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In vitro interference of cefotaxime at subinhibitory concentrations on biofilm formation by nontypeable Haemophilus influenzae 被引量:1
1
作者 Sudarat Baothong Sutthirat Sitthisak Duangkamol Kunthalert 《Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine》 SCIE CAS 2016年第9期745-750,共6页
Objective:To investigate the in vitro interference of cefotaxime at subinhibitory concentrations [sub-minimal inhibitory concentrations(MIC)] on biofilm formation by nontypeable Haemophilus influenzae(NTHi).Methods:Th... Objective:To investigate the in vitro interference of cefotaxime at subinhibitory concentrations [sub-minimal inhibitory concentrations(MIC)] on biofilm formation by nontypeable Haemophilus influenzae(NTHi).Methods:The interference of subinhibitory concentrations of cefotaxime on biofilm formation of the clinical strong-biofilm forming isolates of NTHi was evaluated by a microtiter plate biofilm formation assay.The effect of sub-MIC cefotaxime on bacterial cell-surface hydrophobicity was determined using a standard microbial adhesion to n-hexadecane test.Additionally,the effects on bacterial adherence to human fibronectin and expression of bacterial adhesins were also investigated.Results:Subinhibitory concentrations of cefotaxime,both at 0.1× and 0.5× MIC levels,efficiently reduced the NTHi biofilm formation,and this effect was independent of decreasing bacterial viability.Sub-MIC cefotaxime also decreased bacterial cell-surface hydrophobicity and reduced adherence to human fibronectin.Inhibition in the P2 and P6 gene expressions upon exposure to sub-MIC cefotaxime was also noted.Conclusions:Taken together,our results indicate that sub-MIC cefotaxime interferes with the formation of NTHi biofilm,and this effect is feasibly related to the interference with cell-surface hydrophobicity,fibronectin-binding activity as well as alteration of the P2 and P6 gene expression.The findings of the present study therefore provide a rationale for the use of subinhibitory concentrations of cefotaxime for treatment of NTHi-related diseases. 展开更多
关键词 BIOFILM formation CEFOTAXIME nontypeable haemophilus influenzae Subinhibitory concentration Sub-MIC
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Treg细胞抑制慢性中耳炎模型小鼠中耳炎症的进展
2
作者 王丹 杨启梅 +1 位作者 刘晓娜 陈菁华 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第2期205-213,共9页
