α-常春藤皂苷通过激活和稳定p53/Noxa信号诱导肝癌细胞凋亡

目的研究预知子活性成分α-常春藤皂苷对肝癌细胞的体内外抑制作用及其机制。方法将肝癌细胞分为4组,分别给予0、10、20和30μmol·L^(-1)α-常春藤皂苷至24、48 h。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡率,转录组学筛选α-常春藤皂苷作用的信号通路,核糖核酸(RNA)干扰、实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹检测信号通路和凋亡通路信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达,体内移植瘤试验验证α-常春藤皂苷体内对肝癌细胞生长的抑制作用。结果α-常春藤皂苷通过激活腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9(Caspase9)和Caspase3诱导肝癌细胞凋亡。转录组学、qRT-PCR和蛋白免疫印迹检测发现α-常春藤皂苷上调了p53和Noxa的表达,并抑制p53和Noxa蛋白的降解,α-常春藤皂苷还能逆转p53/Noxa敲低所致的凋亡减少。动物实验结果表明,α-常春藤皂苷可抑制肝癌细胞移植瘤的增殖。结论α-常春藤皂苷可通过激活和稳定p53/Noxa信号诱导肝癌细胞凋亡。

皮肌炎患者肌肉组织中Mcl-1蛋白、Noxa蛋白的表达情况及临床意义

目的分析皮肌炎患者肌肉组织中髓样细胞白血病1(Mcl-1)蛋白和Noxa蛋白的表达水平,并探讨两者在皮肌炎发生和发展中的临床意义。方法采用免疫组化法检测20例皮肌炎患者(皮肌炎组)及20例行清创术的单纯骨科外伤患者(对照组)的肌肉组织中Mcl-1蛋白、Noxa蛋白阳性表达率及光密度值。分析Mcl-1蛋白、Noxa蛋白的光密度值与皮肌炎患者临床病理特征、肌酸激酶(CK)水平、血沉及疾病活动度的关系。结果(1)皮肌炎组肌肉组织中Mcl-1蛋白的阳性表达率和光密度值均高于对照组,Noxa蛋白的阳性表达率和光密度值均低于对照组(均P<0.05)。(2)与无间质性肺疾病、CK水平正常、血沉正常的皮肌炎患者相比,合并间质性肺疾病、CK水平升高、血沉升高的患者肌肉组织中Mcl-1蛋白光密度值更高,而Noxa蛋白光密度值更低(均P<0.05)。(3)皮肌炎组患者肌肉组织中Mcl-1蛋白光密度值与CK水平、血沉、总体疾病活动度评分、肌肉疾病活动度评分、肺脏疾病活动度评分均呈正相关,Noxa蛋白光密度值则与上述指标均呈负相关(均P<0.05)。结论皮肌炎患者肌肉组织中Mcl-1蛋白表达上调,Noxa蛋白表达下调,两者与皮肌炎的发生、疾病活动度、炎症反应程度、并发间质性肺疾病均密切相关。

SIRT1通过调节Noxa表达影响非小细胞肺癌细胞株A549对顺铂的敏感性

背景与目的非小细胞肺癌的顺铂耐药是常见的临床现象,严重制约了患者的化疗效果,是亟待解决的问题。SIRT1和Noxa的表达变化影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。本研究旨在研究SIRT1表达对非小细胞肺癌对顺铂的敏感性的影响,并探讨其涉及Noxa表达的机制,以求为提高非小细胞肺癌细胞对顺铂敏感性提供希望。方法利用实时荧光定量PCR和Western blot分析A549细胞及顺铂耐药的A549/DDP细胞SIRT1及Noxa m RNA和蛋白水平的表达差异。利用si RNA干扰技术抑制A549/DDP细胞的SIRT1表达,进而使用Cell Titer Blue试验、流式细胞术从细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡方面分析SIRT1沉默对A549/DPP细胞顺铂敏感性的影响。同时利用实时荧光定量PCR和Western blot分析SIRT1抑制对A549/DPP细胞Noxa表达的影响。结果 A549细胞和A549/DDP细胞对顺铂的敏感性有显著差异,与A549细胞相比,A549/DDP细胞的SIRT1表达较高,但Noxa表达较低。使用si RNA抑制A549/DPP细胞的SIRT1表达后,与未抑制SIRT1细胞相比,4μg/m L顺铂处理后的细胞存活率降低,G2期/M期阻滞比例增加,凋亡率提高。同时,SIRT1沉默导致A549/DPP细胞的Noxa表达增加。结论较高的SIRT1可能引起A549细胞对顺铂的耐药性,抑制SIRT1可以提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制可能涉及SIRT1对Noxa的调节。

