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鸭源新型鹅细小病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用 被引量:8
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作者 曹旭阳 王宇飞 +10 位作者 张志飞 魏笑笑 秦立廷 陈佶慧 滕巧泱 杨健美 刘芹防 陈鸿军 李泽君 李景环 李雪松 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第5期31-36,共6页
2015年暴发了一种由新型鹅细小病毒(NGPV)引起的鸭喙萎缩-侏儒症(BADS)的疾病,造成了严重的经济损失。本研究根据GenBank中NGPV相对保守的VP3基因序列,设计1对特异性引物和1条TaqMan探针,并对其反应条件进行优化,建立了一种检测NGPV的Ta... 2015年暴发了一种由新型鹅细小病毒(NGPV)引起的鸭喙萎缩-侏儒症(BADS)的疾病,造成了严重的经济损失。本研究根据GenBank中NGPV相对保守的VP3基因序列,设计1对特异性引物和1条TaqMan探针,并对其反应条件进行优化,建立了一种检测NGPV的TaqMan荧光定量PCR方法。敏感性试验结果表明,该方法检测敏感性达到37.2拷贝/μL,比常规PCR灵敏度高100倍,而且该方法对鸭其他主要病原核酸检测均为阴性,具有良好的特异性。批内和批间的检测变异系数均小于等于2.2%。对收集的50份病料进行检测,本研究建立的荧光定量PCR方法NGPV检出率为78%,普通PCR方法为50%,荧光定量PCR方法的敏感性明显高于普通常规PCR方法。研究结果表明该方法具有操作简便、敏感性高和特异性强的特点,可用于NGPV的快速诊断。 展开更多
关键词 新型鹅细小病毒 荧光定量PCR 检测
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鸭源新型鹅细小病毒的分离鉴定及VP2蛋白的原核表达
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作者 魏玲 熊荣园 +3 位作者 王思怡 梁洪 龙冬梅 杨国淋 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第12期59-63,68,125,共7页
为了获得鸭源新型鹅细小病毒(NGPV)流行毒株并表达VP2蛋白,试验采集患短喙侏儒综合征的死亡鸭肝脏组织病料样本,首先通过鸭胚传代培养分离病毒,然后对分离毒株进行血凝试验、PCR检测、鸭胚半数致死量(ELD_(50))测定及致病性试验,最后对... 为了获得鸭源新型鹅细小病毒(NGPV)流行毒株并表达VP2蛋白,试验采集患短喙侏儒综合征的死亡鸭肝脏组织病料样本,首先通过鸭胚传代培养分离病毒,然后对分离毒株进行血凝试验、PCR检测、鸭胚半数致死量(ELD_(50))测定及致病性试验,最后对VP2蛋白进行诱导表达、可溶性分析、纯化及Western-blot鉴定。结果表明:从临床病料样本中分离到1株病毒,将该毒株接种鸭胚,鸭胚的死亡时间均集中在接种后的第48~72小时之间,死亡鸭胚出现绒毛尿囊膜增厚、胚体有大量出血点、鸭喙短小等短喙侏儒综合征的典型病变特征,将分离毒株命名为SCNC01株。SCNC01株不能凝集1%鸡红细胞,在其基因组DNA中可扩增出NGPV NS1基因序列,该序列与GenBank中的NGPV NS1基因序列相似性在90.6%~98.3%之间,SCNC01株与MK000549、MN415966、JF333590、KC996729、KT598506、MW929338等NGPV毒株处于同一分支,确定该毒株为NGPV。SCNC01株的ELD_(50)为1×10^(-4.5)/0.2 mL,可引起雏鸭出现运动障碍、食欲下降、精神萎靡、喙萎缩、舌头外翻、排白色稀便等临床症状甚至死亡。经IPTG诱导NGPV VP2蛋白获得了表达,且表达形式为包涵体,经His-Tag蛋白纯化柱纯化后,出现与目的蛋白大小一致的单一条带,该蛋白能与NGPV阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。说明试验成功分离到1株鸭源NGPV,并获得了具有良好反应原性的VP2蛋白。 展开更多
关键词 新型鹅细小病毒(NGPV) 病毒分离 病毒鉴定 短喙侏儒综合征 VP2蛋白 原核表达
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鸭源新型鹅细小病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用
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作者 马瑶 汪宏才 +6 位作者 唐晟 姚伦 曾哲 罗青平 曾驰 商雨 温国元 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期2042-2049,共8页
新型鹅细小病毒(novel goose parvovirus,NGPV)是由鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)变异而来,可感染雏鸭,引起以鸭短喙侏儒综合征为主要特征的传染性疾病。2015年该病在我国鸭群中大暴发,严重影响鸭出栏率,给我国的养殖行业带来巨大... 新型鹅细小病毒(novel goose parvovirus,NGPV)是由鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)变异而来,可感染雏鸭,引起以鸭短喙侏儒综合征为主要特征的传染性疾病。2015年该病在我国鸭群中大暴发,严重影响鸭出栏率,给我国的养殖行业带来巨大的经济损失。为建立一种鸭源NGPV抗体的间接ELISA检测方法,用于鸭感染细小病毒的血清学检测和鸭免疫细小病毒疫苗后抗体水平监测,本研究利用生物信息学预测了NGPV YICH株的结构蛋白VP3的抗原表位,选择了抗原富集区域(aa250~525)进行原核表达,经蛋白纯化获得了可溶性的VP3截短蛋白VP3-tr。以VP3-tr为包被抗原,经过棋盘滴定方法优化各个反应条件,建立了NGPV抗体的间接ELISA检测方法。利用优化后的间接ELISA方法对30份GPV阴性鸭血清进行检测,确定阴阳性临界值为0.219。ELISA方法的灵敏性、特异性和重复性检测结果表明,该方法灵敏度较高,特异性良好,不与鸭坦布苏病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、鸭疫里默杆菌、大肠杆菌病原阳性血清发生交叉反应;批内和批间重复试验的变异系数均小于6%,重复性良好。用该方法与Western blot检测方法分别对147份临床血清样品进行检测,结果表明ELISA检测阳性率为85.0%,Western blot检测率为69.4%,两者符合率为84.4%。综上所述,本研究成功建立了鸭源NGPV抗体的间接ELISA检测方法,为鸭感染NGPV后的感染情况监测以及疫苗免疫评估提供了更简便可靠的方法。 展开更多
关键词 新型鹅细小病毒 VP3蛋白 间接ELISA
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