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猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白1α(nsp1α)的N端锌指结构是其抑制NLRP3炎症小体活性所必需 被引量:1
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作者 王超 史西保 +5 位作者 王丽 陈静 司朝朝 王爱萍 邓瑞广 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2032-2039,共8页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害养猪业的病毒性传染病之一,其致病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抑制宿主的天然免疫和特异性免疫反应,引起机体免疫抑制,造成持续性感染,从而给该病的防控带来困难。NLRP3炎症小体作为先天性免疫... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害养猪业的病毒性传染病之一,其致病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抑制宿主的天然免疫和特异性免疫反应,引起机体免疫抑制,造成持续性感染,从而给该病的防控带来困难。NLRP3炎症小体作为先天性免疫的重要组分在机体抗病毒中发挥重要作用。前期研究发现PRRSV能够激活NLRP3炎症小体,但PRRSV是否存在拮抗NLRP3炎症小体的组分还未见报道。本研究首先在缺失内源性炎症小体的HEK293T细胞中,共转染NLRP3、ASC、procaspase-1和pro-IL-1β四个真核表达质粒,建立NLRP3炎症小体的体外研究模型。然后,在该炎症小体模型细胞和猪肺泡巨噬细胞中,转染PRRSV nsp1α的真核表达质粒,结果表明nsp1α能够明显拮抗炎症小体的活化,而进一步的突变试验表明缺失N端锌指(ZF)结构或者突变ZF结构的nsp1α均不能抑制NLRP3炎症小体活化。本研究不仅首次发现了拮抗NLRP3炎症小体活化的PRRSV蛋白——nsp1α,而且发现nsp1α的N端锌指结构是其抑制NLRP3炎症小体活性所必需。本研究进一步发现了PRRSV拮抗天然免疫的新机制,并为PRRSV的防控提供了潜在的分子靶点和理论指导。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp1α ZF结构域 NLRP3炎症小体 IL-1Β
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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒非结构蛋白nsp1α的表达及活性检测 被引量:3
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作者 司朝朝 史西保 +7 位作者 李恭贺 乔松林 王丽 李青梅 王超 陈静 王寅彪 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第1期126-129,共4页
为获得具有活性的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白1α(nsp1α),以BJ-4PRRSV nsp1α真核表达质粒pc DNA3.1-nsp1α为模板扩增nsp1α,克隆到原核表达载体p ET-28a,1 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导含有重组质粒的大肠杆... 为获得具有活性的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白1α(nsp1α),以BJ-4PRRSV nsp1α真核表达质粒pc DNA3.1-nsp1α为模板扩增nsp1α,克隆到原核表达载体p ET-28a,1 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导含有重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)。SDS–PAGE结果显示,nsp1α以包涵体形式高效表达,重组蛋白大小约为20 ku;Western blot结果显示,表达的重组蛋白能与小鼠抗His标签单克隆抗体反应;包涵体蛋白复性后,ELISA方法检测结果显示,重组蛋白能与1∶6 400稀释的PRRSV阳性血清反应。表明成功表达了nsp1α蛋白,且表达的重组蛋白具有较好的免疫学活性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 非结构蛋白 重组蛋白 免疫学活性
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新型冠状病毒Nsp1基因真核表达载体的构建及对宿主蛋白质翻译的影响
