Inhibition of Cytochrome P450 by Nomilin and Obacunone and Potential Mechanism in Human Liver Microsomes

Objective Nomilin and obacunone are two important limonoids that are well known for their anticancer effect. Previous studies showed that limonoids had inhibitory effect on cytochrome P450 3A4（CYP3A4）. However these effects are inconclusive with regards to prediction of potential drug interactions. Methods Nomilin or obacunone was pre-incubated with HLMs for 30 min. Following 10-fold dilution from the pre-incubation concentration, a second incubation was performed in the presence of NADPH and cytochrome P450 substrates for 15 min. The reaction was quenched and the supernatants were analyzed by chromatography/mass spectrometry. Results In this study, nomilin and obacunone showed potent inhibitory effect on CYP3A4 with the IC_（50） values of 3.50 and 6.08 μmol/L, respectively. The inhibition of CYP3A4 was in a time-, concentration-and NADPH-dependent manner with Ki values of 2.92 and 1.25 μmol/L and Kinact values of 0.033 and 0.078 min^（-1） for nomilin and obacunone respectively. These results elucidated that they were time-dependent inhibitors for CYP3A4. Conclusion Concomitant use of limonoids and other drugs may call for extra caution for purposes of clinical safety.

高效液相色谱法测定柑橘中的柠檬苦素类似物

建立了同时测定柑橘中柠檬苦素和诺米林2种苷元的高效液相色谱方法。色谱柱为Phenomenex C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为体积分数45%乙腈,流速为1.0mL/min,柱温为25℃,检测波长在210nm。经考察该方法可行性强,柠檬苦素和诺米林的平均回收率分别99.91%和98.28%,RSD分别为2.55%和2.30%。因此用该法测定了柑橘中的柠檬苦素和诺米林的含量,并取得了理想的结果。

不同橘核炮制品中柠檬苦素和诺米林的测定

目的考察橘核生品及3种炮制品(橘核麸炒,清炒,盐炙)中柠檬苦素、诺米林的量,探讨炮制对中药橘核成分的影响。方法取橘核生品及3种炮制品,采用冷凝回流的方法提取试样,以HPLC法测定其中的柠檬苦素、诺米林。色谱柱为Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(65∶35),检测波长210 nm,体积流量1.0 mL/min,柱温室温。结果柠檬苦素在0.049 4～0.494 0 mg/mL,诺米林在0.051 1～1.022 0 mg/mL范围内线性关系良好(R2=0.999 3,R2=0.997 4),平均回收率分别为99.92%和100.10%,RSD值分别为1.27%和1.18%;橘核经炮制后两种有效成分有一定差异。结论所建立的HPLC测定方法准确、可靠,为橘核质量评价和标准制定提供了一定的科学依据。

琯溪蜜柚中主要苦味物的丙酮提取工艺研究

目的:探讨琯溪蜜柚中主要苦味物(柚皮苷、柠碱和诺米林)的丙酮提取最佳工艺条件。方法:考察果实不同组织作提取原料、原料脱脂与否、脱脂溶剂的选择对提取率的影响,并运用正交试验考察丙酮用量(体积/质量)、提取时间、提取温度和pH值对提取率的影响。结果:琯溪蜜柚中主要苦味物提取的最佳工艺条件为20倍原料重的丙酮、40℃、pH7．0条件下水浴浸提15h。结论:采用本实验所确定的提取方法可将蜜柚中的三种主要苦味物同时提取出来。

不同甜橙品种果汁中柠檬苦素含量的变化

为了减少柠檬苦素对橙汁品质的影响,为橙汁加工的原料品种和加工时间选择提供参考,对20个甜橙品种的鲜榨果汁与巴氏灭菌果汁,在7个不同成熟期,采用高效液相色谱法检测了柠檬苦素和诺米林含量。结果表明:各成熟阶段的所有测试甜橙品种的鲜榨果汁与巴氏灭菌果汁均能检测到柠檬苦素,巴氏灭菌果汁中柠檬苦素含量更高,平均是鲜汁的约2倍;随着果实的成熟,柠檬苦素含量总体逐步降低,到11月中旬时,试验甜橙品种的鲜榨果汁与巴氏灭菌果汁的柠檬苦素含量已低于人的苦味阈值,适于橙汁加工;不同甜橙品种甚至不同脐橙品种之间,柠檬苦素的含量存在明显差异;诺米林含量与柠檬苦素含量呈现类似变化,但含量更低,不是导致橙汁苦味的主要因素。此外,短期的冷冻贮藏对柠檬苦素的含量影响不大。