目的探究慢性中耳炎(chronic otitis media,COM)小鼠中Treg细胞与炎症发展之间的关系。方法采用不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)腹腔注射和中耳咽鼓管(ET)阻断的方式诱导构建慢性中耳炎小鼠模型(模型组),选择健康BALB/c小鼠作为对照组。分... 目的探究慢性中耳炎(chronic otitis media,COM)小鼠中Treg细胞与炎症发展之间的关系。方法采用不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)腹腔注射和中耳咽鼓管(ET)阻断的方式诱导构建慢性中耳炎小鼠模型(模型组),选择健康BALB/c小鼠作为对照组。分别在建模后第3,14,28,56天分离收集小鼠中耳积液和中耳黏膜组织,通过苏木精-伊红(HE)染色检测MEM病理变化,采用免疫组织化学染色评估CD4^(+)和Foxp3^(+)T细胞水平,ELISA和Western blot分别检测小鼠中耳积液和中耳黏膜组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-10和转化生长因子(TGF-β)水平,流式细胞术分析CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)细胞比例。另取COM模型小鼠分为PBS组和抗-CD25组。抗-CD25组小鼠腹腔注射抗CD25 mAb模拟体内Treg耗竭,PBS组小鼠腹腔注射等量PBS溶液,第56天收集小鼠中耳积液、中耳黏膜组织、脾脏和颈部淋巴结组织,检测分析脾脏、颈部淋巴结和中耳黏膜组织中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)细胞比例,中耳黏膜组织中炎性因子水平,以及中耳积液中细菌水平。结果HE结果显示,对照组小鼠中耳黏膜组织正常,模型组小鼠中耳黏膜组织出现炎性细胞浸润,细菌数量、炎性细胞数量和黏膜厚度均增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠中耳黏膜组织中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)细胞比例升高(P<0.05),中耳积液和中耳黏膜组织中炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-10和TGF-β的水平均升高(P<0.01)。与PBS组比较,抗-CD25组小鼠中耳黏膜组织、脾脏和颈部淋巴结组织中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)细胞比例均降低(P<0.05),中耳积液中细菌数和中耳黏膜组织中炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-10和TGF-β的水平均降低(P<0.01)。结论Treg细胞在慢性中耳炎的炎症平衡维持中具有重要作用,抑制炎症的进展,但过度的Treg细胞抑制了宿主对细菌的清除作用。 展开更多
关键词 慢性中耳炎 不可分型流感嗜血杆菌(nthi) Treg细胞 中耳积液 中耳黏膜组织
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人肺组织体外感染模型的建立及NTHi诱导炎症反应的机制研究 被引量:1
3
作者 刁然 夏靖燕 +3 位作者 徐峰 程玉生 杨燕 王选锭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1472-1475,共4页
目的:研究不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)诱导肺组织炎症反应的关键信号通路。方法:肺组织与NTHi(1010 CFU/L)共孵育4 h和24 h。Western blotting检测肺组织的磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK),电泳迁移率法检测核因子κB(NF-κB)核转... 目的:研究不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)诱导肺组织炎症反应的关键信号通路。方法:肺组织与NTHi(1010 CFU/L)共孵育4 h和24 h。Western blotting检测肺组织的磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK),电泳迁移率法检测核因子κB(NF-κB)核转位,实时定量RT-PCR检测Toll样受体(TLR)2 mRNA,酶联免疫吸附试验检测上清的白细胞介素(IL)-8水平。另外,肺组织预先与抗TLR2单抗(anti-TLR2:5 mg/L)、p38MAPK抑制剂(SB203580:20μmol/L)或NF-κB抑制剂(PDTC:25μmol/L)孵育2 h,再加入NTHi(1010 CFU/L)刺激24 h,收集组织上清,测定IL-8。结果:肺组织感染NTHi 4 h后,肺组织TLR2-p38 MAPK-NF-κB信号通路迅速被激活。感染24 h后,肺组织IL-8表达较未感染组显著增加(P<0.05)。抗TLR2单抗、特异性p38MAPK和NF-κB分子阻断剂可以明显抑制NTHi诱导的IL-8表达。结论:NTHi通过TLR2-p38 MAPK-NF-κB信号通路诱导肺组织分泌炎症因子。人体外肺组织感染模型为研究病原体和宿主相互作用提供了新的平台。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血菌 炎症反应 模型 肺感染
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不可分型流感嗜血杆菌生物膜在儿童慢性肺部感染中的作用
4
作者 陈虹宇 刘梓豪 +4 位作者 王和平 廖翠娟 李莉 王文建 赖建威 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期589-593,共5页
目的探讨不可分型流感嗜血杆菌生物膜在儿童慢性肺部感染中的作用。方法从临床微生物室样本库中选取2019年2月至2021年10月从健康儿童(健康对照组)鼻咽部和肺部感染儿童(肺部感染组)肺泡灌洗液中分离培养的流感嗜血杆菌,比较健康儿童与... 目的探讨不可分型流感嗜血杆菌生物膜在儿童慢性肺部感染中的作用。方法从临床微生物室样本库中选取2019年2月至2021年10月从健康儿童(健康对照组)鼻咽部和肺部感染儿童(肺部感染组)肺泡灌洗液中分离培养的流感嗜血杆菌,比较健康儿童与急性和慢性肺部感染患儿分离菌株体外生物膜在不同时间点的生成情况。结果选取流感嗜血杆菌89株,其中健康对照组34株,慢性肺部感染组30株,急性肺部感染组25株。所有菌株通过聚合酶链反应对荚膜基因bexA的检测发现,均为不可分型流感嗜血杆菌。急性和慢性肺部感染组在不同时间点(第1、2、3、4、7天)之间的吸光度差异有统计学意义,慢性感染组在第4天的吸光度最高。第4天健康对照组、急性和慢性肺部感染组之间的吸光度差异有统计学意义(P<0.05),慢性肺部感染组吸光度高于健康对照组和急性肺部感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不可分型流感嗜血杆菌生物膜的生成需要较长时间,在慢性肺部感染患儿中生成能力高于急性肺部感染患儿和健康对照儿童。 展开更多
