nm23-H_1基因缺失人肺癌细胞株的筛选与鉴定

nm23-H1基因与肺癌的侵袭与转移密切相关,但是其作用的分子机制尚不清楚,为研究nm23-H1基因的功能,筛选并鉴定了nm23-H1基因缺失人肺癌细胞株及其生物学特性.应用Southernblot,RT-PCR和West-ernblot检测9株人肺癌细胞株中nm23-H1基因的存在状态及其生物学行为.结果发现发现人大肺癌细胞株L9981中存在nm23-H1等位基因的杂合性缺失,与其同源的NL9980及其它7株肺癌细胞株中nm23-H1基因均以杂合子的形式存在;并且L9981细胞株的增殖能力、克隆形成能力、体外侵袭力,裸鼠体内成瘤性及移植瘤肺转移的能力均显著高于NL9980.研究结果显示nm23-H1基因的缺失可能与L9981细胞株恶性表型和高转移潜能密切相关.

食管癌中nm23-H_1基因突变与癌转移的关系

目的 探讨人食管癌中nm2 3-H1基因突变与食管癌转移的关系。方法 应用PCR -SSCP方法对 40例食管癌组织中nm2 3-H1基因进行检测。结果 nm2 3-H1基因突变率转移组 (5 5 % )高于非转移组 (10 % ,P <0 .0 5 )。结论 通过nm2

nm23-H1基因突变及异常表达与大肠癌转移相关性的研究

目的 :探讨nm2 3 H1基因突变及异常表达与大肠癌转移之间的关系。方法 :(1)收集 63例中国人大肠癌组织及癌旁组织 ,酚 氯仿 异戊醇法提取基因组DNA ,同时收集整理患者的临床和病理资料 ;(2 )应用PCR扩增nm2 3 H1基因全部编码序列第 2～ 5位外显子后 ,经SSCP法初步筛查基因突变并对异常带型样本进行DNA测序分析 ;(3 )应用流式细胞仪检测 14对大肠癌组织及癌旁组织nm2 3 H1蛋白的表达情况。结果 :nm2 3 H1基因第 2～ 4位外显子在 63例大肠癌组织中 (其中 2 0例标本有淋巴结转移 )未发现异常突变 ;仅有 15例大肠癌组织nm2 3 H1基因第 5外显子序列存在突变 ,其第 3 60位碱基发生T C置换 (同义突变 ) ;nm2 3 H1基因蛋白在大肠粘膜组织中有表达 ,在部分大肠癌组织中的表达比其癌旁粘膜组织低 ,并与肿瘤转移有相关性。结论 :nm2 3 H1基因突变在大肠癌组织中为小概率事件 ,大肠癌病理类型、有无转移与nm2 3 H1基因突变无明显相关性 ;nm2 3 H1基因蛋白水平的表达下降与大肠癌的转移有相关性。

上皮性卵巢癌中nm23-H1基因突变

目的 本文研究nm2 3 H1基因在上皮性卵巢肿瘤中的突变情况 ,以期寻找监测卵巢癌转移并能指导治疗的指标。方法 利用非同位素PCR SSCP技术研究nm2 3 H1基因的 5个外显子的突变情况。结果 正常卵巢、良性卵巢癌及交界性瘤均未发现突变 ,卵巢癌突变率显著增高。低分化程度卵巢癌突变率高于高、中分化程度的卵巢癌。浆液性卵巢癌nm2 3 H1基因突变率高于其他组织学类型。Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌突变率高于Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌。发生淋巴结转移的卵巢癌突变率高于无淋巴结转移的卵巢癌。结果 nm2 3 H1基因突变容易发生于分化程度较低、有淋巴结转移的晚期卵巢癌病例中。

毛细管电泳检测nm23-H_1基因在乳腺癌组织中的表达

目的:检测nm23-H1基因在乳腺癌中的表达与突变,寻找它们与淋巴结转移的关系。方法:用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测nm23-H1mRNA表达,毛细管聚丙烯酰胺凝胶电泳(CPAGE)行单链构象多态性分析(SSCP)检测DNA突变。结果:应用CPAGE可在30min内分离出nm23-H1基因RT-PCR产物的单链及双链峰。nm23-H1表达、突变在腋淋巴结有、无转移组均有差异;mRNA在有远处转移组呈现低表达;DNA突变率在肿瘤≤5cm和>5cm组间有差异。结论:nm23-H1表达和突变可以做为评估乳腺癌转移危险的指标;CPAGE技术用于肿瘤组织的PCR-SSCP分析具有快速灵敏、准确、重复性好的特点。

