硝酸菌norB基因的克隆及序列分析

目的扩增、克隆硝酸菌的norB基因。方法通过PCR扩增硝酸菌的norB基因,然后克隆至T载体中,并转化进E.coliJM109中。通过兰白斑挑选阳性转化子。对质粒测序,并与Genbank上的序列进行同源性分析。结果同源性搜索发现所有扩增到的基因无论在核酸序列水平还是在蛋白序列水平都与Genbank上的汉堡硝化杆菌norB基因同源,且同源性高达96%～98%。结论扩增获得的基因经过基因序列分析证实为硝酸菌norB基因。

铜绿假单胞菌norB基因的克隆及表达

为使norB基因得到有效表达,利用分子生物学技术将铜绿假单胞菌B136-33的norB基因克隆至表达载体pET-28a上。首先,根据GenBank公布的norB基因序列及表达载体pET-28a上的多克隆位点进行引物(含EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点)设计;然后以B136-33基因组为模板,扩增目的片段norB;产物经双酶切克隆至pET-28a后,化学转化至克隆菌DH5α,得到含有重组质粒的转化子DH5α-pET-28a-norB;再经双酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒pET-28a-norB转化至表达菌BL21;最后,用SDS-PAGE鉴定norB基因表达产物的分子量。结果表明,norB能在BL21中得到正确有效的表达。

几株硝化菌的筛选及其初步鉴定

目的 :筛选、分离能够用于治理氨氮污染和军事坑道生活污物、污水的硝化菌。方法 :通过富集培养从土壤中筛选的硝化菌 ,在进行形态学检验和硝化速率测定后 ,设计引物扩增硝化菌的特征性基因NorB ,随机选择一个PCR产物进行测序 ,并与Genbank上的序列比较同源性。结果 :筛选到 7株能够降解亚硝酸盐的细菌 ,经革兰氏染色后发现全部为阴性 ,其菌落形态以小、圆、淡黄色为主 ,细菌形态多为短杆状 ;各菌株的硝化速率在 4 .35～ 4 .80 (mg·L 1·d 1)之间。用PCR均能扩增出预期大小片段。对其中的某一个PCR产物直接测序 ,与Genbank中的序列比较 ,发现该基因与硝化菌N .hamburgensis的Norb基因同源性高达 99%。结论 :可以初步断定 。

毛木耳代料栽培适宜碳氮比及菌棒中固碳、固氮细菌群落结构

为解析毛木耳代料栽培基质碳氮比(C/N)组成对其生育的影响以及在最适C/N的菌棒(菌丝和基料混合物)中参与卡尔文循环的固碳基因和固氮基因多样性,以毛木耳"上海1号"为供试菌株,设计5个不同C/N基质,在同一条件下进行出耳试验,测定相关农艺性状指标并采用高通量测序技术分析最佳C/N处理组菌棒中固碳和固氮基因多样性.结果显示:(1)在C/N约60∶1时生长最佳:菌丝长速最快,为4.43 mm/d;发菌期料袋污染率最低,为4.27%;菌丝长势好;第一潮鲜耳单簇表面积达3624.09 cm^(2)/簇,干耳边缘厚达0.71 mm;单袋干耳单产达164.79 g/袋,转化率达14.98%.生长情况其次C/N 45∶1和75∶1.(2)菌丝满袋期C/N 60∶1时菌棒含cbbL固碳基因主要分布在Proteobacteria和Actinobacteria,相对丰度分别为90.8%和0.2%,且以β-Proteobacteria为主,主要归属于Cupriavidus(41.7%)、Rubrivivax(33.6%)、Methylococcus(6.5%);而含cbbM基因的固碳细菌未检测出.(3)norB固氮基因主要分布在Firmicutes(3.2%)和Proteobacteria(0.4%),主要优势菌属为Geobacillus(2.1%)、Macrococcus(0.9%)、Pseudomonas(0.2%)、Staphylococcus(0.1%)和Bacillus(0.1%)等.本研究筛选获得了毛木耳代料栽培较佳基质C/N为60∶1,并解析了菌丝满袋期参与固碳和固氮基因细菌群落,为实现毛木耳精准化栽培和研究参与基质碳、氮素物质转化功能微生物菌群奠定了基础.