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作者 王宏宇 田志飘 +8 位作者 刘红线 郑亮 于雯 吴志军 Matthew Kay 高振秋 曹宏伟 耿荣庆 张华 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第1期84-90,共7页
非结构蛋白1(Non-structural protein 1,Nsp1)作为新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)的毒力决定因子,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为更有效地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的生物学功能,成... 非结构蛋白1(Non-structural protein 1,Nsp1)作为新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)的毒力决定因子,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为更有效地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的生物学功能,成功构建SARS-CoV-2Nsp1基因的真核表达载体,并验证其抑制宿主及外源蛋白质翻译的功能。通过PCR技术扩增SARS-CoV-2Nsp1基因后,利用同源重组技术将其连接至pEGFP-N1载体上。经双酶切和测序结果鉴定,SARS-CoV-2Nsp1基因成功克隆至pEGFP-N1载体上。将重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1转染至HEK-293T细胞和HeLa细胞中,经嘌呤霉素标记后,利用Western Blot和考马斯亮蓝染色检测重组质粒的表达以及嘌呤霉素信号。结果表明,重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1在HEK-293T细胞和HeLa细胞中成功表达,并验证其抑制宿主蛋白质和外源转入细胞蛋白质的翻译,为更深入研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的功能奠定基础。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 nsp1基因 真核载体构建 蛋白翻译
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盖塔病毒非结构蛋白NSP1多克隆抗体的制备及鉴定
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作者 张洁 李超凡 +1 位作者 翟晓风 粟硕 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第3期79-83,共5页
试验旨在获得能够特异性识别盖塔病毒(Getah virus, GETV)非结构蛋白NSP1的抗体,用于鉴定NSP1蛋白及其分布。采用RT-PCR技术扩增GETV的非结构蛋白NSP1基因,构建了NSP1蛋白的原核表达质粒pET-NSP1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)诱导大量表达... 试验旨在获得能够特异性识别盖塔病毒(Getah virus, GETV)非结构蛋白NSP1的抗体,用于鉴定NSP1蛋白及其分布。采用RT-PCR技术扩增GETV的非结构蛋白NSP1基因,构建了NSP1蛋白的原核表达质粒pET-NSP1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)诱导大量表达。纯化原核表达的目的蛋白,免疫BALB/c小鼠,制备了NSP1蛋白的多克隆抗体,间接ELISA效价达1∶10^(5)以上。Western blot和免疫荧光试验(IFA)结果显示,NSP1蛋白多克隆抗体与GETV有良好的反应性。NSP1蛋白多克隆抗体的制备,为进一步研究该蛋白在盖塔病毒复制周期中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 多克隆抗体 nsp1基因 非结构蛋白 盖塔病毒
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利用反向遗传技术产生表达外源基因的重组SA11轮状病毒
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作者 柴萨萨 蔡昊 +6 位作者 刘夏飞 赵静 宋敬东 李金松 裴银辉 李利利 段招军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期140-146,共7页
