蒲金口服液对宫内感染/炎症致早产脑损伤大鼠脑组织OL、OPC细胞凋亡和Nogo-A、OMgp表达的影响

目的探讨蒲金口服液对宫内感染/炎症致早产脑损伤大鼠神经保护作用的机制。方法将80只胎龄<22 d的早产仔鼠随机分为8组(每组10只):早期药物干预组(蒲金口服液高剂量组、蒲金口服液低剂量组、银杏叶提取物组、模型组)和晚期药物干预组。生后21 d龄进行神经行为学检测,并采用qRT-PCR和Western blot方法检测勿动蛋白-A(Nogo-A)和少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白(OMgp)的表达,TUNEL法和A2B5、CNPase双标免疫荧光染色法检测少突胶质细胞(OL)、前体细胞(OPC)凋亡情况。结果LPS组早产仔鼠脑组织Nogo-A和OMgpmRNA和蛋白的表达均明显高于正常对照组(P<0.05),蒲金口服液高剂量、低剂量和银杏叶提取物干预组大鼠的神经行为学评分均优于模型组(P<0.05),且早期干预组高于晚期干预组(P<0.05)。蒲金口服液高剂量、低剂量和银杏叶提取物均能降低早产脑损伤大鼠脑组织Nogo-A、OMgp mRNA和蛋白的表达,减少OL和OPC的凋亡(P<0.05),其中蒲金口服液高剂量早期干预效果更显著(P<0.05)。结论蒲金口服液可以改善早产脑损伤大鼠的神经行为学表现,减少脑组织Nogo-A、OMgp的表达和OL、OPC的凋亡,具有神经保护的作用。

Nogo-A蛋白及调控轴突再生作用研究进展

中枢神经系统损伤产生的抑制性微环境是神经再生困难的重要原因,其中Nogo-A蛋白是抑制轴突再生的关键因子,其结构域以片段形式通过不同途径释放到细胞外,与受体NgR1、PirB、S1PR2或HSPG相结合,激活多种信号通路调控细胞凋亡、运动以及细胞骨架蛋白聚合,引起细胞骨架解聚、生长锥塌陷,抑制神经元轴突生长。本文对Nogo-A蛋白的结构、受体和抑制轴突再生作用机制的研究进展进行综述。

Nogo-A在神经系统疾病中的研究进展

神经生长抑制因子A(neurite outgrowth inhibitor A,Nogo-A)在哺乳动物中是一种能够抑制轴突生长的蛋白质。研究发现Nogo-A在神经系统中对轴突生长和突触可塑性起到调节作用,并与阿尔兹海默症、肌萎缩性侧索硬化症、多发性硬化症、脊髓损伤等密切相关。本文综述了Nogo-A及其受体NgR的基本结构、功能以及在神经系统疾病等方面的研究进展。

电针对单眼剥夺大鼠外侧膝状体Nogo-A/NgR表达的影响

目的 探讨电针对单眼剥夺大鼠外侧膝状体Nogo-A和NgR蛋白表达的影响。方法 从40只SPF级新生SD大鼠中随机选取28只,于出生14d行右眼睑缝合方法建立单眼剥夺模型,其中造模成功的24只随机分为剥夺组和电针组。电针组在左、右两侧“攒竹”、“风池”实施电针治疗。P-VEP检测各组大鼠P-VEP的P100波振幅及潜时值差异;HE染色观察LGN中神经元的病理学形态改变;免疫组化和Western blot方法检测LGN中Nogo-A和NgR蛋白的表达水平。结果 与正常组比较,剥夺组细胞固缩;缝合眼P100波振幅显著降低、潜时值显著升高、LGN中的Nogo-A和NgR平均阳性细胞数增多、平均灰度值降低、相对表达量增加(P<0.01)。电针组与剥夺组比较,细胞形态明显改善;缝合眼P100波振幅显著升高(P<0.05),潜时值显著降低(P<0.01);LGN中Nogo-A和NgR蛋白的平均阳性细胞数减少、平均灰度值增加(P<0.05),相对表达量降低(P<0.01)。结论 电针可改善单眼剥夺后LGN中损伤的神经元细胞形态,其机制可能与抑制Nogo-A及NgR蛋白的过表达相关。

