RUNX2在宫颈鳞癌组织中的表达及其siRNA对Hela229细胞RUNX2表达及细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨RUNX2蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达情况及RUNX2 siRNA对宫颈鳞癌Hela229细胞RUNX2基因表达、细胞增殖及凋亡的影响。方法:应用免疫组化技术检测50例宫颈鳞癌、30例宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)及30例正常宫颈黏膜组织中RUNX2蛋白的表达情况,并分析宫颈鳞癌组织中RUNX2蛋白表达与临床病理特征的关系。设计合成RUNX2 siRNA,通过脂质体将其转染至Hela229细胞,同时设立空白对照(不转染)和阴性对照(转染非特异性siRNA)细胞组。转染24、48、72 h后,采用MTT法检测各组细胞增殖,计算增殖抑制率;转染72 h后,采用RT-PCR及Western blot技术检测细胞中RUNX2 mRNA及蛋白的表达,采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:宫颈鳞癌组织中RUNX2阳性表达率高于HSIL及正常宫颈组织(P<0.001);宫颈鳞癌组织中RUNX2蛋白的表达与肿瘤的临床分期有关(P=0.004)。与空白对照组和阴性对照组比较,RUNX2 siRNA组Hela229细胞增殖抑制率、RUNX2 mRNA及蛋白的表达均降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论:RUNX2基因的高表达与宫颈鳞癌细胞的增殖关系密切。

鼻息肉调节激活正常T细胞表达和分泌因子的测定及其意义

目的 探讨在鼻息肉形成过程中 ,上皮应答时产生调节激活正常T细胞表达和分泌因子 (regulateduponactivation ,normalTcellexpressedandsecreted ,RANTES)对嗜酸粒细胞趋化、移行、局部聚集的影响。方法 采用无血清原代细胞培养法培养鼾症患者下鼻甲上皮细胞和鼻息肉上皮细胞 ,经炎性介质IL 1β(2 5 μg/L ,5 0 μg/L)刺激后收集 2 4h和 48h上清液 ,以酶联免疫吸附试验 (enzyme linkedimmunosorbentassay,ELISA)法测定上清液中RANTES的浓度。结果 ①鼾症患者下鼻甲上皮细胞经IL 1β刺激后上清液中RANTES的平均水平比刺激前约提高 1 5～ 10倍 ;鼻息肉上皮细胞刺激后RANTES的平均水平比刺激前约提高 10～ 2 0倍 ,2组刺激前后差异均有显著性 (t检验 ,P <0 0 0 1)。②刺激前鼻息肉上皮细胞中RANTES的水平与下鼻甲上皮细胞中的水平差异无显著性 (t检验 ,P >0 0 5 ) ,但刺激后 ,对应于IL 1β作用的不同浓度 ,不同时间RANTES在鼻息肉上皮细胞中的水平均显著高于下鼻甲上皮细胞中的浓度 (t检验 ,P <0 0 0 1)。③IL 1β作用 48h ,2组RANTES的水平均随着IL 1β刺激浓度的加大而增高 ;在一定的刺激浓度下 ,2组RANTES的水平随着刺激时间的延长而增加。结论 人鼻粘膜上皮细胞能够产生趋化因子RANTES ,它是鼻息?

HT-29肠癌细胞中E-selectin、Integrin β1及ICAM-1表达水平

目的:探讨HT-29肠癌细胞、正常肠上皮细胞及ECV-304血管内皮细胞中E-selectin、Integrinβ1及ICAM-1的表达状态。方法:采用Nothern Blotting方法检测HT-29肠癌细胞、正常肠上皮细胞和ECV-304血管内皮细胞中E-selectin、Integrinβ1及ICAM-1mRNA表达水平,采用ELISA法定量分析其表达含量。结果:HT-29肠癌细胞、正常肠上皮细胞和ECV-304血管内皮细胞均有E-selectin、Integrinβ1及ICAM-1基因表达。ELISA定量测定3个粘附分子表达水平,HT-29肠癌细胞均高于正常肠上皮细胞和ECV-304血管内皮细胞,分别存在显著性差异(P<0.05)。结论:E-selectin、Integrinβ1、ICAM-1可能与肿瘤细胞转移有关。

159例活检胃粘膜AgNOR分析

应用核仁组成区相关嗜银蛋白(AgNOR)对159例活检胃粘膜标本进行观察分析。提示AgNOR数目多寡对区分活检胃粘膜上皮增生程度,确定活检胃粘膜随访复查的次数及间隔时间,以推断胃粘膜上皮癌变过程及其规律有重要价值。慢性萎缩性胃炎和不典型增生的病例,一部分细胞的银颗粒数目属于癌肿的计数范围,多认为与腺上皮局灶性增生活跃有关。

N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍对哈萨克族食管正常上皮细胞甲基转移酶表达及活性的影响

目的体外实验检测N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对哈萨克族食管正常上皮细胞DNA甲基转移酶的表达及活性改变,以此探讨亚硝胺类化合物致食管上皮组织发生恶变的表遗传机制。方法以0、0.75、1.50和3.00μg/ml MNNG处理哈萨克族正常食管上皮细胞24 h,采用高效液相色谱法(HPLC)和DNA甲基转移酶活性检测试剂盒检测细胞基因组DNA整体甲基化水平和DNA甲基转移酶活性的改变;并采用RT-PCR和Western Blot法检测DNA甲基转移酶mRNA及蛋白表达。结果 1.50和3.00μg/ml MNNG组与对照组比较细胞基因组DNA整体甲基化水平分别降低8.07%和17.58%,且各染毒组之间比较差异有统计学意义(F=60.342,P<0.01);与对照组比较各染毒组DNMT1、DNMT3a、DNMT3b酶活性均升高,且与MNNG浓度呈正相关(r=0.967,P<0.01;r=0.897,P<0.01;r=0.716,P<0.01);与对照组比较各染毒组DNMT1、DNMT3a、DNMT3b基因mRNA及蛋白表达水平均升高,且与MNNG浓度呈正相关(r=0.814,P<0.05;r=0.732,P<0.01;r=0.578,P<0.05;r=0.944,P<0.01;r=0.900,P<0.01;r=0.887,P<0.01)。结论 MNNG可致哈族正常食管上皮细胞基因组DNA整体甲基化水平下降,提高DNMT1、DNMT3a、DNMT3b表达及活性。

瞬时转染HBx基因到人正常胆管上皮细胞并观测其对hTERT mRNA的表达影响

目的通过研究HBx基因转染到人正常胆管上皮(HBECs)后对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的转录调节作用,以阐明HBV感染在胆管癌发生中的作用机制。方法瞬时转染HBx基因到体外培养的HBECs,同时转染含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的克隆载体以判定转染率;RT-PCR分析转染后HBECs内hTERT mRNA的表达变化;并通过细胞免疫组化技术了解转染细胞内HBx蛋白的表达。结果经EGFP判定的转染率约为15%;未经转染或转染空载体的HBECs不表达hTERT mRNA,而转染HBx基因的HBECs可表达明显的hTERT mRNA;只有在转染了HBx基因的HBECs可检测到HBx蛋白表达。结论HBx基因转染能激活hTERT mRNA的转录表达,这种顺式调节作用可能是胆管上皮增殖、分化并恶化的主要机制。