目的利用反向遗传技术产生NSP1基因插入和表达外源基因的重组SA11轮状病毒,构建可表达外源基因的轮状病毒载体。方法本研究将轮状病毒SA11株的NSP1基因片段的223位(5端)至1388位的核苷酸删除,并直接插入连接了终止-再启动元件(P2A)的增... 目的利用反向遗传技术产生NSP1基因插入和表达外源基因的重组SA11轮状病毒,构建可表达外源基因的轮状病毒载体。方法本研究将轮状病毒SA11株的NSP1基因片段的223位(5端)至1388位的核苷酸删除,并直接插入连接了终止-再启动元件(P2A)的增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因,采用已建立的“12质粒”轮状病毒反向遗传系统拯救NSP1基因插入和表达EGFP的重组SA11轮状病毒。通过观察细胞病变效应和插入基因(EGFP)的荧光表达初步确定重组病毒的成功拯救,再结合电镜的形态学观察、RT-PCR的测序结果及病毒基因组的检测结果,进一步证明重组轮状病毒的成功拯救和传代扩增。利用TCID 50法和qRT-PCR法,测定了rSA11和rSA11/NSP1-EGFP的病毒滴度并绘制了基因组复制动力曲线。结果基于“12质粒系统”成功拯救了重组轮状病毒rSA11/NSP1-EGFP,证明NSP1片段截短并插入外源基因后病毒仍可正常复制,且具有良好的遗传稳定性,但病毒滴度低于其亲本株。结论基于NSP1基因插入和表达EGFP的重组轮状病毒能够实现稳定遗传,为利用反向遗传学构建表达外源基因的轮状病毒载体的深入探索提供了基础。 展开更多
关键词 A组轮状病毒 反向遗传 外源基因 nsp1基因
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC 30株的NSP 1分析
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作者 吕晨 程宏玮 +2 位作者 蔡佳欣 沙惠阳 赵孟孟 《现代牧业》 2023年第4期1-7,共7页
研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30株的NSP 1基因的生物信息。NSP 1基因全长1149 bp。NSP 1基因编码的蛋白质具有383个氨基酸,分子质量为43.2 kDa,等电点(pI)为8.95,属于疏水性蛋白,不稳定系数为51.21,属于不稳定蛋白,没有信号... 研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30株的NSP 1基因的生物信息。NSP 1基因全长1149 bp。NSP 1基因编码的蛋白质具有383个氨基酸,分子质量为43.2 kDa,等电点(pI)为8.95,属于疏水性蛋白,不稳定系数为51.21,属于不稳定蛋白,没有信号肽和跨膜螺旋结构。NSP 1基因编码的蛋白质具有多个强抗原性位点,亚细胞定位预测表明抗原性位点可能位于细胞质中。遗传进化分析显示,基因编码蛋白序列相对保守,没有发生氨基酸插入或缺失。NADC30株与SD-A19株的遗传距离较近,但与CHsx1401株的遗传距离较远。 展开更多
关键词 NADC30 nsp 1 生物信息 序列分析
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牛轮状病毒UK株NSP1基因序列分析及原核表达 被引量:2
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作者 冉旭华 曹思 +4 位作者 张峣 魏晓曼 闻晓波 倪宏波 朱战波 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第5期1104-1109,共6页
轮状病毒是引起多种幼龄动物及5周龄以下儿童腹泻的主要病原体。NSP1非结构蛋白是轮状病毒基因5的产物,为长约55ku的RNA结合蛋白。现已发现NSP1蛋白是一种毒力决定因子,可颉颃宿主先天性免疫应答。参照GenBank收录的牛轮状病毒UK株序列... 轮状病毒是引起多种幼龄动物及5周龄以下儿童腹泻的主要病原体。NSP1非结构蛋白是轮状病毒基因5的产物,为长约55ku的RNA结合蛋白。现已发现NSP1蛋白是一种毒力决定因子,可颉颃宿主先天性免疫应答。参照GenBank收录的牛轮状病毒UK株序列设计并合成1对特异性引物,本试验利用RT-PCR方法扩增牛轮状病毒UK株NSP1基因,克隆入pET-28a(+)表达载体,经双酶切和测序鉴定,并利用分子生物学软件进行同源性比对分析。本试验结果显示获得的NSP1基因全长编码区序列为1 473bp,编码491个氨基酸,与美国WC3株同源性最高。将阳性重组质粒转入E.coli Rosetta(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析,结果表明重组蛋白分子质量约为55ku,以包涵体形式表达,可与鼠抗His-tag抗体反应。本试验成功获得牛轮状病毒UK株NSP1基因,且实现了在原核表达系统中高效表达重组蛋白,本试验结果为研究NSP1蛋白在细胞内定位与其活性之间的相互关系奠定了基础。 展开更多
关键词 牛轮状病毒UK株 nsp1 序列分析 原核表达
