高通量测序技术在生殖遗传学检测中的应用

近年来,高通量测序技术因其效率高、成本低、特异性好等优势被广泛用于临床医学研究中,在无创产前检测、胚胎植入前遗传学诊断与筛查以及表观遗传学研究中DNA甲基化位点的检测等生殖遗传学领域发挥重要作用。概述目前主要测序平台的原理及特点,系统介绍其在生殖遗传学领域的应用,以期为高通量测序技术在精准医学研究中的广泛应用提供理论指导。

高通量测序技术在无创产前筛查中的临床应用及研究进展

介绍了母体外周血中胎儿游离DNA(cff DNA)及其发现后聚合酶链反应(PCR)技术在产前诊断中的应用。重点从测序技术、数据分析和解读、临床应用现状及质量控制几个方面介绍了新一代高通量测序技术在产前筛查中的研究进展和临床应用,并对高通量测序技术在产前筛查母体癌症检测中的应用作了简单介绍。

无创DNA检测技术在产前筛查中的临床应用

目的探讨无创DNA产前检查(NIPT)在胎儿染色体非整倍体疾病诊断中的临床应用价值及意义。方法对2015年3月到2016年12月在嘉兴市妇幼保健院产前诊断中心就诊的11 654例孕妇,进行外周血游离胎儿DNA检测。孕周介于12-26^(+6)w,指征包括血清学筛查临界风险的孕妇;部分血清学筛查高风险孕妇、高龄或其他原因强烈要求进行该项检测的孕妇。采集孕妇外周血10ml,分离血浆,利用新一代高通量测序分析,对高风险结果进行介入性产前诊断验证,所有病例进行电话随访。结果共检测11 654例,检出各类异常92例,37例21-三体,18例18-三体,3例13-三体,34例性染色体异常,共有84例进行了介入性产前诊断。37例21-三体阳性者中,33例与介入性诊断结果一致,2例假阳性结果,2例由于死胎未做进一步诊断。18例18-三体阳性者中,11例与介入性诊断结果一致,5例假阳性结果,2例死胎未做进一步诊断。3例13-三体阳性结果的孕妇,1例介入性诊断确诊为13-三体,另有2例为假阳性结果。34例性染色体异常者中,有29例进行了介入性产前诊断,14例确诊为性染色体异常,15例假阳性结果。结论无创DNA产前检测技术对21-三体检测有较高的敏感性和特异性,可大幅减少介入性产前诊断,为临床诊断唐氏综合征提供依据;其高准确性、无创伤性的优点将使其成为未来产前筛查的主要手段。

Short-DNA Specific Blocker PCR for Efficient and Simple Enrichment of Cell Free Fetal DNAs with Short Lengths

As an inn ate characteristic,DNA length has attracted more and more atte ntion.The length of some import ant biomarkers such as ctDNA(Circulating tumor DNA)and cffDNA(Cell free fetal DNA)is shorter than that of cell-free DNA.Researchers have utilized the differe nee in length to in crease the abunda nee of ctDNA or cffDNA in total cell-free DNA to overcome the difficulties in detecti on due to their low abundance.