bcl-2家族BH3-only蛋白在依托泊苷诱导胃腺癌细胞凋亡中的作用

目的研究bcl-2家族BH3-only蛋白Noxa、Bim和PUMA在依托泊苷诱导胃腺癌细胞凋亡中的作用。方法Annexin V-FITC染色,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测细胞中BH3-only蛋白的mRNA表达量。结果依托泊苷诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量、时间依赖性,SGC-7901细胞系比BGC-823更加敏感,100μM的依托泊苷作用48小时后SGC-7901的凋亡率达到50%,而BGC-823的凋亡率只有20%。BH3-only蛋白Noxa的mRNA表达明显上调,Bim少量上调与依托泊苷诱导的细胞凋亡有关系;相反,PUMA的mRNA表达量在依托泊苷治疗前后没有变化。结论依托泊苷诱导的胃腺癌细胞凋亡与BH3-only蛋白Noxa和Bim表达上调有关联。

胃癌组织中SIRT1、Noxa的表达及其临床意义

目的探讨SIRT1与Noxa在胃癌组织中的表达水平相关性,分析两者表达与患者临床病理学特征及预后的关系。方法应用实时荧光定量PCR法和免疫组化EnVision两步法检测106例胃癌及癌周正常组织中SIRT1及Noxa的mRNA和蛋白表达,分析两者相关性及其与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、浸润深度及转移等临床病理特征的关系。结果实时荧光定量PCR结果显示,胃癌组织中SIRT1 mRNA表达较高,Noxa mRNA表达较低。免疫组化结果显示,SIRT1在胃癌组织中的阳性率高于正常胃组织(79.2%vs 41.5%),Noxa在胃癌组织中的阳性率低于正常胃组织(43.3%vs 71.6%),差异有统计学意义(P<0.05)。SIRT1表达与肿瘤分化程度、肿瘤直径、浸润深度、淋巴结和远隔器官转移情况相关(P均<0.05),Noxa表达与肿瘤直径、浸润深度、淋巴结和远隔器官转移情况相关(P均<0.05)。胃癌组织中SIRT1与Noxa表达呈负相关。SIRT1阳性、Noxa阴性的患者2年生存率较低,其是预后较差的独立危险因素。结论 SIRT1和Noxa在胃癌的发生、发展中可能具有协同作用,联合检测两者的表达有助于判断患者的临床表现和预后。

PP2A的肿瘤抑制功能及与凋亡因子Noxa的关系

目的检测PP2A及Noxa蛋白在大肠癌癌组织和癌旁组织中的表达,探讨PP2A、Noxa在大肠癌发生、发展中的作用以及二者的相关性。方法采用免疫组织化学法检测40例大肠癌患者的癌组织(大肠癌组)及癌旁组织(癌旁组)PP2A、Noxa蛋白表达情况,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果大肠癌组PP2A与Noxa蛋白阳性表达率(90%、82.5%)明显低于癌旁组(95%、88.1%),P<0.05;大肠癌组PP2A、Noxa蛋白阳性表达在大肠癌组织分化程度、淋巴结转移差异有统计学意义(P<0.05);40例大肠癌组织中PP2A蛋白与Noxa蛋白表达之间呈正相关(r=0.229,P<0.05)。大肠癌癌细胞凋亡指数在癌细胞分化程度、淋巴结转移及临床分期上差异有统计学意义(P<0.05);大肠癌组PP2A、Noxa表达阴性者癌细胞凋亡指数均明显低于表达阳性者(P<0.05)。结论 PP2A、Noxa蛋白可能相互协同,在结直肠癌的发生、发展过程中发挥抑制作用。