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轮状病毒非结构蛋白NSP1与宿主的相互作用 被引量:1
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作者 刘凯军 李晋涛 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期563-565,共3页
轮状病毒(rotavirus,RV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NSP1)是轮状病毒逃避宿主天然免疫应答的关键蛋白质。它可以与干扰素调控因子家族(interferon regulatoryfactor family,IRFF)的共同区域结合,阻断干扰素表达的信号通路,降... 轮状病毒(rotavirus,RV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NSP1)是轮状病毒逃避宿主天然免疫应答的关键蛋白质。它可以与干扰素调控因子家族(interferon regulatoryfactor family,IRFF)的共同区域结合,阻断干扰素表达的信号通路,降低宿主细胞I型干扰素(type I interferon,IFN-I)的表达,从而抑制宿主天然抗病毒免疫机制的建立。因此,NSP1被认为是轮状病毒的一种重要毒力因子。本文综述了近年来轮状病毒NSP1与宿主相互作用的研究进展。 展开更多
关键词 轮状病毒 nsp1 天然免疫
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马尾松毛虫质型多角体病毒NSP1蛋白在昆虫细胞表达及定位
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作者 靳亮 许翠萍 +5 位作者 王金昌 关丽梅 张稳超 黄朝 高学梅 王洪秀 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期208-214,共7页
马尾松毛虫质型多角体病毒(Dendrolimus punctatus cytoplasmic polyhedrosis virus,Dp CPV)基因组S5片段编码一个由881个氨基酸组成、分子量为101 k D的非结构蛋白(NSP1)。为探寻Dp CPV NSP1蛋白的功能,将Dp CPV 1基因组S5-1片段的抗原... 马尾松毛虫质型多角体病毒(Dendrolimus punctatus cytoplasmic polyhedrosis virus,Dp CPV)基因组S5片段编码一个由881个氨基酸组成、分子量为101 k D的非结构蛋白(NSP1)。为探寻Dp CPV NSP1蛋白的功能,将Dp CPV 1基因组S5-1片段的抗原区(1-600 bp)进行了原核表达,并将纯化蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。将稀释后的病毒液感染甜菜夜蛾幼虫,感染后每天解剖甜菜夜蛾并取中肠样品,通过Western blot检测NSP1蛋白的合成时间曲线。Western blot检测结果显示,S5片段表达的蛋白在病毒感染第1天就有合成,并且除了检测到全长的蛋白(101 k D)外,也检测到了80 k D和20 k D的蛋白条带,说明NSP1蛋白为早期表达蛋白,并且蛋白发生了切割。另外,首次对Dp CPV 1 S5片段进行了在昆虫细胞中表达和昆虫亚细胞定位,结果显示,昆虫细胞定位于细胞的细胞质。 展开更多
关键词 马尾松毛虫质型多角体病毒 nsp1 抗体制备 真核表达 细胞定位
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp1蛋白锌指结构1(ZF1)突变体的构建及活性鉴定
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作者 赵鹏伟 吴家强 +8 位作者 杜以军 李俊 孙文博 丛晓燕 时建立 彭军 于江 刘月月 王金宝 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期1-6,共6页
本试验旨在构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)SX-1株非结构蛋白Nsp1的真核表达质粒,并对Nsp1蛋白锌指结构1(ZF1)进行定点突变,检测其在真核细胞中的表达活性。利用TRIzol法提取总RNA,RT-PCR扩增Nsp1目的基因,经双酶切构建pC... 本试验旨在构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)SX-1株非结构蛋白Nsp1的真核表达质粒,并对Nsp1蛋白锌指结构1(ZF1)进行定点突变,检测其在真核细胞中的表达活性。利用TRIzol法提取总RNA,RT-PCR扩增Nsp1目的基因,经双酶切构建pCI-neo-Nsp1真核表达质粒后对Nsp1蛋白锌指结构1的8C、10C、25C和28C的4个位点进行定点突变,成功获得分别突变为A和S的8个突变体。