胃癌组织中nm23基因蛋白和D2-40的表达及其临床意义

目的探讨nm23基因蛋白、D2-40的表达与胃癌淋巴管生成及侵袭转移的关系。方法采用免疫组织化学SP法对63例人胃癌组织中nm23基因、D2-40的表达情况进行分析。结果 nm23在胃癌中的表达低于正常胃黏膜组织,胃癌伴有淋巴结转移的表达低于无淋巴结转移的表达（P〈0.05）,与胃癌的侵袭转移倾向呈负相关（P〈0.05）;D2-40在胃癌中的表达明显高于正常胃黏膜组织,在Ⅲ~Ⅳ期胃癌显著高于Ⅰ期胃癌（P〈0.05）,伴淋巴结转移组明显高于无转移组（P〈0.05）,与胃癌的侵袭转移倾向呈正相关（P〈0.05）;胃癌中D2-40及nm23基因表达之间呈负相关（P〈0.05）。结论 nm23基因与D2-40的表达在胃癌淋巴转移中起重要作用,对预测胃癌的淋巴转移、判断预后及制定个体化综合治疗方案有一定的临床价值。

COX-2、p53、PCNA和nm23异常表达与胃癌生物学行为的关系

背景及目的:分子生物学研究表明COX-2、p53、PCNA和nm23基因蛋白异常表达与胃癌发生发展密切相关,有关它们异常表达与胃癌生物学行为的关系尚不清楚。本文旨在了解它们与胃癌临床病理生物学行为的关系。方法:用免疫组化(SP)方法检测胃癌手术切除71例标本中上述基因表达。结果:(1)胃癌COX-2过表达率为70.4%(50/71例),且过表达与肿瘤大小、大体类型、组织学类型、淋巴结转移(LN)及临床病理分期密切相关(P<0.05或0.01)。(2)71例胃癌标本的p53和PCNA过表达率分别为74.6%和78.9%,其中LN(+)胃癌p53和PCNA过表达(86.7%和88.8%)分别高于LN(-)病例(53.8%和61.5%)(P<0.05),且Ⅰ+Ⅱ期胃癌的p53和PCNA过表达率分别(52.2%和60.9%)显著低于Ⅲ+Ⅳ期病例(85.4%和87.5%)(P<0.05)。(3)LN(-)病例的nm23低表达率(88.5%)显著低于LN(+)病例的62.2%(P<0.05);且Ⅰ+Ⅱ期病例的nm23低表达91.3%明显高于Ⅲ+Ⅳ期病例62.5%(P<0.05)。(4)COX-2与p53、PCNA和nm23基因2个以上表达病例与表达异常或单因素表达异常者相比,在组织学类型、癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论:胃癌COX-2与p53、PCNA和nm23异常表达与胃癌淋巴结转移和疾病进展等生物学行为密切相关。

环氧化酶-2和nm23H1蛋白表达及其与胆管癌的相关性

目的探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和nm23H1蛋白在胆管癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组化方法检测46例胆管癌和10例正常胆管组织中COX-2及nm23H1蛋白表达水平,并结合临床病理特征进行分析。结果在胆管癌中COX-2及nm23H1蛋白阳性表达率分别为78.3%(32/46)和54.3%(25/46)。胆管癌中COX-2表达阳性率显著高于正常胆管组织(P<0.05),而nm23H1表达阳性率显著低于正常胆管组织(P<0.05)。COX-2表达与胆管癌的TNM分期和转移相关(P<0.05),而与胆管癌分化程度无关(P>0.05)。nm23H1表达与胆管癌的TNM分期、分化程度和转移相关(P<0.05)。结论检测COX-2和nm23H1基因蛋白表达可作为评估胆管癌生物学行为和预后的参考指标。

E-cadherin、CD44H、MMP-3、nm23H_1和VEGF的表达与鼻咽癌预后的关系

目的 :探讨E cadherin、CD44H、MMP 3、nm2 3H1和VEGF基因的表达与鼻咽癌预后的关系。方法 :应用免疫组化SP法检测 62例鼻咽癌组织中E cadherin、CD44H、MMP 3、nm2 3H1和VEGF的表达。结果 :Kaplan Meier单因素分析结果显示 ,CD44H和MMP 3的表达与患者的生存率呈负相关 (P值分别为 0 0 3 77和 0 0 15 7) ,nm 2 3H1的表达与患者的生存率呈显著正相关 (P =0 0 0 12 ) ,E cadherin和VEGF的表达与患者的生存率无相关性。Cox比例风险模型多因素分析结果显示 ,仅nm2 3H1的表达与鼻咽癌患者的预后相关 (P =0 0 0 18)。结论 :CD44H和MMP 3可作为评价鼻咽癌预后的参考指标。nm2 3H1可作为鼻咽癌独立的预后指标 。