P53、Noxa在血管性痴呆大鼠海马CA1区中表达及意义

目的观测P53、Noxa在血管性痴呆大鼠海马CA1区表达,探讨血管性痴呆的发病机制。方法经Morris水迷宫筛选出学习记忆能力处于正常值范围的雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组和模型组(各12只),采用双侧颈总动脉结扎法制备血管性痴呆大鼠模型,手术后2个月用Morris水迷宫观测各组大鼠在空间学习记忆方面的变化,HE染色观察各组大鼠海马CA1区锥体细胞形态学变化,免疫荧光染色检测P53、Noxa在海马CA1区锥体细胞的表达。结果模型组大鼠相对假手术组大鼠平均逃避潜伏期延长(P<0.01),空间记忆能力减退(P<0.01),海马CA1区神经细胞凋亡明显,P53、Noxa在海马CA1区表达的阳性细胞数明显升高(P<0.05),且直线相关分析显示Noxa的表达与P53的表达呈正相关(P<0.01)。结论海马CA1区P53和Noxa的表达升高在血管性痴呆发病机制中起重要作用。

Noxa蛋白在肝外胆管癌组织中的表达及其与临床病理的关系

目的研究Noxa蛋白在肝外胆管癌及正常组织中的表达,同时探讨其与患者临床病理因素的关系。方法收集2006年3月至2009年6月我院肝外胆管癌和正常组织各70例,并采取免疫组织化学(En VisionTM)法分别检测Noxa蛋白在肝外胆管癌组织及正常组织中的表达情况。结果 Noxa在肝外胆管癌组织、正常组织阳性表达率分别为32.86%(23/70)、68.57%(48/70),两者比较差异有统计学意义(χ2=17.86,P<0.01);肝外胆管癌组织Noxa的表达与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05),但与性别、年龄、肿瘤直径、组织学分化、浸润深度及神经受累无关(P>0.05);Noxa阳性表达的患者5年生存率低于Noxa阴性表达者[26.09%(6/23)vs 53.19%(25/47)],差异有统计学意义(χ2=4.59,P<0.05)。结论肝外胆管癌组织中Noxa蛋白的低表达不仅表明了癌细胞促凋亡能力的异常,而且也有利于预测淋巴结转移及临床分期的状态,同时也可作为判断患者预后的参考指标。

Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和促凋亡作用

目的探讨Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和促凋亡作用。方法利用脂质体将真核表达载体pIRES2-EGFP-Noxa瞬时转染至乳腺癌MCF-7细胞,通过RT-PCR检测转染后Noxa基因mRNA的表达,Western blot检测转染后蛋白的表达,MTT比色法测定细胞增殖的抑制,流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,Hoechst33342染色检测细胞的凋亡情况。结果 Noxa基因转染后在乳腺癌MCF-7细胞中成功表达。转染后mRNA及蛋白表达持续上升,其转染后24h、48h、72hmRNA的相对灰度值分别为(0.347±0.031)、(0.703±0.041)、(1.044±0.033),差异具有统计学意义(P<0.05)。转染24h、48h、72h后蛋白表达的相对灰度值为(1.171±0.086)、(1.013±0.088)、(0.886±0.063),差异具有统计学意义(P<0.05)。Noxa基因的表达使得乳腺癌MCF-7细胞出现增殖抑制,其24h、48h、72h抑制率分别为(23.9±4.2)%、(36.6±3.0)%、(47.0±3.3)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测显示MCF-7细胞DNA合成受到抑制,细胞周期主要抑制在G0/G1期。其转染24h、48h、72h的G0/G1期分别为(68.1±2.5)%、(72.6±1.5)%、(75.6±0.9)%,与阴性对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);其24h、48h、72h凋亡率分别为(11.5±0.9)%、(19.6±0.8)%、(25.4±0.7)%,组间差异有统计学意义(P<0.05)。Hoechst33342染色显示Noxa基因转染后细胞出现凋亡,其24h、48h、72h凋亡率分别为(7.3±4.1)%、(16.8±3.3)%、(23.8±2.3)%,与阴性对照组相比,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后能够抑制细胞增殖并促进其凋亡。