低雌激素状态下大鼠海马及纹状体Nogo-A的表达变化

目的通过实验观察低雌激素状态下大鼠记忆功能的改变以及海马和纹状体Nogo-A的表达变化,阐明Nogo-A在更年期神经退行性变如记忆功能减退中可能发挥的重要作用。方法45只雌性SD大鼠分为假手术组,去卵巢组和去卵巢后雌激素治疗组,每组15只。去卵巢手术后2周开始给予药物治疗。雌激素治疗组于腹股沟皮下注射溶于无菌芝麻油的雌激素[25μg/(kg·d)]。假手术组和去卵巢组给予等量的无菌芝麻油。药物治疗6周后,通过条件恐惧训练实验观察不同组大鼠记忆功能差异,通过免疫组织化学和免疫印迹法观察Nogo-A在3组大鼠海马和纹状体的表达变化。结果与假手术组和雌激素治疗组相比,去卵巢组大鼠出现记忆功能明显减退,其海马和纹状体Nogo-A阳性神经元数量显著增加(P<0.05)。雌激素治疗组大鼠记忆功能明显改善,海马和纹状体Nogo-A阳性神经元数量显著减少(P<0.05),与假手术组差异不明显(P>0.05)。免疫印迹实验结果与上述免疫组织化学结果变化趋势一致。结论低雌激素状态下海马及纹状体Nogo-A表达上调,这可能是更年期妇女记忆功能减退的重要原因之一。

lncRNA Miat通过miR-182/Nogo-A调控氧化应激所致心肌细胞凋亡的机制

目的 探究lncRNA Miat/miR-182/Nogo-A轴在心肌细胞因氧化应激发生凋亡或损伤过程中的调控机制。方法 运用H_(2)O_(2)处理模拟心肌细胞氧化应激损伤,CCK-8实验检测细胞活力;si-Miat与miR-182共转染、miR-182 mimic与上调Nogo-A共转染;qRT-PCR检测Miat、miR-182、Nogo-A mRNA的表达;Western blot检测Bax、Caspase-3、BCL-2、Nogo-A的表达;Hoechst凋亡染色检测凋亡率;生物预测软件RNAhybrid预测Miat与miR-182可能存在靶向结合关系,生物信息网站Targescan预测miR-182与Nogo-A之间的结合关系。结果 lncRNA Miat在H_(2)O_(2)处理后表达升高;抑制lncRNA Miat可减轻H_(2)O_(2)处理导致的细胞凋亡;生物预测软件RNAhybrid预测Miat与miR-182存在靶向结合位点;下调lncRNA Miat可以减轻下调miR-182在氧化应激过程中对心肌细胞凋亡的抑制作用;生物预测软件RNAhybrid预测Miat与miR-182存在靶向结合位点;上调miR-182可使Nogo-A表达下降进而抑制氧化应激导致的心肌细胞凋亡;上调miR-182可以减轻上调Nogo-A在氧化应激过程中对心肌细胞凋亡的促进作用。结论 lncRNA Miat可以通过miR-182/Nogo-A轴促进心肌细胞氧化应激所致的凋亡。Miat可作为氧化应激过程中心肌细胞凋亡或损伤的标志物。