关键词 生物膜 不可分型流感嗜血杆菌 慢性肺部感染 儿童
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小鼠巨噬细胞源性趋化因子作为佐剂增强不可分型流感嗜血杆菌P6蛋白疫苗的免疫保护作用 被引量:2
5
作者 韩小艳 王晨红 +3 位作者 乔海霞 张彦霞 常月立 张玉妥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期913-916,共4页
目的用原核细胞表达不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)P6蛋白并观察巨噬细胞源性趋化因子(MDC)对NTHi-P6蛋白疫苗免疫效果的影响。方法构建原核表达质粒PGEX-6P2/P6,转化E.coli XL1-Blue,诱导P6蛋白的表达。将BALB/c小鼠随机分为P6蛋白联合Fre... 目的用原核细胞表达不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)P6蛋白并观察巨噬细胞源性趋化因子(MDC)对NTHi-P6蛋白疫苗免疫效果的影响。方法构建原核表达质粒PGEX-6P2/P6,转化E.coli XL1-Blue,诱导P6蛋白的表达。将BALB/c小鼠随机分为P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组、P6蛋白联合Freund佐剂组、PBS对照组。分别于0、14、28 d经腹腔免疫,末次免疫后14 d,每组取12只小鼠取血,ELISA检测血清中IgG抗体水平。每组取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,ELISA检测IL-4和IFN-γ水平。用10×LD50NTHi攻击每组剩余15只小鼠,观察免疫保护作用。结果 P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组、P6蛋白联合Freund佐剂组均能诱导小鼠产生IgG抗体,其滴度分别为1∶1 140.25、1∶3 044.38,P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组小鼠抗体滴度和IFN-γ水平明显高于P6蛋白联合Freund佐剂组(P<0.05),但IL-4水平2组间差异无统计学意义(P>0.05)。经NTHi攻击后,P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组小鼠的生存率达80%,与PBS组相比差异有统计学意义(P<0.05),但与P6蛋白联合Freund佐剂组相比无显著性差异。结论 MDC作为蛋白佐剂,在一定程度上增强了NTHi-P6蛋白疫苗的免疫保护作用。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 P6蛋白 巨噬细胞源性趋化因子 小鼠
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不可分型流感嗜血杆菌P6重组蛋白的原核表达及其黏膜免疫效应 被引量:2
6
作者 乔海霞 张彦霞 +4 位作者 戴明艳 张存辉 常月立 贾晓辉 张玉妥 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期216-221,共6页
目的:研究不可分型流感嗜血杆菌重组P6蛋白的免疫原性,以确定重组P6蛋白在不可分型流感嗜血杆菌疫苗研制中的应用价值。方法:扩增P6目的基因,构建重组质粒PGEX-6P2/P6,鉴定后将其转化入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导、纯化后经SDS-PAGE、Wes... 目的:研究不可分型流感嗜血杆菌重组P6蛋白的免疫原性,以确定重组P6蛋白在不可分型流感嗜血杆菌疫苗研制中的应用价值。方法:扩增P6目的基因,构建重组质粒PGEX-6P2/P6,鉴定后将其转化入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导、纯化后经SDS-PAGE、Western blot分析;纯化的重组蛋白经滴鼻方式免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测血清IgG,肺灌洗液IgA的水平及脾细胞中IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ的产生水平。CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖情况。结果:成功构建了重组表达载体PGEX-6P2/P6,并表达GST-P6融合蛋白。Western blot证明GST-P6蛋白能与菌源P6蛋白免疫小鼠后的抗血清发生特异性反应。动物实验表明重组P6蛋白通过滴鼻途径既能刺激小鼠产生血清IgG,又能诱导肺黏膜产生较高的特异性IgA抗体。重组蛋白+IL-2组小鼠脾淋巴细胞所产生的IL-17和IFN-γ的含量高于对照组(P<0.05)。结论:P6蛋白的原核表达载体PGEX-6P2/P6在大肠杆菌XL1-Blue中大量表达,重组P6蛋白经黏膜免疫可以同时诱导产生体液免疫和细胞免疫。此实验为P6蛋白疫苗的研发提供了理论基础。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 外膜蛋白P6 原核表达 黏膜免疫效应
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不可分型流感嗜血杆菌重组Hap蛋白的表达及其生物学活性分析 被引量:3
7
作者 姚锋 李婉宜 +4 位作者 邝玉 李明远 丰锋 冯伟 张强 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期953-956,共4页