转染HeLa细胞,通过间接免疫荧光方法(IFA)和Western blotting检测Nsp1蛋白的活性。IFA结果显示,Flag抗体检测时蛋白质主要分布在细胞质和细胞核中,Myc抗体检测时蛋白质主要分布在细胞核中。Western blotting结果显示,Flag抗体检测时,S突变体出现大小约为44和20ku条带,A突变体出现约为44ku条带;Myc抗体检测时,S突变体出现大小约为44和27ku条带,A突变体出现大小约为44ku条带。试验结果表明,本试验成功构建了Nsp1突变体的真核表达质粒,证实其能在真核细胞中表达,为进一步研究Nsp1蛋白的锌指结构是否对机体Ⅰ型IFN产生起下调作用提供基础。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒SX-1 nsp1 突变体构建 活性鉴定
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人B组轮状病毒WH-1株NSP2基因片段的克隆与序列分析
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作者 唐少文 叶临湘 +3 位作者 王斌 郑华英 李燕 杨继红 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期109-112,共4页
目的 了解人B组轮状病毒近 2 0年来基因变异情况 ,为轮状病毒疫苗的研制提供依据。方法 利用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,扩增人B组轮状病毒WH - 1株NSP2基因 4 89bp的片断 ,并将其克隆到载体 pUCmT ,转化感受态细胞One-shot... 目的 了解人B组轮状病毒近 2 0年来基因变异情况 ,为轮状病毒疫苗的研制提供依据。方法 利用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,扩增人B组轮状病毒WH - 1株NSP2基因 4 89bp的片断 ,并将其克隆到载体 pUCmT ,转化感受态细胞One-shotTop10F’ ,提取转化菌质粒经限制性内切酶PstI酶切分析 ,筛选出阳性菌提取质粒 ,对插入片段进行了测序和核苷酸序列分析。结果 利用GeneBee与其他B组轮状病毒株ADRV(人 )、CAL - 1(人 )及IDIR(鼠 )的NSP2基因进行同源性比较 ,发现毒株WH - 1与ADRV核苷酸序列的同源性达 99 8% ,与CAL - 1达 93 7% ,与IDIR(鼠 )的同源性为80 0 %。使用PredictProtein软件分析WH - 1NSP2的蛋白组成 ,发现其编码的 14 9个氨基酸组成的多肽中 ,含有 1个潜在的N -糖基化位点和多个磷酰化位点。从氨基酸序列的同源性看 ,WH - 1与ADRV的同源性达 99 3% ,与CAL - 1达 98 6 % ,而与IDIR为 86 2 %。结论 WH - 1与ADRV的起源相同 ,且B组轮状病毒NSP2基因保守性很高。对人B组轮状病毒NSP2基因序列分析将有助于B组轮状病毒的流行病学、基因进化以及轮状病毒疫苗的研制都将有重要意义。 展开更多
关键词 人B组轮状病毒 WH-1nsp2 基因片段 克隆 序列分析
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百脉根结瘤信号通道蛋白NSP1和NSP2的相互作用 被引量:4
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作者 胡晓晶 储晓洁 +2 位作者 康恒 朱辉 张忠明 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期132-137,共6页
豆科植物百脉根是研究共生固氮体系的模式植物之一,对其根瘤菌共生信号转导途径和作用机制的研究,有助于揭示根瘤菌与豆科植物共生关系建立和共生体形成的奥秘。本研究利用酵母双杂交系统和体外蛋白质相互作用技术,证明百脉根GARS类家... 豆科植物百脉根是研究共生固氮体系的模式植物之一,对其根瘤菌共生信号转导途径和作用机制的研究,有助于揭示根瘤菌与豆科植物共生关系建立和共生体形成的奥秘。本研究利用酵母双杂交系统和体外蛋白质相互作用技术,证明百脉根GARS类家族转录因子结瘤信号通道蛋白NSP1和NSP2在体外体内均可以相互作用,并将相互作用的位点定位在NSP1的GRAS结构域的LHRII区域和NSP2的LHRI区内。 展开更多
关键词 百脉根 结瘤信号通道蛋白nsp1 结瘤信号通道蛋白nsp2 共生信号转导 酵母双杂交
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猪流行性腹泻病毒NSP1蛋白在细胞器中定位特性
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作者 季朝阳 张莎 +4 位作者 石达 陈建飞 时洪艳 张鑫 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期842-844,共3页