血清CCCK-18、CXCL12、Nogo-A水平与急性脑出血患者NIHSS评分的相关性

目的 探讨血清gaspase切割的细胞角蛋白18(CCCK-18)、CXC趋化因子配体12(CXCL12)、轴突生长抑制因子A(Nogo-A)水平变化与急性脑出血(ACH)患者美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的相关性及动态监测指导意义。方法 选取2020-09—2022-09新乡市中心医院收治的95例ACH患者,根据入院时的NIHSS评分将患者分为轻度组(31例,0~7分)、中度组(36例,7~15分)、重度组(28例,>15分)。比较3组治疗前血清CCCK-18、CXCL12、Nogo-A水平,并分析其与NIHSS评分的相关性,比较不同预后患者(治疗前、治疗2周后、治疗4周后)血清各指标水平,偏回归分析ACH患者预后不良的影响因素,ROC分析(治疗2周后、治疗4周后)血清各指标水平联合检测对ACH患者预后的预测价值。结果 治疗前3组血清CCCK-18、CXCL12、Nogo-A水平比较:轻度组<中度组<重度组,且各指标水平与NIHSS评分均呈正相关(P<0.05);治疗2周后、治疗4周后预后不良患者血清CCCK-18、CXCL12、Nogo-A水平高于预后良好患者(P<0.05)。Logistic回归分析显示,治疗2周后、治疗4周后血清CCCK-18、CXCL12、Nogo-A水平是ACH患者预后不良的危险因素;ROC分析结果显示,治疗2周后、治疗4周后血清CCCK-18、CXCL12、Nogo-A水平联合预测ACH患者预后不良的AUC分别为0.732、0.815。结论 血清CCCK-18、CXCL12、Nogo-A水平变化与ACH患者NIHSS评分均呈正相关,联合检测对不同预后有较高的预测价值,可作为临床判断病情严重程度、评估预后的有效指标之一。

脑缺血预处理对大鼠脑内Nogo-AmRNA、Nogo-A及NgR蛋白表达的影响

目的探讨脑缺血预处理(ischemic preconditioning,IP)对成年大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时Nogo-AmRNA、Nogo-A及NgR蛋白表达的影响。方法雄性SD大鼠152只,随机分为3组:假手术组(8只),非缺血预处理(non-ischemic preconditioning,NIP)组(72只)和脑缺血预处理组(72只),后2组又随机分为1、3、7d三个亚组,每个亚组24只。线栓法建立大脑中动脉栓塞模型,10min作为IP,分别在IP后的1、3、7d进行再次缺血2h再灌注1d,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定脑梗死体积,采用RT-PCR方法检测大鼠缺血侧皮质Nogo-A mRNA的表达,采用免疫组化染色检测大鼠缺血侧皮质Nogo-A及NgR蛋白的表达。结果与NIP组相应亚组比较,IP组1、3、7d亚组神经功能缺损评分显著降低,脑梗死体积显著减少,Nogo-A mRNA、Nogo-A及NgR蛋白的表达均显著下调(P<0.05);IP组在3d脑梗死体积、Nogo-A mRNA、Nogo-A及NgR蛋白的表达较同组内两亚组差异有统计学意义(P<0.05),而1d和7d两个亚组差别无统计学意义(P>0.05)。结论脑缺血预处理诱导的Nogo-A及NgR表达下调可能在脑缺血耐受中发挥重要作用。

神经元Nogo-A的表达与其髓鞘化关系的研究

目的探讨神经元表达Nogo鄄A蛋白的情况,对Nogo鄄A的功能作初步了解。方法采用免疫组织化学方法,观察神经元表达Nogo鄄A的情况,并设置对照组。结果成年大鼠脊髓内神经元和背根神经节的大﹑中﹑小细胞中都出现Nogo鄄A阳性免疫反应,在胞浆和胞核中表达。结论大鼠神经组织中神经元都可能有Nogo鄄A的表达,表明神经元表达Nogo鄄A与该神经元轴突的髓鞘化没有联系,提示神经元中的Nogo鄄A的功能可能不参与髓鞘形成。

Nogo-A在成年大鼠脑内神经元的分布

目的研究Nogo_A阳性神经元在正常成年大鼠脑内的分布。方法免疫组织化学方法(ABC法)。结果Nogo_A在正常大鼠脑内的神经元和纤维有广泛的表达,出现在许多核团,主要在1.前脑的大脑皮质、嗅觉系统、海马、隔区、基底神经节、丘脑、下丘脑和视前区等部位;2.脑干的视听觉、体躯感觉、内脏觉核团、运动核团以及网状结构等;3.小脑Purkinje细胞和深核。阳性反应物主要见于神经元的胞浆和突起内,在脑室系统的嗅球室管膜、侧脑室和第三脑室部分室管膜细胞及其突起内也有表达。结论Nogo-A在脑内神经元的广泛存在提示其在正常状态下的脑功能中可能起重要作用。