超临界二氧化碳萃取橘核中诺米林的工艺研究

采用响应曲面法优化超临界CO2萃取橘核中诺米林的工艺条件,考察萃取压力、萃取温度、夹带剂用量对诺米林萃取量的影响。结果表明诺米林的优化萃取条件为萃取压力25MPa、萃取温度51℃、夹带剂用量1.5mL/g,在此条件下诺米林萃取量为(6.27±0.06)mg/g。

柑橘果实中柠檬苦素及类似物功能活性研究进展

柠檬苦素类似物是一类三萜系化合物,包括柠檬苦素、诺米林、奥巴叩酮等物质。主要存在于柑橘类果实的核、内果皮和囊衣等部位,尤其在种子中含量丰富。本文介绍柠檬苦素及类似物的化学结构,综述其抗肿瘤、抗氧化及防治植物病虫等功能活性的研究进展,展望在医疗、食品及农作物病虫害防治方面的应用前景,并提出今后的研究方向。

柑橘不同用药部位中橙皮苷、柠檬苦素及诺米林含量与其体外抗氧化和抗乳腺癌活性相关性研究

目的考察柑橘不同用药部位——橘核、橘络和陈皮中橙皮苷、柠檬苦素及诺米林的含量与其抗氧化和抗乳腺癌活性的相关性。方法通过HPLC法检测来自不同产地的橘核、橘络和陈皮药材中橙皮苷、柠檬苦素及诺米林的含量,结合体外DPPH和FRAP抗氧化实验方法以及MTT法研究3种成分的含量差异对药材抗氧化活性和抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖作用的影响。结果橙皮苷含量:陈皮>橘络>橘核;柠檬苦素类物质含量:橘核>橘络>陈皮;体外抗氧化活性:陈皮>橘络>橘核;抑制乳腺癌细胞增殖作用:橘核>橘络>陈皮。结论橘核、橘络和陈皮的抗氧化活性强弱主要与橙皮苷含量相关,而三者的抗乳腺癌活性强弱主要与其柠檬苦素和诺米林含量相关。

甜橙种子中柠檬苦素类化合物的提取

从甜橙种子中提取纯化了的 2种柠檬苦素类化合物 ,经熔点、红外光谱。

多指标正交试验法优选橘核的盐制工艺

目的采用多指标正交试验法优选盐制橘核炮制工艺的技术参数。方法以醇溶性浸出物和柠檬苦素、诺米林的量为评价指标,对炮制温度、闷润时间进行考察,采用正交试验综合评分法优选工艺。结果选择的流动相为乙腈-水(62∶38)时,基线较稳定,峰形较好。炮制温度对试验结果有显著影响,闷润时间无明显影响。结论优选的盐制工艺为取净橘核,加入食盐水(水与盐的比例10∶1)拌匀,闷润30 min,在100℃下炒至微黄色(2 kg盐/100kg橘核)。

采收期、贮藏时间及加工单元操作对赣南脐橙汁苦味物质含量的影响

探讨赣南脐橙采收期、贮藏时间及加工单元操作对橙汁苦味物质(柠檬苦素、诺米林)含量的影响,为降低橙汁苦味提供参考。测定不同采收期与贮藏时间及不同加工单元操作下的橙汁中的苦味物质含量,重点研究橙汁热处理过程中苦味物质的变化并进行动力学模型拟合。结果表明,随着采收期的延长,橙汁中柠檬苦素与诺米林的含量逐渐降低,但在贮藏期间,橙汁中的柠檬苦素与诺米林含量先升高后降低;破碎汁中柠檬苦素与诺米林含量均高于挤压汁,酶解工艺后破碎汁和挤压汁中柠檬苦素含量均大幅升高,而诺米林未被检出;热处理温度越高、pH值越低,橙汁中苦味物质含量越高,当pH值>6.0时,柠檬苦素和诺米林均未在橙汁中检出,同时可用联合反应模型拟合热处理过程中橙汁柠檬苦素和诺米林含量变化。脐橙采收期与贮藏期和加工单元操作特别是热处理条件均对橙汁苦味物质的含量影响较大,后续可通过延迟采收期与贮藏时间、优化取汁方法及控制热处理参数等措施降低橙汁的苦味物质含量。