目的在原核系统中表达并纯化不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)的重要粘附因子Hap蛋白,并对其免疫原性和粘附活性进行初步研究。方法 IPTG诱导重组质粒pET32a(+)-Hap在E.coliBL21中高效表达,Ni2+亲和层析柱纯化表达产物。用纯化的Hap重组蛋白... 目的在原核系统中表达并纯化不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)的重要粘附因子Hap蛋白,并对其免疫原性和粘附活性进行初步研究。方法 IPTG诱导重组质粒pET32a(+)-Hap在E.coliBL21中高效表达,Ni2+亲和层析柱纯化表达产物。用纯化的Hap重组蛋白进行体外竞争黏附实验,SEM观察及菌落形成单位计数法分析该重组蛋白的黏附活性。纯化蛋白与黏膜免疫佐剂CT-B联合鼻腔免疫BALB/C小鼠,ELISA检测小鼠抗Hap的IgA及IgG抗体水平。结果纯化产物的SDS-PAGE分析显示获得单一的目的蛋白条带,Gelanalysis软件分析蛋白纯度可达85%,纯化产物超滤浓缩后,测得其蛋白浓度为3.2g/L。体外竞争黏附实验观察到Hap重组蛋白的加入可明显抑制NTHi对胞外基质的黏附,且细菌黏附量的减少与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。该重组蛋白与免疫佐剂CT-B联合免疫小鼠,可刺激机体产生较高水平的IgG或IgA抗体,与重组抗原单独免疫组相比,差异具有显著性(P<0.05)。结论 Hap蛋白在原核系统中获得较高浓度和纯度的表达,纯化Hap重组蛋白具有良好的免疫原性和粘附活性。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 Hap重组蛋白 免疫原性 粘附活性
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不可分型流感嗜血杆菌诱导NCI-H292细胞产生MUC5AC的分子机制 被引量:3
8
作者 阳帆 周丽丽 +4 位作者 曹艳华 杨志英 邝婧 张园园 李坚 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1642-1646,共5页
目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)诱导气道上皮细胞表达黏蛋白MUC5AC的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:体外培养NCI-H292细胞,用NTHi感染后,采用ELISA检测MUC5AC和基质金属蛋白酶9(MMP-9)... 目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)诱导气道上皮细胞表达黏蛋白MUC5AC的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:体外培养NCI-H292细胞,用NTHi感染后,采用ELISA检测MUC5AC和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的水平;明胶酶谱实验分析MMP-9的酶活性;同时分别采用表皮生长因子受体(EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、NADPH氧化酶、活性氧簇(ROS)、和MMP-9特异性抑制剂AG1478、LY294002、DPI、NAC和GM6001预处理NCI-H292细胞,检测MUC5AC以及MMP-9的水平。结果:NTHi能以时间依赖性方式诱导NCI-H292细胞产生MMP-9,并上调其酶活性,同时增加Rac1的活性并诱导ROS生成;采用AG1478和LY294002处理后,Rac1活性显著降低;采用DPI或Rac1抑制剂NSC23766处理后,ROS含量明显减少;当NCI-H292细胞用NAC或NSC23766预处理后,可显著下调MMP-9的表达与活性。此外,采用GM6001处理后,MUC5AC的分泌明显降低。结论:NTHi经EGFR/PI3K/Rac1/NADPH氧化酶/ROS/MMP-9通路诱导NCIH292细胞产生MUC5AC。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 基质金属蛋白酶9 MUC5AC
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不可分型流感嗜血杆菌对气管黏膜上皮细胞的作用 被引量:3
9
作者 钱建美 修清玉 +1 位作者 王桂芳 颜泽敏 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期769-772,共4页
目的 :探讨不可分型流感嗜血杆菌 (NTHi)与气液界面无血清培养原代兔气管黏膜上皮细胞的相互作用。 方法 :利用低温酶消化法分离兔气管黏膜上皮细胞 ,无血清培养液及胶原覆盖膜形成的气液界面培养 ,使上皮细胞分化成假复层黏膜纤毛上皮... 目的 :探讨不可分型流感嗜血杆菌 (NTHi)与气液界面无血清培养原代兔气管黏膜上皮细胞的相互作用。 方法 :利用低温酶消化法分离兔气管黏膜上皮细胞 ,无血清培养液及胶原覆盖膜形成的气液界面培养 ,使上皮细胞分化成假复层黏膜纤毛上皮细胞 ,然后加入 NTHi感染上皮细胞 ,通过扫描电镜 (SEM)和透射电镜 (TEM)观察其形态结构变化。 结果 :NTHi感染 2 4h后 ,SEM示气管黏膜上皮细胞表面结构破坏 ,90 %细胞凋亡或死亡 ,纤毛倒伏、断裂 ,细菌与非纤毛上皮细胞连接 ;TEM示细菌黏附在细胞表面 ,细胞表面有较多微绒毛 ,伴微绒毛延伸或伪足包绕细菌 ,将其吞噬胞内。结论 :NTHi黏附在上皮细胞表面 ,上皮细胞通过伪足形成和微绒毛延伸包绕细菌 ,将细菌吞噬在胞内 ;NTHi对上皮细胞有毒性作用 。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 气管黏膜上皮细胞:细胞凋亡
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不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6基因真核质粒的保护性研究 被引量:2
10
