技术构建突变型nm23H1增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因,为进一步研究肿瘤抑制基因nm23H1的功能、生化作用机制提供理论基础和实验依据。方法以逆转录病毒PLXSN野生型nm23H1EGFP质粒为突变模板,应用QuikChangeTM定点突变方法,简单、快速、高效地引入nm23H1S44A、nm23H1P96S、nm23H1H118F、nm23H1S120G四个点突变和一个联合位点突变nm23H1P96SS120G,构建了突变型nm23H1EGFP融合基因。结果成功构建了nm23H1S44AEGFP、nm23H1P96SEGFP、nm23H1H118FEGFP、nm23H1S120GEGFP、nm23H1P96SS120GEGFP五个突变型nm23H1EGFP融合基因,经DNA序列分析突变的碱基序列与实验设计完全一致。结论成功构建了五个具有不同突变位点的突变型nm23H1EGFP融合基因。QuikChangeTM定点突变技术是一种简单、快速、高效的基因定点突变方法。

nm23-H1基因对口腔癌Acc-M细胞株的转移能力及化疗敏感性影响的体外研究

目的 通过 nm2 3- H1的转化及导入 Acc- M细胞株 ,建立稳定、高效、低毒的转染方法 ,观察 nm2 3- H1对 Acc- M细胞株侵袭转移能力及化疗敏感性的影响。方法 采用基因转化技术 ,制备高纯度的 nm2 3- H1真核表达质粒。用阳离子脂质体介导的转染技术 ,将 nm2 3- H1基因转染到口腔腺样囊性癌 Acc- M细胞株。用免疫组化技术检测转染前后的 nm2 3- H1的表达。并用 transwell小室和冲刷实验 ,观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。采用 MTT法观察 nm 2 3- H1对 Acc- M化疗敏感性影响。结果 1使用重组的 p CMV - Neo- Bam的真核表达载体 ,将 nm 2 3- H 1转染口腔癌细胞 ,并获得稳定表达。 2 Acc- M细胞株 nm2 3- H 1基因的转染前后表达水平有明显差异。 3转染后的 Acc- M细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低。 4转染前后使用 C- DDP的 L D50 分别为2 .6 4± 0 .4 7,1.85± 0 .4 1(P<0 .0 1)。结论 nm2 3- H1对 Acc- M细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用 。

nm23-H1表达预测大肠癌转移的价值研究

目的 大肠癌预后取决于是否存在肿瘤转移 ,目前尚无肯定的观测大肠癌细胞恶性潜能的生物学指标。本研究目的在于探讨nm2 3 H1作为预测大肠癌转移指标的潜在价值。方法 采用免疫组织化学链霉菌亲合物素蛋白—生物素酶标 (SP)方法对 5 8例存档大肠癌标本进行nm2 3 H1蛋白表达检测 ,用SSPS统计软件包对nm H1表达与临床病理参数的关系进行分析。结果 正常大肠粘膜和大肠腺瘤nm2 3呈阳性表达 ,6 2 1%大肠癌组织阳性表达。nm2 3表达与肿瘤分级、淋巴结及肝转移负相关 (P值分别为 0 0 10 0 ,0 2 0 87,0 0 0 376 )。nm2 3阳性表达的大肠癌患者预后好(P =0 0 0 0 2 )。结论 nm2 3

nm23-H1基因在大肠癌中的表达与肝转移及预后的关系

目的：探讨ｎｍ２３－Ｈ１蛋白表达与大肠癌肝转移及预后的关系。方法：对１０１例大肠癌存档石蜡块进行重新切片，采用ｎｍ２３－Ｈ１单克隆抗体进行免疫组化染色（ＬＳＡＢ法）。结果：ｎｍ２３－Ｈ１蛋白表达与年龄、性别、肿瘤大小、部位、组织类型、浆膜侵犯无关；与Ｄｕｋｅｓ分期、淋巴结转移有关；手术时有肝转移组较无肝转移组低，手术后有肝转移复发组较无肝转移复发组低（Ｐ＜００１）。Ｃｏｘ模型分析显示ｎｍ２３－Ｈ１是大肠癌预后的一个保护性指标。结论：ｎｍ２３－Ｈ１基因对大肠癌肝转移和预后具有重要作用。