高效液相色谱法同时测定柠檬中柠檬苦素和诺米林含量

目的建立高效液相色谱法同时测定柠檬中柠檬苦素和诺米林含量。方法样品经乙酸乙酯超声波辅助提取,高速离心机分离得到提取液,提取液经无水硫酸钠脱水处理,旋转蒸収仪减压浓缩、定容后待测。使用Shiseido CAPCELL PAK MGⅡC_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm),以乙腈-0.10%磷酸水溶液(45:55,V:V)为流动相;流速:0.70 m L/min;进样量:10μL;检测波长:215 nm。结果柠檬苦素和诺米林在0.50~1000.0 mg/L质量浓度范围内呈良好线性兲系,线性相兲系数r≥0.9993,检出限为0.25、0.34 mg/L,定量限为0.70、0.95 mg/L。3个添加水平(100.0、200.0和500.0 mg/kg)下的加标回收率为82.60%~108.7%,相对标准偏差为3.56%~5.22%。结论该方法具有操作简单,重复性和稳定性好等优点,可准确测定柠檬汁和柠檬皮中诺米林和柠檬苦素的含量。

椪柑酒的树脂脱苦工艺优化研究

目的研究树脂对椪柑酒的脱苦效果。方法以椪柑酒为研究对象,采用单因素试验和正交优化试验研究X16树脂添加量、作用温度、作用时间以及转速对椪柑酒中柠檬苦素、诺米林及维生素C含量的影响。结果 X16树脂对苦味物质的脱除有显著影响。椪柑酒脱苦优化后的最佳工艺条件为:添加4%树脂,作用温度25℃,作用时间25 min,转速100 r/min,柠檬苦素和诺米林脱除率分别为49.54%、33.69%,维生素C的损失率为25.12%。结论树脂对椪柑酒的脱苦效果明显,营养成分存在一定损失,在实际生产应用中,可加入适量糖来降低其损失或添加维生素C补充剂增强营养功能。

沙田柚种子化学成分的研究

从沙田柚种子中分离出一种柠檬苦素类似物，其结构经元素分析，ＭＳ，ＩＲ，￣１ＨＮＭＲ和￣（１３）ＣＮＭＲ确定为ｎｏｍｉｌｉｎ。

响应面分析法优化超临界二氧化碳萃取橘皮中类柠檬苦素工艺

研究利用超临界二氧化碳萃取橘皮中类柠檬苦素工艺,考察萃取时间、萃取温度、萃取压力和夹带剂用量对类柠檬苦素提取量的影响,采用响应面试验设计,以类柠檬苦素提取量为响应值进行考察。结果表明:4个因素对类柠檬苦素提取量的影响大小次序为时间>萃取压力>萃取温度>夹带剂用量;通过对模型进行分析,得出提取类柠檬苦素的最佳工艺条件为萃取时间2h、萃取温度50℃、萃取压力30MPa、夹带剂用量1.51mL/g,在此条件下,类柠檬苦素的提取量为54.26mg/kg,而实际提取量为53.87mg/kg,回归方程的预测值和试验值无显著性差异。所得回归模型拟合情况良好,能很好地反应实际情况。