作者 何多姣 张彦霞 +3 位作者 刘雪晴 李双霞 贾天军 张玉妥 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第12期2118-2121,共4页
目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outer membrane proteinP6,P6)真核质粒的免疫保护性及其可能的保护机制。方法:构建pcDNA3.1/HisA-P6核酸疫苗,转染HeLa细胞;将P6质粒免疫BALB/c小... 目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outer membrane proteinP6,P6)真核质粒的免疫保护性及其可能的保护机制。方法:构建pcDNA3.1/HisA-P6核酸疫苗,转染HeLa细胞;将P6质粒免疫BALB/c小鼠后,ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4产生水平;CCK-8法分析脾淋巴细胞增殖情况,并建立小鼠NTHi感染模型,检测小鼠鼻咽部灌洗液NTHi数目变化;HE染色法分析鼻黏膜病理变化。结果:pcDNA3.1/HisA-P6在HeLa细胞中有目的蛋白的表达,免疫后pcDNA3.1/HisA-P6组小鼠脾淋巴细胞产生的IFN-γ及刺激指数均高于pcDNA3.1/HisA、PBS对照组(P<0.05),而IL-4的表达无差异;P6组鼻咽部NTHi清除率也显著高于对照组(P<0.01);病理显示P6组小鼠鼻黏膜组织结构基本正常,而对照组鼻黏膜紊乱、脱落。讨论:P6核酸疫苗可诱导小鼠产生明显的抗NTHi保护效应,其可能的保护机制包括细胞免疫、体液免疫及黏膜免疫。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 外膜蛋白P6 核酸疫苗 保护性免疫
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不可分型流感嗜血杆菌OMP6优势T-B联合抗原表位及其免疫原性研究 被引量:4
11
作者 张颖颖 王荣山 +2 位作者 陈旭 金洪星 严杰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1053-1059,共7页
目的了解无荚膜不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)临床菌株P6外膜蛋白(OMP6)编码基因(omp6)分布及其序列保守性,筛选并鉴定OMP6序列中优势T和B细胞(T-B)联合抗原表位及其免疫原性。方法采用PCR扩增NTHi临床菌株全长omp6基因,T-A克隆后测序。... 目的了解无荚膜不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)临床菌株P6外膜蛋白(OMP6)编码基因(omp6)分布及其序列保守性,筛选并鉴定OMP6序列中优势T和B细胞(T-B)联合抗原表位及其免疫原性。方法采用PCR扩增NTHi临床菌株全长omp6基因,T-A克隆后测序。采用生物信息学软件分析OMP6序列保守性与膜定位并预测其T-B联合抗原表位。采用噬菌体展示联合免疫印迹法和ELISA分别检测重组噬菌体PIII蛋白(rPIII)展示的OMP6中T-B联合抗原表位肽免疫原性和免疫反应性。结果 35株NTHi临床菌株均能检出omp6基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.3%~100%和99.3%~100%。OMP6为外膜表面蛋白,具有OMP6-2-25、OMP6-61-86和OMP6-98-126三个预测T-B联合抗原表位。Western Blot和ELISA结果显示,OMP6-2-25能与NTHi抗血清产生较强的杂交条带,96.9%(59/62)、69.4%(43/62)和74.2%(46/62)NTHi感染患儿血清标本OMP6-2-25、OMP6-61-86和OMP6-98-126抗原表位肽抗体阳性。结论 OMP6是分布广泛且序列保守的NTHi跨膜蛋白,OMP6-2-25为OMP6优势T-B联合抗原表位,可作为NTHi多抗原肽疫苗的候选表位。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 P6外膜蛋白 优势抗原表位 免疫原性 多抗原肽疫苗
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不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6基因真核质粒的构建及表达 被引量:3
12
作者 何多姣 刘雪晴 +2 位作者 李双霞 贾天军 张玉妥 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2011年第3期491-494,共4页
目的:构建不可分型流感嗜血杆菌(nontypeableHaemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outermembrane protein P6,P6)真核表达的重组质粒,并在HeLa细胞中表达,为核酸疫苗的开发奠定基础。方法:以NTHi基因组为模板,扩增编码P6蛋白的基因... 目的:构建不可分型流感嗜血杆菌(nontypeableHaemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outermembrane protein P6,P6)真核表达的重组质粒,并在HeLa细胞中表达,为核酸疫苗的开发奠定基础。方法:以NTHi基因组为模板,扩增编码P6蛋白的基因片段,酶切、纯化P6基因与真核载体pcDNA3.1/HisA后进行连接,之后转化并筛选含有目的基因的重组质粒pcDNA3.1/HisA-P6;将重组子转染至HeLa细胞,荧光蛋白法检测其表达产物。结果:经质粒PCR、酶切、测序证实插入的基因片段为NTHi-P6蛋白编码基因;荧光显微镜下显示,该重组质粒能够在HeLa细胞中表达目的蛋白。结论:成功地构建了真核重组质粒pcD-NA3.1/HisA-P6,并在HeLa细胞中表达。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 外膜蛋白P6 核酸疫苗 真核表达质粒