脊髓小脑共济失调症相关蛋白-3、转移抑制基因23和磷酸酯酶与张力蛋白同源物在胶质瘤术后组织中的表达及意义

目的检测脊髓小脑共济失调兆(Ataxin)-3、转移抑制基因(nm23)和磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)在胶质瘤中的表达及其临床价值。方法 89例胶质瘤并进行手术治疗的患者作为观察组,70例正常脑组织作为对照组,应用免疫组化检测两组Ataxin-3、nm23和PTEN的表达。结果观察组Ataxin-3、nm23和PTEN表达的阳性率明显低于对照组。观察组Ataxin-3、nm23和PTEN的表达与肿瘤的体积、有无坏死及分级密切相关。观察组Ataxin-3、nm23和PTEN的表达无相关性。结论胶质瘤中Ataxin-3、nm23和PTEN均低表达,三者起到的抑制肿瘤生长的作用。联合检测Ataxin-3、nm23和PTEN的表达可能是判断肿瘤生物学行为的重要指标。

Expression of heparanase gene,CD44v6,MMP-7 and nm23 protein and their relationship with the invasion and metastasis of gastric carcinomas

AIM:To explore the expression of heparanase gene, CD44v6,MMP-7 and nm23 proteins in human gastric carcinoma as well as their relationship with the dinicopathological factors.METHODS: Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to measure the expressions of heparanase mRNA in 43 human gastric carcinomas and 10 adjacent normal gastric tissues. Streptavidin-peroxidase (S-P) two step method was used to measure the immunohistochemical expression of CD44v6,MMP-7 and nm23protein in 43 human gastric carcinomas.RESULTS:The expression of heparanase gene was positivein 29 cases of gastric cancer with a positive rate of 67.4%,which was significantly higher than those in adjacent normal gastric tissues (P<0.05).The heparanase mRNA expression was significantly related to advanced stage of disease, serosal infitration,lymph node metastasis and size of tumors (P<0.05),but not related to tumor location, gross and histological types of the cancer, peritoneal dissemination and liver metastasis(P>0.05).The positive rate of CD44v6,nm23 and MMP-7 proteins was 76.7%,37.2% and 60.5%,respectively.The CD44v6 protein expression was significantly related to serosal infiltration,lymph node metastasis and TNM stage of disease(P<0.05).The nm23 protein expression was significantly related to the tumor gross appearance,lymph node and peritoneal metastasis (P<0.05).The MMP-7 protein expression was significantly related to serosal infiltration and TNM stage of disease (P<0.05).In an attempt to measure the association between these agents, we found that the expression of heparanase mRNA had significantly negative correlation with the expression of CD44v6 and MMP-7 protein (P<0.05), the expression of MMP-7 protein had significantly positive correlation with the expression of CD44v6 protein (r=0.568, P<0.05), the expression of MMP-7 protein had no correlation with the expression of nm23 protein (P>0.05),and the expression of nm23 protein had no correlation with the expression of CD44v6 protein (P>0.05).CONCLUSION: Despite their different mechanisms of action, heparanase, CD44v6 and nm23 may play important roles in the invasive infiltration and lymph node metastasis in gastric carcinomas. Instead of metastatic spreading, MMP-7 may be just related to the invasion of gastric carcinomas.However, co-detection of these factors may be important to predict metastatic spreading in such patients.

ERK2、nm23、MMP9的表达在乳腺病变中的意义

目的:分析细胞外信号调节激酶-2(ERK2)、nm23、基质金属蛋白酶9(MMP9)在乳腺病变中的表达意义。方法:选取2019年1月—2020年10月本院收治的95例乳腺病变患者为研究对象,依据病理组织学检查结果记录病变良、恶性情况,并记录乳腺病变类型;入院时采用免疫组织化学技术检测所有患者病灶组织中ERK2、nm23、MMP9基因蛋白表达情况,分析ERK2、nm23、MMP9在乳腺病变中的表达意义。结果:经病理组织学检查结果显示,95例乳腺病变患者中,恶性病变32例,其中淋巴结转移13例,淋巴结未转移19例;良性病变63例,其中乳腺纤维瘤28例,乳腺增生35例;乳腺癌患者ERK2、MMP9阳性率均高于乳腺纤维瘤、乳腺增生患者,nm23阳性率低于乳腺纤维瘤、乳腺增生患者,差异有统计学意义(P<0.05);淋巴结转移乳腺癌患者ERK2、MMP9阳性率均高于淋巴结未转移患者,nm23阳性率低于淋巴结未转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ERK2、MMP9、nm23基因蛋白异常表达与乳腺良、恶性病变有关。