电针对脑缺血再灌注大鼠学习记忆功能及海马组织Nogo-A/NgR表达的影响

目的:观察电针对脑缺血再灌注大鼠学习记忆功能及海马组织Nogo-A/Ng R表达的影响,探讨电针治疗脑卒中后认知功能障碍的作用机制。方法:将45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组均15只。模型组和电针组参照Longa线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。电针组针刺"百会穴"和"神庭穴",共干预7天;假手术组和模型组在同等条件下饲养和抓取。利用Morris水迷宫实验评估大鼠的学习记忆功能;TTC染色法观察脑梗死体积;免疫印迹法检测脑梗死侧海马组织Nogo-A及其受体Ng R的表达。结果:与模型组相比,电针组大鼠逃避潜伏期和找到平台所经过的路程缩短,跨越平台次数增加(P<0.05);电针组大鼠脑梗死体积减小(P<0.05);电针组大鼠海马区Nogo-A及其受体Ng R的表达量降低(P<0.05)。结论:电针可改善脑缺血再灌注大鼠的学习记忆功能,其作用机制可能与抑制脑梗死侧海马组织中Nogo-A及其受体Ng R的表达有关。

电针对脑缺血再灌注大鼠脑皮层超微结构及Nogo-A表达的影响

目的探讨电针对脑缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)大鼠不同时间点皮层超微结构及轴突再生抑制因子Nogo-A表达的影响。方法 130只雄性SD大鼠随机数字表法分为电针组(30只)、假穴位组(30只)、模型组(30只)、假手术组(30只)和空白组(10只)。电针、假穴位、模型3组采用改良的ZeaLonga法制备左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。电针组术后选取督脉"大椎"、"百会"穴每天给予电针治疗。假穴位组术后选取督脉"大椎"、"百会"穴旁开1寸处给予电针治疗。模型组仅作MCAO缺血再灌注模型处理,假手术组仅做手术创伤,空白组不作任何处理。运用免疫组织化学染色法及透射电镜技术观察电针对IR后1、7、28d各组大鼠脑皮层缺血区细胞超微结构及Nogo-A表达的干预作用。结果电针组脑皮层缺血区神经元、胶质细胞及血脑屏障等超微结构的损伤均较假穴位组、模型组减轻。电针组大鼠脑缺血再灌注后第1、7、28d脑皮层缺血区Nogo-A的表达均低于同期假穴位组及模型组,差异有统计学意义(P<0.05),但假穴位组与模型组同期比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,可能与其减轻脑细胞超微结构的损害、下调中枢神经轴突再生抑制因子Nogo-A的表达等机制密切相关。

运动训练对脊髓损伤大鼠Nogo-A、NgR mRNA表达的影响

目的:探讨运动训练对脊髓损伤(SCI)大鼠髓鞘源性神经抑制因子(Nogo-A)及其受体(NgR)mRNA表达的影响。方法:44只SD大鼠随机分为运动训练组16只、损伤组16只及假手术组12只,采用改良Allens打击法制作大鼠T10脊髓损伤模型。造模后每周应用BBB评分法观察大鼠后肢运动功能,在第8、10、14天处死大鼠,每组4只,以荧光定量PCR法测定不同时间点脊髓组织中Nogo-A与NgR mRNA相对含量。结果:手术后第4—8周,运动训练组大鼠BBB评分明显高于SCI组;运动训练组与SCI组Nogo-A与NgR mRNA表达明显高于假手术组(P<0.05),随着时间推移,运动训练组与SCI组Nogo-A与NgR mRNA表达量趋于下降。术后第8、10天,SCI组Nogo-A mRNA表达均显著高于运动训练组与假手术组(P<0.05),至第14天,运动训练组与SCI组表达差异无显著性意义(P>0.05),但均高于假手术组(P<0.05),假手术组在各时间点表达差异均无显著性意义(P>0.05);SCI组在各时间点NgR mRNA表达均高于运动训练组与假手术组(P<0.05),运动训练组在第10天便下降至与假手术组差异无显著性意义(P>0.05),假手术组在各时间点表达无差异(P>0.05)。结论:康复训练能减少Nogo-A、NgR mRNA的表达,促进脊髓损伤大鼠后肢功能的恢复。