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不定型流感嗜血杆菌保护性抗原研究进展 被引量:6
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作者 冯旭敏 华春珍 《健康研究》 CAS 2011年第5期382-385,共4页
随着b型流感嗜血杆菌(Haemphilus influenzae tybe b,Hib)菌苗在世界范围的广泛接种,全球各地的Hib感染率已大幅度下降。而不定型流感嗜血杆菌(Nontypeable-Haemphilus influenzae,NTHi)的比例大幅上升,已成为主要的Hi致病株,常引起中... 随着b型流感嗜血杆菌(Haemphilus influenzae tybe b,Hib)菌苗在世界范围的广泛接种,全球各地的Hib感染率已大幅度下降。而不定型流感嗜血杆菌(Nontypeable-Haemphilus influenzae,NTHi)的比例大幅上升,已成为主要的Hi致病株,常引起中耳炎、急性上呼吸道感染、肺炎、败血症等疾病。针对NTHi的预防,目前尚无NTHi疫苗产品问世。文章就NTHi疫苗的研究现状、主要保护性疫苗的实验研究进展作一综述。 展开更多
关键词 流感嗜血杆菌 不定型 疫苗 抗原
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小鼠急性未分型流感嗜血杆菌中耳炎差异基因的互作网络特征分析
14
作者 刘佳丽 王维 +4 位作者 王子萌 范芳梅 马毓蓉 余林 何於娟 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第1期94-98,共5页
目的利用基因表达数据库(GEO)查找小鼠中耳炎表达谱基因芯片原始数据,建立中耳炎基因互作网络图。方法从公共数据库GEO中下载小鼠中耳炎相关数据集,采用Affymetrix Expression Console软件和Tran-scriptome Analysis Console(TAC)软件... 目的利用基因表达数据库(GEO)查找小鼠中耳炎表达谱基因芯片原始数据,建立中耳炎基因互作网络图。方法从公共数据库GEO中下载小鼠中耳炎相关数据集,采用Affymetrix Expression Console软件和Tran-scriptome Analysis Console(TAC)软件筛选差异表达基因,将差异基因导入STRING在线数据库进行分析,绘制差异基因互作网络图,并将互作网络数据导入Cytoscape 3.4.0软件中,筛选网络中心节点,并取其中相对独立、作用较为集中且与炎症基因相关子网络,采用David在线工具对其进行功能注释富集分析。结果共筛选出1166个差异表达基因,其中表达上调793个,表达下调373个,经STRING在线工具筛选后共有459个小鼠中耳炎差异基因编码的蛋白存在相互作用,并得到相应蛋白互作网络,分析其中与炎症相关子网络。结论本研究利用生物信息学技术构建了中耳炎差异基因互作网络,其中的网络中心节点基因,对于中耳炎分子机制研究及靶向治疗具有指导作用。 展开更多
关键词 未分型流感嗜血杆菌 中耳炎 基因芯片 互作网络
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不可分型流感嗜血杆菌生物膜体外形成规律及其扫描电镜形态学 被引量:1
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作者 姜俊如 刘岚 +5 位作者 沈犁 楚丽娟 张佳星 王磊 周薇 伏小红 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期729-733,共5页
目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)生物膜(BF)体外形成规律,采用扫描电子显微镜(SEM)观察BF内部结构。方法:以NTHi标准菌株ATCC49247为研究菌株,以铜绿假单胞菌(PA)标准菌株PAO1为阳性对照菌株,同时设空白对照组,分别培养1、2、3、4... 目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)生物膜(BF)体外形成规律,采用扫描电子显微镜(SEM)观察BF内部结构。方法:以NTHi标准菌株ATCC49247为研究菌株,以铜绿假单胞菌(PA)标准菌株PAO1为阳性对照菌株,同时设空白对照组,分别培养1、2、3、4、5、6和7d时,使用平板计数法和结晶紫染色法检测BF形成情况,并于3d时采用SEM检测ATCC49247的BF结构。结果:平板计数法检测BF内菌落数,ATCC49247和PAO1培养3d时活菌数逐渐上升至最高,而后逐渐下降,至7d时分别降至(0.829 4±0.007 5)×107cfu·mL-1和(0.942 6±0.019 9)×107cfu·mL-1,培养3、4、5和6d时2组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),同种细菌各不同时间点间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结晶紫染色检测BF致密程度,ATCC49247和PAO1培养3d时BF致密度逐渐上升至最高,波长570nm吸光度(A570)值分别为2.717 4±0.017 2和2.885 3±0.039 0,而后逐渐下降,至7d时分别降至0.151 7±0.074 5和1.196 9±1.108 5,各时间点2组细菌与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.05),培养3、4和5d时2组细菌间比较差异均有统计学意义(P<0.05),同种细菌不同时间点比较差异有统计学意义(P<0.05)。SEM观察,培养3d时ATCC49247形成了典型的BF结构。结论:ATCC49247可以在体外形成BF,结晶紫染色、平板计数和扫描电镜可作为检测BF的常规手段。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 生物膜 结晶紫染色 平板菌落计数 扫描电镜