Noxa基因表达与肝细胞癌的关系

目的探讨Noxa基因与人肝癌的临床病理关系及对人肝癌Hep G2细胞的增殖抑制和促凋亡作用。方法采用免疫组化法检测100例肝癌组织及癌旁组织中Noxa蛋白的表达,结合其临床病理参数和随访资料进行统计学分析。同时利用脂质体将真核表达载体p IRES2-EGFP-Noxa瞬时转染至人肝癌Hep G2细胞,RT-PCR检测转染后Noxa基因m RNA的表达,Western blot法检测转染后Noxa蛋白表达,MTT比色法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果免疫组化检测结果显示肝癌组织中Noxa阳性率为50%,明显低于癌旁正常肝组织(78%),两组相比差异有显著性(P<0.05)。Noxa蛋白表达与肝癌分化程度及TNM分期有关(P<0.05)。Hep G2细胞中成功表达Noxa基因,转染后m RNA及蛋白表达随时间延长持续上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与其它各组相比,转染24、48、72 h后,其吸光度值逐渐升高(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示,其24 h、48 h、72 h凋亡率分别为(15.5±0.9)%、(24.6±0.8)%和(35.4±0.7)%,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Noxa表达与肝癌分化程度及TNM分期密切相关,其高表达可抑制人肝癌细胞Hep G2的增殖并促进其凋亡。

缺血皮质神经元DNA单链损伤引发Noxa表达的研究

目的:观察类缺血损伤神经元再灌注不同时间点DNA单链损伤情况和BH3-only家族成员Noxa的表达情况,初步研究DNA单链损伤与Noxa的表达关系。方法:应用β-Tubulin及Gap-43对培养的皮质神经元进行鉴定,利用流式细胞仪对培养的皮质神经元类缺血再灌注损伤后Noxa的表达情况进行研究。DNA聚合酶-ⅠKlenow片段介导的dATP-生物素切口末端标记方法(Klenow法)对缺血再灌注各时间点培养的神经元进行检测,并应用图象分析仪对Klenow法检测的结果进行平均灰度检测。结果:应用β-Tubulin及Gap-43培养的神经元80%为纯神经元,给予神经元类缺血处理后,在再灌注不同时间点Noxa的表达为在再灌注0.5,1h最强,而后随着再灌注时间的延长,Noxa的表达下降。Klenow法检测发现未经缺血处理的对照组神经元平均灰度为72.4±1.0,到达2h达高峰135.5±1.3,而后又逐渐降低,24h几乎看不到阳性细胞。结论:培养的皮质神经元类缺血再灌注处理后有Noxa的表达,在再灌注0.5h和1h为Noxa的表达高峰,DNA单链损伤高峰为2h,Noxa的表达高峰时间点早于DNA单链损伤高峰的时间点,说明NOXA的表达可能还有其他形式的DNA损伤介入。