川芎赤芍对急性脑梗死大鼠Nogo-A/NgR/RhoA/ROCK mRNA水平的影响

目的:检测川芎赤芍对急性脑梗死大鼠Nogo-A/NgR/RhoA/ROCK mRNA相对表达量的影响。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、空白组、川赤低剂量组、川赤中剂量组、川赤高剂量组、银杏叶组、尼莫地平组,各组又分为3天、7天、14天3个时间点,实时定量PCR方法检测急性脑梗死大鼠Nogo-A/NgR/RhoA/ROCK m RNA相对表达量变化。结果:同空白组和假手术组相比,模型组在3天、7天、14天3个时间点Nogo-A/NgR/RhoA/ROCK mRNA相对表达量均增高(P <0.05);川芎赤芍处理后,除7天川赤低剂量组与模型组差异不明显,川赤组Nogo-A/NgR/RhoA/ROCK mRNA在各个时间点的相对表达量较模型组均降低(P <0.05)。结论:川芎赤芍可降低急性脑梗死大鼠Nogo-A/NgR/RhoA/ROCK mRNA相对表达量。

骨髓间充质干细胞移植对急性脊髓损伤大鼠神经功能恢复及Nogo-A表达的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)静脉注射移植对急性脊髓损伤(SCI)大鼠神经功能恢复及Nogo-A表达的影响。方法:采用全贴壁法分离培养大鼠BMSCs,雌性SD大鼠96只,随机分成4组,假手术组(sham组)、损伤对照组(SCI组)、溶剂对照组(vehicle组)和BMSCs治疗组(BMSCs组),24只/组。采用改良Allen法制作大鼠急性SCI模型,BMSCs移植前用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记,BMSCs组于造模成功10min后自大鼠尾静脉注射BMSCs悬液1ml(5×106个BMSCs);vehicle组则注射1ml0.01m的磷酸盐缓冲液(PBS)。术后第1天、第3天、第7天和第14天通过进行BBB神经行为学评分对神经功能进行评估,观察其恢复状况,免疫组化及RT-PCR法检测Nogo-A表达。结果:BMSCs组损伤周边区脊髓组织中观察到CFSE染色的阳性细胞;BMSCs组术后第7天和第14天神经功能评估明显优于SCI组、vehicle组;BMSCs组术后第3天、第7天和第14天脊髓损伤区周边组织中Nogo-A表达较SCI组和Vehicle组明显降低(P<0.01)。结论:BMSCs移植可以通过下调SCI中Nogo-A的生成来促进脊髓损伤后大鼠神经功能的恢复。

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经生长相关蛋白-43和Nogo-A表达的影响

目的探讨电针对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠神经功能恢复和脑组织神经生长相关蛋白-43(GAP-43)、Nogo-A表达的影响。方法 48只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠分为假手术组、模型组和电针组,每组16只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。电针组于造模成功90 min后电针刺双侧内关、水沟、三阴交和百会30 min,每天1次。假手术组和模型组不进行任何干预治疗。各组大鼠在造模后7 d、14 d各取8只进行神经功能评估及免疫组化SP法观察脑组织GAP-43、Nogo-A的表达。结果假手术组大鼠无神经功能缺损症状;7 d时,模型组和电针组神经功能评分无显著性差异(P>0.05),14 d时,电针组神经功能优于模型组(P<0.05)。假手术组各时间点未见GAP-43阳性细胞表达。7 d时,模型组缺血灶周围脑组织出现GAP-43阳性细胞,14 d时减少;电针组GAP-43阳性细胞各时间点较模型组明显增加(P<0.01)。假手术组仅见少量Nogo-A表达,模型组脑缺血区7 d、14 d时Nogo-A表达明显增多(P<0.01),电针组Nogo-A表达在各时间点较模型组明显减少(P<0.01)。结论电针能通过促进局灶性脑梗死大鼠脑组织内GAP-43表达、抑制Nogo-A表达,改善大鼠的神经功能。