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不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白的研究进展 被引量:3
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作者 马玉帅 赵颖 +1 位作者 陈蕊 张玉妥 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1597-1601,共5页
不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)是一种定植在人类鼻咽部常见的条件致病菌,常引起继发性感染,如支气管炎、鼻窦炎、儿童中耳炎和成人慢性阻塞性肺疾病急性加重等。研究发现该菌细胞壁外膜上表达多种具... 不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)是一种定植在人类鼻咽部常见的条件致病菌,常引起继发性感染,如支气管炎、鼻窦炎、儿童中耳炎和成人慢性阻塞性肺疾病急性加重等。研究发现该菌细胞壁外膜上表达多种具有免疫原性和抗原性的蛋白,其对该菌在宿主体内的定植、入侵和生存必不可少,有些蛋白还与该菌的耐药性和宿主免疫的清除机制有关。因此,研究外膜蛋白有利于开发有效的疫苗和抗感染药物来预防及治疗NTHi引起的感染,下面从蛋白的结构、功能及应用等方面对几种外膜蛋白作一综述。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 外膜蛋白 免疫原性 抗原性 定植 耐药性
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呼吸道感染患儿不可分型流感嗜血杆菌分离率和耐药性分析 被引量:3
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作者 杨耀锋 徐兰飞 +1 位作者 金洪星 王荣山 《儿科药学杂志》 CAS 2020年第8期41-45,共5页
目的:探讨呼吸道感染患儿不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)的分离率和耐药性。方法:收集2016年1月至2018年12月我院儿科门诊和住院部收治的7 843例呼吸道感染患儿的痰液标本,分别进行细菌分离和鉴定、血清学分型、药敏试验及β-内酰胺酶表型... 目的:探讨呼吸道感染患儿不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)的分离率和耐药性。方法:收集2016年1月至2018年12月我院儿科门诊和住院部收治的7 843例呼吸道感染患儿的痰液标本,分别进行细菌分离和鉴定、血清学分型、药敏试验及β-内酰胺酶表型检测,统计NTHi的分离率、β-内酰胺酶表型、耐药率和3年变迁情况。结果:共分离出927株流感嗜血杆菌(Hi),总分离率11.82%,其中NTHi为280株,占Hi株数的30.20%,占总标本数的3.57%。NTHi在Hi中和总体标本中的分离率呈逐年上升趋势(P<0.01),NTHi在Hi中和总体标本中的分离率随年龄增长呈下降趋势(P<0.01)。NTHi对氨苄西林和复方磺胺甲唑耐药率较高,分别为29.64%和43.57%,对阿奇霉素和亚胺培南的耐药率较低,分别为0.36%和0.71%。NTHi对氨苄西林和复方磺胺甲唑的耐药率均呈逐年上升趋势(P<0.05),对其余抗菌药物耐药率随时间变化有所上升,但未呈逐年上升趋势(P>0.05)。280株NTHi中β-内酰胺酶阳性菌株检出率为30.71%,呈逐年上升趋势(P<0.05),NTHi中β-内酰胺酶阳性菌株对氨苄西林、头孢呋辛、亚胺培南和复方磺胺甲唑的耐药率高于β-内酰胺酶阴性菌株(P均<0.05)。结论:NTHi的分离率和β-内酰胺酶阳性菌株检出率均呈逐年上升趋势。大环内酯类药物阿奇霉素及第二代和第三代头孢菌素具有相对较低的耐药率,不良反应在可接受范围内,可作为NTHi感染的首选用药。 展开更多
关键词 呼吸道感染 不可分型 流感嗜血杆菌 Β-内酰胺酶 耐药性
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免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响 被引量:3
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作者 韩小艳 张彦霞 +1 位作者 张存辉 张玉妥 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第8期691-693,698,共4页
目的观察不同免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响。方法将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化。以不同免疫途径(皮下,腹腔,滴鼻)用P6蛋白免疫小鼠,每组12只。然后另取小鼠分为PBS... 目的观察不同免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响。方法将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化。以不同免疫途径(皮下,腹腔,滴鼻)用P6蛋白免疫小鼠,每组12只。然后另取小鼠分为PBS组和不同佐剂组(MDC、IL-2、弗氏佐剂),每组15只,采用皮下注射途径免疫。共免疫3次,间隔2周,用ELISA检测小鼠血清特异性IgG抗体,用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性,用ELISA检测IL-4和IFN-γ水平。结果在大肠埃希菌中成功表达P6蛋白。3种免疫途径相比,皮下途径免疫诱导的IgG抗体滴度为1 279.97±3.87,腹腔免疫组为427.16±3.08,滴鼻免疫组为253.98±3.30,差异有统计学意义(F=5.43,P<0.05)。采用皮下免疫途径时,MDC组诱导的IgG抗体滴度、IL-4水平分别为7 421.02±3.30和79.64±2.75,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05)。IFN-γ水平和脾淋巴细胞增殖指数与IL-2组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用MDC佐剂并采用皮下途径注射可使NTHiP6蛋白疫苗获得较好的免疫效果。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 P6蛋白 佐剂 免疫途径