USP18促进溶瘤病毒诱导的肝癌细胞凋亡机制

NDV感染肝癌细胞后,能够诱导细胞的凋亡,在NDV感染肝癌细胞Huh7之后,能够诱导一种去泛素化酶USP18的表达显著上调.为了探究USP18在NDV诱导的肝癌细胞的凋亡过程中起什么作用,以肝癌细胞系Huh7为实验体系,以western blot蛋白免疫印迹和定量PCR为主要方法.在细胞中过表达USP18,发现其能够明显促进肝癌细胞的凋亡,这表明USP18具有抗癌的功能.反之,敲低细胞中USP18的表达水平,能够有效地抑制NDV诱导的肝癌细胞凋亡.进一步揭示了USP18促进NDV诱导的细胞凋亡的机制,USP18上调了定位于线粒体上的Bax的蛋白水平,Bax能与Bak在线粒体外膜上形成孔道,增加线粒体外膜的通透性,从而促进凋亡蛋白细胞色素C的释放.同时,USP18还能诱导NOXA切割效应凋亡蛋白Caspase-7,进一步促进细胞凋亡.此外,USP18上调干扰素刺激基因ISG12a(IFN-stimulated gene 12a)的蛋白水平,抑制ISG12a的泛素化降解,这也是从另一个角度解释了其促进凋亡作用.

NOXA、PUMA等基因在乳腺癌中的表达及其意义

目的比较癌组织与正常组织中MDM2、PCNA、NOXA、PUMA表达的差异,了解乳腺癌与表达的关系.方法通过SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌组织和正常乳腺组织中MDM2、PCNA、NOXA、PUMA 4个基因的含量.结果 (1)NOXA、和PUMA在乳腺癌组织中表达升高(P<0.05);(2)PCNA和NOXA的表达存在正相关关系(r=0.82,P<0.05));PCNA和MDM2的表达存在正相关关系(r=0.80,P<0.05);PUMA和MDM2的表达存在正相关关系(r=0.82,P<0.05).结论 NOXA、PUMA在乳腺癌组织中处于高表达状态,4个基因表达与乳腺癌有关.

硼替佐米联合三氧化二砷诱导NB4细胞凋亡及相关机制的研究

本研究旨在探索硼替佐米(bortezomib)联合三氧化二砷(As2O3)诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株的凋亡及相关调控机制。用流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡;Hoechst染色法观察凋亡细胞形态;Western blot检测caspase-3,caspase-9的活化以及NOXA蛋白的表达;以小干扰RNA(siRNA)技术特异性"沉默"NOXA基因;用脂质体Lipofectamine2000转染pEGFP-Noxa质粒和空载体pEGFP。结果表明,bortezomib(10 nmol/L)联合As2O3(0.5μmol/L)诱导NB4细胞凋亡率较单药As2O3(0.5μmol/L)诱导时增加,相应的caspase-3,-9的活化明显加强。单药As2O3诱导的NB4细胞中Noxa蛋白水平未发生改变,bortezomib和As2O3联合诱导的NB4中NOXA蛋白水平上调。特异性"沉默"NOXA基因后bortezomib和As2O3联合诱导的NB4细胞中caspase-3的活化程度降低,细胞凋亡率也明显下降。通过转染质粒高表达NOXA蛋白,单药As2O3诱导的NB4细胞中caspase-3的活化程度增加。结论:bortezomib可以增加NB4细胞对As2O3诱导凋亡的敏感性,这可能和促凋亡蛋白NOXA的表达上调有关。

二氢杨梅素联合顺铂显著诱导PC3细胞中Noxa和Bim过表达

目的:探讨二氢杨梅素对前列腺癌顺铂化疗的辅助作用并研究其机制。方法:MTT法检测前列腺癌细胞系LNCaP和PC3在不同浓度二氢杨梅素和顺铂处理下的细胞活力。Western blot实验检测顺铂和二氢杨梅素联用对PC3细胞FOXO1、Noxa和Bim表达水平、细胞色素C从线粒体中的释放及caspase-9和caspase-3活化水平的影响。免疫共沉淀实验检测PC3细胞中凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)和caspase-9的相互作用。流式细胞术检测PC3细胞的凋亡率。结果:二氢杨梅素辅助治疗可明显提高顺铂对前列腺癌的体外抗肿瘤活性(P<0.05)。二氢杨梅素处理能显著促进PC3细胞FOXO1的表达,转染FOXO1小干扰RNA(siRNA)后,二氢杨梅素对顺铂的辅助治疗效果受到明显抑制。二氢杨梅素联合顺铂能显著诱导PC3细胞中Noxa和Bim的过表达,细胞色素C的释放,Apaf-1和caspase-9的相互作用,caspase-9和caspase-3的活化及凋亡的发生。转染FOXO1 siRNA后,二氢杨梅素联合顺铂对PC3细胞的凋亡诱导途径受到显著抑制。结论:二氢杨梅素可能通过FOXO1-Bim/Noxa途径增强顺铂对前列腺癌细胞的体外杀伤活性。