督脉电针结合游泳训练对大鼠全横断脊髓损伤后GAP-43和Nogo-A表达的影响

目的:通过检测大鼠脊髓损伤后运动功能恢复情况和神经生长相关蛋白-43(GAP-43)、神经轴突生长抑制剂-A(Nogo-A)的表达来探讨督脉电针结合游泳训练干预脊髓损伤的作用机制。方法:选用雌性SD大鼠180只,随机分为正常组、假手术组、模型组、游泳训练组、督脉电针组(督电组)、督脉电针结合游泳训练组(联合组)。用外科手术尖形刀片横切断暴露脊髓的方法致大鼠T9-T10段脊髓全横断模型。术后各时间点对各组大鼠进行BBB评分;免疫组化检测各时间点损伤段脊髓GAP-43和Nogo-A的表达;Western blot检测各时间点损伤段脊髓Nogo-A的表达。结果:与模型组相比,联合组和督电组BBB评分显著增加,联合组在术后第14、21、28、35天较督电组BBB评分显著增加,具有显著性差异(P<0.05)。与模型组相比,督电组和联合组GAP-43的表达显著增加,Nogo-A的表达显著减少,具有显著性差异(P<0.05),联合组在术后第14、21、28、35天较电针组GAP-43的表达显著增加,Nogo-A的表达显著减少,具有显著性差异(P<0.05)。结论:(1)督脉电针和游泳训练都能通过促进脊髓损伤大鼠GAP-43的表达和抑制Nogo-A的表达来促进神经的修复。(2)联合治疗对大鼠运动功能的恢复更为有效。

Nogo-A对突触可塑性的调节及相关神经疾病

轴突损伤往往导致成年哺乳动物中枢神经系统永久性缺损。作为轴突生长抑制剂,Nogo-A及其受体在中枢神经系统成熟神经元中参与对突触可塑性的调节作用,并与脊髓损伤、多发性硬化症、阿尔茨海默病及创伤后应激障碍等的发病有关。

针康法对脑缺血大鼠运动功能及GAP-43、Nogo-A表达的影响

目的:探讨针康法对脑缺血大鼠运动功能及缺血区皮质GAP-43、Nogo-A表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为5组,即针康组、针刺组、康复组、模型组和假手术组,按3天、7天、14天再分为3个亚组,每组6只。制备永久性脑缺血动物模型。针康组进行针康法干预;针刺组进行头穴丛刺治疗;康复组进行康复训练,假手术组与模型组不做任何干预。采用网屏试验评价各实验组大鼠的运动功能,免疫组化检测各实验组大鼠缺血区皮层GAP-43、Nogo-A的表达。结果:术后7天和14天,与康复组、针刺组比较,针康组网屏实验评分降低,差异有统计学意义(P<0.05);术后7天和14天,针康组缺血区皮层GAP-43阳性细胞表达高于模型组、康复组、针刺组(P<0.05);术后14天,针康组缺血区皮层Nogo-A阳性细胞表达降低,与模型组、康复组、针刺组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:针康法能促进脑缺血大鼠运动功能的恢复,其机制可能与其促进脑缺血区皮层GAP-43及降低Nogo-A的表达有关。

钙离子参与Nogo-A抑制轴突生长的作用

目的探索胞内钙离子在Nogo-A抑制轴突生长中的作用,以进一步了解Nogo-A抑制轴突生长的信号转导机制。方法利用激光共聚焦显微镜技术,检测Nogo-A作用于小脑颗粒细胞后不同时段胞内钙离子的浓度,并观察加入钙通道阻滞剂———尼莫地平对Nogo-A抑制轴突生长的影响。结果小脑颗粒细胞内钙离子浓度升高发生于加入Nogo-A后5 min,30 min时达到最高,然后逐渐下降,2 h后恢复至正常水平;加入尼莫地平组的轴突生长与对照组相比有显著差异。结论钙离子可能参与了Nogo-A抑制轴突生长的信号转导。