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巨噬细胞源性趋化因子对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响
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作者 韩小艳 张彦霞 +3 位作者 杨新玲 李小俊 王晨红 张玉妥 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期32-35,共4页
观察巨噬细胞源性趋化因子(MDC)佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响。将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化。将BALB/c小鼠随机分为A-D四组,分别为PBS对照组、MDC对照组、P6蛋白组、P6蛋白联... 观察巨噬细胞源性趋化因子(MDC)佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响。将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化。将BALB/c小鼠随机分为A-D四组,分别为PBS对照组、MDC对照组、P6蛋白组、P6蛋白联合MDC组。分别于0、14、28d经黏膜免疫,末次免疫后14d,每组12只小鼠取血和肺泡灌洗液,ELISA检测血清中IgG抗体和肺泡灌洗液中IgA抗体水平。每组取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,ELISA检测IL-4、IL-17和IFN-γ水平。用10LD50NTHi攻击每组剩余15只小鼠,观察免疫保护作用。在大肠杆菌中成功表达P6蛋白。第三次免疫后,D组诱导的IgG抗体、IgA抗体、IL-4、IL-17和IFN-γ水平显著高于其他各组(P<0.05)。经NTHi攻击后,D组生存率达80%,与A组、B组相比差异有统计学意义(P<0.05),但C组、D组之间无显著性差异(P>0.05)。MDC作为佐剂可以使NTHiP6疫苗获得较好的免疫效果。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 P6蛋白 巨噬细胞源性趋化因子 黏膜免疫
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MIP-1α基因佐剂对NTHi P6 DNA疫苗免疫效果的影响
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作者 韩小艳 王晨红 张玉妥 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第6期512-515,共4页
目的观察小鼠巨噬细胞炎性蛋白1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)基因佐剂对不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outer membrane protein P6,P6)DNA疫苗免疫效果的影响。方法将9... 目的观察小鼠巨噬细胞炎性蛋白1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)基因佐剂对不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outer membrane protein P6,P6)DNA疫苗免疫效果的影响。方法将92只BALB/c小鼠随机分为4组,分别用pcDNA3.1、pcDNA3.1/MIP-1α、pcDNA3.1/P6和pcDNA3.1/MIP-1α+pcDNA3.1/P6,肌肉注射免疫,每2周免疫1次,共3次,质粒每次每只接种100μg。末次免疫后14d,每组取10只小鼠,采血,分离血清,采用ELISA法检测特异性IgG抗体;每组取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,采用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性,采用ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞分泌IL-4和IFN-γ水平。用8LD50NTHi攻击每组剩余10只小鼠,观察免疫保护作用。结果末次免疫后,pcDNA3.1/MIP-1α+pcDNA3.1/P6组小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平为(1726.45±184.48)ng/L,增殖指数2.06±0.04,与pcDNA3.1/P6组(1443.09±187.70)ng/L和1.90±0.04比较差异均有统计学意义(P<0.05);抗体滴度和IL-4水平两组间差异无统计学意义(P>0.05)。经NTHi攻击后,pcDNA3.1/MIP-1α+pcDNA3.1/P6免疫组小鼠14d生存率达70%,与pcDNA3.1组0%和pcDNA3.1/MIP-1α组0%相比与差异有统计学意义(P<0.05),与pcDNA3.1/P6组60%相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论MIP-1α基因佐剂在一定程度上能增强NTHi P6基因疫苗的免疫保护作用。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 核酸疫苗 巨噬细胞炎性蛋白1Α 小鼠
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