无创DNA产前检测在诊断胎儿染色体非整倍体疾病中的应用

目的探讨新一代测序技术的无创DNA产前检测在诊断胎儿染色体非整倍体疾病中的应用价值。方法 2012年8月1日至2013年12月31日在辽宁省大连市妇幼保健院接受孕妇外周血中游离胎儿DNA检测者2548例,均为单胎,妊娠12周-26周,按照孕妇年龄、血清学筛查结果及超声检测结果分为唐氏综合征筛查(唐筛)高危组、高龄组(孕产期年龄超过35周岁)、B超检测异常组和其他原因组,共计4组,由北京贝瑞和康生物技术有限公司和湖南家辉遗传专科医院合作开展的"大规模基于新一代测序技术的新型无创DNA产前检测"对孕妇外周血中游离胎儿DNA进行序列分析,对检测结果阳性者进行羊水穿刺或脐血穿刺及胎儿染色体核型分析;对检测结果阴性者行电话随访其胎儿出生后情况。结果 14组孕妇共计2548例均成功完成游离胎儿DNA检测,检测结果为阳性者共39例,包括21三体18例、18三体7例、13三体2例、性染色体异常12例。其中唐筛高危组检出21三体5例、18三体1例、13三体0例、性染色体异常3例;高龄组检出21三体3例、18三体3例、13三体0例、性染色体异常5例;B超检测异常组检出21三体9例、18三体2例、13三体0例、性染色体异常2例;其他原因组检出21三体1例、18三体1例、13三体2例、性染色体异常2例;2孕妇游离胎儿DNA检测结果异常的39例孕妇中,32例进行了羊水穿刺或脐血穿刺及染色体核型分析。18例21三体检测阳性者中,13例进行了羊水穿刺或脐血穿刺,其中12例结果与无创DNA吻合,1例不吻合,5例拒绝羊水穿刺或脐血穿刺而直接引产,经随访胎儿均有异常。结果检出率100%,准确率92.3%。7例18三体检测阳性者中,有6例进行了羊水穿刺或脐血穿刺,其中5例结果与无创DNA吻合,1例不吻合,1例拒绝羊水穿刺或脐血穿刺而直接引产,经随访胎儿存在多处异常。结果检出率100%,准确率83.3%。2例13三体检测阳性者中,2例选择羊水穿刺,但结果均与无创DNA不吻合,胎儿均正常。12例性染色体检测阳性者中,有12例进行了羊水穿刺或脐血穿刺,其中4例结果与无创DNA吻合,8例不吻合,检出率为100%,准确率33.3%。34组孕妇血浆中游离胎儿DNA检测结果阴性者2509例,经电话随访,截止至2012年12月31日,已出生的新生儿经检查均未发现唐氏综合征患儿。结论孕妇外周血中游离胎儿DNA检测对21三体、18三体的检测准确率达83.3%-92.3%,但对13三体和性染色体检出率偏低,准确率有待临床配合进一步证实。另外,无创DNA对其他染色体异常的检测还需要进一步研究。

18500例高龄孕妇外周血无创DNA产前检测结果的临床研究

目的探讨高龄孕妇应用外周血无创DNA产前检测技术(NIPT)对胎儿染色体异常筛查和产前诊断的临床应用价值。方法选取2020年1月至2023年1月于西北妇女儿童医院进行产前外周血NIPT检测的高龄孕妇18500例作为研究对象,分析NIPT诊断胎儿各类染色体异常的准确性,探讨高龄孕妇胎儿染色体异常的高危因素。结果NIPT筛查出染色体高风险异常胎儿212例(1.15%),其中21三体综合征(T21)111例(52.36%)、18三体综合征(T18)21例(9.91%)、13三体综合征(T13)10例(4.72%)、性染色体异常66例(31.13%)、其他染色体异常4例(1.89%)。以介入性羊水穿刺活检为金标准,计算得出NIPT诊断T21、T18、T13、性染色体异常、其他染色体异常的阳性预测值分别为80.95%、33.33%、14.29%、33.33%、33.33%,准确度分别为86.84%、93.16%、96.31%、73.16%、98.42%。Logistic多因素回归分析显示,年龄>40岁、不良孕产史、染色体异常家族史均是高龄孕妇胎儿染色体异常的独立高危因素(均P<0.05)。结论NIPT对高龄孕妇胎儿各类染色体异常的诊断准确性均较高,可作为有效的优选筛查手段。高龄孕妇胎儿染色体异常的危险因素众多,可根据相关危险因素积极进行产前NIPT筛查,以精准指导临床针对性的应用有创介入穿刺检查。

母体外周血游离RNA分子特性及其在无创产前检测中的潜在应用

胎儿游离DNA在母体外周血血浆中的发现颠覆性地改变现有的无创产前检测方法,例如基于孕妇外周血血浆DNA对胎儿染色体异常的无创检测在全球范围内快速得到了认可和广泛应用。受到胎儿游离DNA研究成果的鼓舞,科学家也陆续展开了关于孕妇外周血中胎儿游离RNA的研究。现将集中讨论血浆RNA的特性及其潜在的应用。