柑橘种子类柠檬苦素的分析及质谱裂解途径——基于UPLC-Q-TOF-MS的新方法

柑橘种子富含类柠檬苦素化合物,该类物质表现出多种生物活性.基于UPLC-Q-TOF-MS技术,优化出一种新的柑橘中类柠檬苦素化合物的定性定量检测方法.考察了流动相及流速、进样量、色谱柱温等条件的影响,优化得到分析方法.流动相为0.01%甲酸+H2O(A)以及乙腈(B),在洗脱程序为O^4.0min,35%~55%B;4.0~5.0min,55%~35%B,进样量1.0μL,流速0.4mL/min,柱温40℃的条件下,7种柑橘种子中诺米林、奥巴叩酮和柠檬苦素在5min内得到最佳分离.通过与标准品的保留时间和质谱碎片比较,样品中诺米林、奥巴叩酮和柠檬苦素得到鉴定;研究了3种类柠檬苦素的MS/MS质谱裂解规律,并首次得出了诺米林的质谱裂解途径.此外,通过UPLC-PDA检测器,测定了7种柑橘种子中3种类柠檬苦素的质量比.结果显示,类柠檬苦素是一类很好的分类学标记物.

湘西椪柑加工制汁适应性研究

对湘西椪柑加工制汁适应性进行了初步研究,结果表明,相对于贮藏前的湘西椪柑而言,贮藏后的更适于加工制汁;椪柑不同部位的苦味物质含量不同,依次为种子>果皮>囊瓣>果汁;在加热时间为20min的条件下,加热温度为60℃时,手榨果汁中苦味物质含量达到最大值;手榨果汁在加热温度为60℃的条件下,加热时间为15min时柠檬苦素含量最高,时间为20min时诺米林含量最高。

诺米林研究进展

诺米林是一类重要的天然有机化合物.主要研究报道了诺米林2种制备方法:植物萃取法、化学合成法,并综述报道了诺米林在医学、食品科学等方面的最新应用研究进展.

11个产地纽荷尔脐橙果实风味物质含量差异

2011年、2012年从11个脐橙产地收集到22份纽荷尔脐橙果实样品,采用气相色谱法对果实汁胞中的可溶性糖和有机酸进行检测,并采用高效液相色谱法检测2012年果实中的主要苦味物质。结果表明：（1）果实中的可溶性糖主要为果糖、葡萄糖和蔗糖,其中蔗糖含量最高（占可溶性总糖含量的51.01%~60.19%）,肌醇含量最低;丹江口、桂林和衢州等不同产地的果实中可溶性糖含量在不同年份间有显著差异;（2）果实中的有机酸主要是苹果酸、柠檬酸和奎宁酸,其中柠檬酸含量最高（占总酸含量的73.74%~90.04%）,奎宁酸含量最低;丹江口等产地的果实中有机酸含量在不同年份间有显著差异;（3）果实中的主要苦味物质为柠檬苦素和诺米林,吉首和雅安果实中的柠檬苦素含量（分别为670.0±293.2μg/g和652.1±217.0μg/g）显著高于其他产地;衢州果实中的诺米林含量最高（789.7±38.9μg/g）,并显著高于其他产地。对11个产地纽荷尔脐橙果实中的糖、酸与苦味物质进行偏相关分析,结果表明果实中各风味物质具有一定的相关性,其中果糖和葡萄糖、苹果酸和奎宁酸、诺米林和肌醇各含量之间均呈显著正相关,蔗糖与奎宁酸含量呈显著负相关。纽荷尔脐橙果实风味物质在不同产地间有一定差异,气候因素可能是造成成熟果实酸和苦味物质含量差异的主要原因。

HPLC法测定不同产地和品种柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林含量

该研究建立了同时测定檬苦素和诺米林含量的高效液相色谱法,并采用该方法对8种不同柠檬样品中柠檬苦素和诺米林含量进行了测定。色谱条件如下:安捷伦Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,柱温为30℃,波长为210 nm。结果表明:3个产地尤力克果皮中柠檬苦素含量依次为云南瑞丽(EUR_D)、四川安岳(EUR_C)和广东河源(EUR_Y),诺米林含量依次为EUR_D、EUR_C和EUR_Y;不同品种柠檬果皮中柠檬苦素含量依次为北京柠檬(M_NM)、粗柠檬(R_NM)、无核柠檬(S_NM)、热那亚(RNY)、里斯本(LSB),诺米林含量依次为S_NM、R_NM、LSB、RNY和M_NM。综上结果表明,不同产地和品种柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林含量均存在不同程度差异,该HPLC法可为不同产地和不同品种柠檬果实质量鉴别、资源评价及深度开发提供理论依据。