壮骨镇痛胶囊对乳腺癌细胞nm23-H1和c-myc基因表达的影响

目的观察壮骨镇痛胶囊对高转移人乳腺癌MDA-MB-231细胞抑癌基因nm23-H1和原癌基因c-myc表达的影响,探讨壮骨镇痛胶囊抑制MDA-MB-231细胞增殖和迁移的可能作用机制。方法采用RT-PCR法和免疫细胞化学法分别检测不同浓度壮骨镇痛胶囊含药血浆对MDA-MB-231细胞nm23-H1和c-myc基因mRNA及其蛋白表达的影响,并分析其对nm23-H1/c-myc蛋白比值的影响。结果 5%壮骨镇痛胶囊含药血浆显著抑制了MDA-MB-231细胞nm23-H1和c-myc基因的转录和翻译;1.25%壮骨镇痛胶囊含药血浆抑制了nm23-H1的转录和翻译以及c-myc基因的翻译,对c-myc基因的转录无显著影响;0.63%壮骨镇痛胶囊含药血浆对nm23-H1和c-myc基因的转录和翻译均无明显影响;5%和1.25%壮骨镇痛胶囊含药血浆显著提高了MDA-MB-231细胞nm23-H1/c-myc蛋白比值,0.63%壮骨镇痛胶囊含药血浆对nm23-H1/c-myc蛋白比值无显著影响。结论不同浓度壮骨镇痛胶囊含药血浆对乳腺癌MDA-MB-231细胞nm23-H1和c-myc基因的表达具有不同的作用,该药可能通过降低癌细胞c-myc基因表达继而提高细胞中nm23-H1/c-myc蛋白比值来降低癌细胞的增殖和迁移能力。

nm23-H_1基因对人肺癌细胞中细胞外信号调节激酶活性的影响

目的 探讨肿瘤转移抑制基因nm2 3 H1 对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中细胞外信号调节激酶ERK1/2活性的影响。方法 应用特异性识别总ERK1/2 ( p44 /4 2MAPkinase)和双磷酸化ERK1/2( phospho p44 /4 2MAPkinase)的抗体及蛋白印迹法 (Westernblot) ,检测L9981(缺失nm2 3 H1 基因的原代肺癌细胞株 )、L9981 nm 2 3 H1 (转染了nm 2 3 H1 基因的L9981细胞株 )、L9981 PLXSN (转染了空载体的L9981细胞株 )中总ERK1/2和磷酸化ERK1/2的水平。磷酸化ERK 1/2活性应用非放射性免疫沉淀和Westernblot法以及 p44 /4 2MAPkinase分析试剂盒予以检测。 结果 L9981 nm2 3 H1 细胞株中磷酸化ERK 1/2的水平 ,以及ERK1/2活性均显著低于L9981细胞株和L9981 PLXSN细胞株 (P <0 .0 1) ,L9981和L9981 PLXSN细胞株间磷酸化ERK 1/2水平和ERK 1/2活性比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。三个细胞株间总ERK1/2水平比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 nm2 3 H1 基因可明显靶向地抑制人高转移肺癌细胞株L9981中ERK 1/2的转录表达和ERK 1/2的活性。推测nm2 3 H1 基因的作用机制可能与其抑制了MAPK/ERK信号传导通路有关。

nm23-H1基因转染对人高转移大细胞肺癌细胞株生物学行为的影响及作用机理

背景与目的nm23-H1基因已被证明是一个肿瘤转移抑制基因,但其相关作用机理仍不明确。本研究通过比较nm23-H1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981生物学行为的变化,探讨nm23-H1基因影响人高转移大细胞肺癌细胞株生物学行为的可能机理。方法应用细胞体外增殖活性检测(MTT法)和体外侵袭力检测(改良Boyden小室法)技术分别检测nm23-H1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1肺癌细胞株体外增殖活性和侵袭力的变化;同时加入PKC特异抑制剂Calphostin C作用后,再次观察三株细胞株抑制剂作用前后细胞侵袭力、增殖力的变化。结果nm23-H1基因缺失的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981和L9981-pLXSN体外侵袭力和增殖活性明显高于转染nm23-H1基因的L9981-nm23-H1肺癌细胞株(P<0.001);L9981和L9981-pLXSN细胞间体外侵袭力和增殖活性则无统计学差异(P>0.05)。用PKC抑制剂Calphostin C处理L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1肺癌细胞株后,细胞体外侵袭力和增殖活性下降(P<0.001),而转染nm23-H1基因的L9981-nm23-H1细胞体外侵袭力和增殖活性仍低于L9981和L9981-pLXSN(P<0.001),L9981和L9981-pLXSN细胞间则无统计学差异(P>0.05)。结论nm23-H1基因可明显抑制L9981肺癌细胞株的细胞增殖力和侵袭力。nm23-H1基因对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的生物学行为的影响可能与其抑制PKC信号传导有关。

uPA、uPAR、nm23-H1在大肠癌中的表达及其与肿瘤侵袭和转移的关系

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)和nm23H1基因蛋白在大肠癌中的表达及其与肿瘤侵袭和淋巴结转移的关系。方法应用免疫组化SABC法,对121例大肠癌手术根治标本进行uPA、uPAR和nm23H1基因蛋白测定。结果uPA、uPAR和nm23H1阳性表达率分别为62%、74%和48%。uPA和uPAR高表达与大肠癌侵袭和淋巴结转移关系密切(P<0.05)。nm23H1基因蛋白的低表达与大肠癌分化程度和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。大肠癌中uPA和nm23H1蛋白表达呈负相关(P<0.05)。结论uPA、uPAR和nm23H1基因蛋白表达与大肠癌侵袭和转移有显著相关性;同时检测uPA和nm23H1表达状况,可作为预测大肠癌淋巴结转移及预后的有用指标。