nm23-h1基因导入对腺样囊性癌分化的影响

目的 探讨ｎｍ２３－ｈ１ 基因对腺样囊性癌细胞分化的影响。方法 体外用阳离子脂质体介导ｎｍ２３－ｈ１质粒转染人口腔涎腺腺样囊性癌（ＡＣＣ）细胞株，筛选出转染阳性细胞克隆，并植入４只棵鼠颌面部，３ｗ后获取标本，石蜡包埋后进行常规组织学及免疫组织化学检查，实验以未转染的阴性细胞克隆植入４只裸鼠作对照。结果ｎｍ２３－ｈ１阳性ＡＣＣ植入棵鼠体内后肿瘤细胞有向原代细胞回归的倾向，即由实体型向筛状型或管状型转变，肿瘤细胞周围的肿瘤间质增多，巢状的肿瘤细胞外围有基底膜样结构形成；肿瘤细胞在体内增殖的过程中，表达ｎｍ２３－ｈ１的细胞数量有逐渐减少、表达强度减弱的趋势。结论 以ｎｍ２３－ｈ１为靶基因的基因治疗因同时具有抑制转移和促进分化的作用，具有较大的研究价值和临床应用前景。

1,25-二羟基维生素D_3诱导HL-60细胞分化并下调nm23基因的表达

目的 观察 1,2 5 二羟基维生素D3 [1,2 5 (OH) 2 D3 ]对白血病细胞株HL 6 0的诱导分化作用并探讨其机制。方法 通过MTT试验、细胞形态观察、表面标志分析和硝基四氮唑蓝 (NBT)还原反应 ,观察 1,2 5 (OH) 2 D3 作用后HL 6 0细胞增殖的改变和分化情况 ;通过流式细胞仪和RT PCR检测细胞周期和nm2 3基因表达的变化。结果 HL 6 0细胞经 1,2 5 (OH) 2 D3 作用后增殖受抑制、向成熟单核细胞系分化、细胞被阻滞在G1 期、nm2 3基因的表达下调。结论 1,2 5 (OH) 2 D3 对HL 6 0细胞株具有诱导分化作用 ,其作用机制可能与下调nm2 3基因的表达有关。

nm23-H1基因对肺癌细胞株L9981中Wnt信号传导通路中糖原合成激酶-3β的表达和活性的影响

目的观察转移抑制基因nm23-H1对肺癌细胞株L9981中Wnt信号传导通路中糖原合成激酶-3β（GSK-3β）的表达量和活性的影响。方法将稳定转染nm23-H1基因的肺癌细胞株、原代细胞株L9981和空载体转染细胞株培养传代，分别设为nm23-H1转染组、对照组和空白转染组。应用Western blot分别检测应用20 mmol/L LiCl处理前后3组肺癌细胞株胞质、胞核中GSK-3β的表达水平，测定上述肺癌细胞株胞质和胞核中的GSK-3β活性。结果（1） nm23-H1转染组胞质和胞核中GSK-3β蛋白表达量分别为（6 639±503）和（4 481±446） A，空白转染组分别为（645±352）和（726±68） A，对照组分别为（763±267）和（683±49） A。3组细胞株间胞质和胞核中GSK-3β表达量差异有统计学意义（P=0.025）。两两比较：nm23-H1转染组胞质和胞核GSK-3β表达水平均显著高于空白转染组和对照组（P=0.017），而后两者之间比较均差异无统计学意义（P=0.094）。（2）nm23-H1转染组胞质和胞核GSK-3β激酶活性分别为（29 371±2 492）和（9 647±859）每分钟脉冲数，空白转染组分别为（11 241±1 495）和（1 492±176）每分钟脉冲数，对照组分别为（14 271±1 137）和（1 853±113）每分钟脉冲数。3组细胞株间胞质和胞核中GSK-3β酶活性差异有统计学意义（P=0.032），两两比较：nm23-H1转染组，胞质和胞核GSK-3β酶活性均显著高于空白转染组和对照组（P=0.027），而后两者之间比较均差异无统计学意义（P=0.131）。（3）经20 mmol/L LiCl处理后，nm23-H1转染组胞质和胞核中GK-3β表达量分别为（5 037±427）和（823±350） A，与处理前比较均差异无统计学意义（P=0.168），空白转染组细胞株经LiCl处理后胞质和胞核中GSK-3β表达量分别为（2 174±126）和（248±12） A，对照组则分别为（2 273±128）和（253±14） A，两个细胞株胞质和胞核中GSK-3β表达量均显著低于处理前（P=0.012、0.015）。（4）经LiCl处理后，nm23-H1转染组胞质和胞核GSK-3β激酶活性分别为（12 837±1 042）和（748±215）每分钟脉冲数，空白转染组分别为（4 739±401）和（947±126）每分钟脉冲数，对照组分别为（4 638±401）和（1 162±127）每分钟脉冲数，3组细胞株胞质和胞核GSK-3β激酶活性均显著低于处理前（P=0.006、0.029、0.010）。结论nm23-H1基因转染能显著上调人肺癌细胞L9981中GSK-3β的蛋白表达和活性。其可能通过上调人肺癌细胞中GSK-3β的蛋白表达和活性抑制Wnt信号传导而发挥作用。