Noxa在凋亡中的作用及机制

Noxa是内源性途径凋亡中Bc l-2家族促凋亡的BH3-on ly亚家族成员之一,在诱导细胞凋亡中起重要作用。它通过定位于线粒体,引起线粒体释放细胞色素C以形成凋亡体,启动caspase级联反应而诱导细胞发生凋亡。Noxa的表达主要受p53调控,但是多种刺激因子可以通过p53或者不依赖p53等多种途径诱导Noxa表达上调,最后由Noxa来诱导细胞发生凋亡。

电针治疗血管性痴呆对海马CA1区Noxa、Caspase-3表达的影响

为探讨电针对血管性痴呆(Vascular dementia,VD)大鼠的学习记忆能力的影响及其作用的分子机制。采用双侧颈总动脉永久性结扎法制作VD大鼠模型,Morris水迷宫检测大鼠平均逃避潜伏期和搜索策略,HE染色观察海马的病理变化,免疫荧光染色观测海马神经元细胞Noxa、Caspase-3的表达。结果:电针治疗改善VD大鼠的学习记忆能力,减轻VD大鼠海马病理损害,减少VD大鼠的海马CA1区Noxa、Caspase-3表达阳性细胞数(P<0.01)。说明电针治疗改善海马神经元的凋亡状况,从而促进智能恢复。

胃癌组织中SIRT1和Noxa的表达及其临床意义研究

目的探讨SIRT1与Noxa在胃癌组织中的表达及其与临床特征及预后的关系。方法选取106例胃癌患者,检测其体内胃癌组织中SIRT1的表达情况与NoxamRNA的水平,分析SIRT1与Noxa在胃癌组织中的表达与患者临床特征及预后的关系。结果胃癌组织中SIRTmRNA表达较高,NoxamRNA表达较低,且两者都与临床特征及预后有不同程度的相关性。结论SIRT1与Noxa在胃癌组织中的表达对判断胃癌患者的临床特征及预后具有重要意义。

Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后的体外实验研究

目的:探讨Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后对MCF-7细胞的影响。方法:利用脂质体将真核表达载体pIRES2-EGFP-Noxa瞬时转染至乳腺癌MCF-7细胞。通过RT-PCR检测转染后mRNA的表达情况。MTT比色法测定细胞增殖的抑制。Hoechst33342检测细胞的凋亡情况。结果:Noxa基因转染后在乳腺癌MCF-7细胞中成功表达,其转染后24、48、72h后mRNA表达量逐渐增高。Noxa基因的表达使得乳腺癌MCF-7细胞出现增殖抑制,其24、48、72h抑制率之间的差异具有显著性(P<0.05)。Hoechst33342染色显示Noxa基因转染后细胞出现凋亡,其24、48、72h凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P<0.05)。结论:Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后能够抑制细胞增殖并促进其凋亡。

Noxa的促凋亡作用与肿瘤关系的研究进展

Noxa是Bcl-2家族中促凋亡的BH3-only亚家族成员之一,是p53的下游靶基因,其表达主要受p53调控。它定位于线粒体,其BH-3结构域主要与Mcl-1结合,启动caspase级联反应,诱导细胞凋亡。Noxa可以通过p53依赖途径及p53非依赖途径促进细胞凋亡,在肿瘤的形成和治疗中发挥着重要作用。