nm23-H1基因转染前后人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中蛋白激酶C转位的变化

目的研究nm23-H1基因转染诱导人舌鳞状细胞癌(以下简称舌鳞癌)Tca8113细胞凋亡过程中蛋白激酶C-θ(PKC-θ)的作用。方法采用脂质体转染法将真核表达载体pAdEasy-nm23-H1转染人舌鳞癌Tca8113细胞株。应用PKC-θ活化抑制剂Calphostin C和DMSO预处理细胞30min后,常规培养24h,倒置显微镜观察细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Westernblot分析Tca8113细胞中PKC-θ裂解活化状况;酶标仪(ELISA)检测Caspase-3的相对活性。结果人舌鳞癌Tca8113细胞胞浆中及核周存在PKC-θ的表达,nm23-H1基因转染后PKC-θ从胞浆、核周转位到细胞核内表达。nm23-H1基因转染可导致PKC-θ的裂解活化,形成功能性的催化片段,而CalphostinC抑制转染诱导的PKC-θ裂解活化。nm23-H1基因转染后,Calphostin C预处理组和DMSO预处理组Tca8113的凋亡率、Caspase-3的活性增加,两组间有明显差异(P<0.05)。结论 nm23-H1诱导细胞凋亡过程中有PKC-θ的裂解活化,PKC-θ是nm23-H1诱导舌鳞癌Tca8113细胞株凋亡过程中的参与者,PKC-θ激活Caspase-3诱导细胞凋亡是nm23-H1基因诱导肿瘤细胞凋亡机制之一。

非小细胞肺癌淋巴结转移与nm23-H_1基因突变及mRNA表达异常关系研究

据《中华结核和呼吸杂志》1997年12月20卷第[6]期报道 中山医科大学王国丽等,为了解非小细胞肺癌（NSCLC）组织中nm23-H1基因的存在状况及其转录、表达水平,分析肺癌恶性转移与该基因异常的关系。

nm23H1、VEGF表达与前列腺癌转移和生存率的关系

目的研究前列腺癌nm23H1和VEGF的表达,探讨其与前列腺癌发生、转移和生存率的关系。方法用免疫组化法检测41例前列腺癌切除标本中癌组织和10例癌周组织nm23H1和VEGF表达;用CD31标记血管内皮细胞,计数肿瘤组织的微血管密度(MVD)。结合临床资料分析nm23H1、VEGF与TNM分期、病理分级、有无骨转移和术后生存率的相关性。结果前列腺癌组织中nm23H1和VEGF阳性表达率分别为70.7%(29/41)和68.3%(28/41),癌周组织中分别为10.0%(1/10)和30.0%(3/10),差异均有统计学意义(P<0.01)。前列腺癌MVD平均为75.1±12.9/mm2,癌周组织MVD平均为32.1±8.5/mm2(P<0.01)。nm23H1阳性表达者骨转移率低,阴性表达者骨转移率高,两组间差异有统计学意义(P<0.01)。VEGF阳性表达者骨转移率高,阴性表达者无骨转移,两组间差异有统计学意义(P<0.01)。nm23H1高表达时生存率高,低表达时生存率低;VEGF高表达时生存率低,低表达时生存率高。结论nm23H1基因可抑制前列腺癌发生和转移,提高前列腺癌患者的生存率。VEGF高表达可促进前列腺癌的血管和淋巴管形成,导致癌细胞转移,使患者生存率降低。