为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)非结构蛋白1(NSP1)在Vero E6细胞中的分布和亚细胞定位情况,本研究采用RT-PCR方法扩增NSP1基因,并将其克隆至真核表达载体pAcGFP-C1中构建重组质粒pAcGFPNSP1。将pAcGFP-NSP1转染至Vero E6细胞中进行瞬时表... 为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)非结构蛋白1(NSP1)在Vero E6细胞中的分布和亚细胞定位情况,本研究采用RT-PCR方法扩增NSP1基因,并将其克隆至真核表达载体pAcGFP-C1中构建重组质粒pAcGFPNSP1。将pAcGFP-NSP1转染至Vero E6细胞中进行瞬时表达,并收集转染后48 h的细胞进行western blot检测。通过激光共聚焦显微镜观察NSP1在细胞中的定位情况。结果表明,NSP1在Vero E6细胞中表达,其主要定位于细胞质中,与细胞中的线粒体、内质网、高尔基体均呈现高度共定位。本研究在Vero E6细胞中表达了PEDV NSP1蛋白,并首次对其亚细胞定位进行了解析,为进一步了解病毒的复制及其致病机制的研究提供了依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 nsp1 VERO E6细胞 亚细胞定位
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轮状病毒非结构蛋白NSP1与干扰素调节因子结合结构域的分析
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作者 邢家强 李佳林 +5 位作者 贺倩 李宏斌 于梅 林杰 窦强 魏至栋 《微生物学免疫学进展》 2016年第3期23-28,共6页
目的同源模建轮状病毒NSP1 C末端效应区及干扰素调节因子IRF3、IRF5、IRF7结合结构域(IAD)的三维结构,应用分子对接的方法,预测NSP1与IRF的候选结合氨基酸残基。方法以Prot Scale进行疏水性分析,APBS进行表观静电势的分析,采用MODELLE... 目的同源模建轮状病毒NSP1 C末端效应区及干扰素调节因子IRF3、IRF5、IRF7结合结构域(IAD)的三维结构,应用分子对接的方法,预测NSP1与IRF的候选结合氨基酸残基。方法以Prot Scale进行疏水性分析,APBS进行表观静电势的分析,采用MODELLER程序进行三维结构的预测,对NSP1 C末端效应区和IRF3、IRF5、IRF7的IAD应用PLATINUM程序进行分子对接,寻找它们的结合位点。结果 NSP1与IRF3、IRF5、IRF7的作用表现为2个不同类型,其中NSP1与IRF3的作用位点集中在效应区LEU 3~ARG 67一个较大范围内;作用方式呈现多样性(疏水作用、芳香共轭作用以及氢键作用);NSP1与IRF5、IRF7的作用位点集中在效应区SER74~GLU87一个较小的范围内,作用方式也表现为单一的氢键作用。结论应用计算机模拟技术预测了NSP1和IRF3、IRF5、IRF7的作用方式及结合位点,为进一步研究NSP1对IRF的作用提供一些新的思路。 展开更多
关键词 nsp1 干扰素调控因子家族(IRFs) 三维结构 同源模建 分子对接
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新冠病毒Nsp1蛋白结构与功能的生物信息学分析及原核表达 被引量:2
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作者 刘玲 李璟 +7 位作者 范蕾 宣焱 杜淼 张德玖 李卓禧 陈晓聪 杨娅男 徐本锦 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期566-576,共11页
目的Nsp1是新冠病毒的主要毒力因子,介导了病毒在宿主细胞中的免疫逃逸,扩大了病毒感染范围。本研究对Nsp1进行系统生信分析及原核表达,有助于全面理解该蛋白在新冠病毒侵染宿主细胞中的分子机理。方法采用Pfam、TMHMM、ProtScale、ExP... 目的Nsp1是新冠病毒的主要毒力因子,介导了病毒在宿主细胞中的免疫逃逸,扩大了病毒感染范围。本研究对Nsp1进行系统生信分析及原核表达,有助于全面理解该蛋白在新冠病毒侵染宿主细胞中的分子机理。方法采用Pfam、TMHMM、ProtScale、ExPASy和SignalP 4.0等工具对Nsp1的翻译后修饰、理化性质、跨膜螺旋、相互作用网络、同源性及进化特点等进行系统分析;利用分子克隆技术构建重组表达载体pET-22b-Nsp1并进行原核表达。结果Nsp1由180个氨基酸组成,分子量19.78 kDa,等电点为5.36,不稳定指数28.83,在哺乳动物中的半衰期约30 h,在大肠杆菌内超过10 h,有12个可能的磷酸化位点和3个O-糖基化位点,无信号肽和跨膜螺旋,亲水性较强;二级结构分析显示,Nsp1中无规则卷曲占比最高(45.00%),其次是α螺旋(25.56%)和延伸链(20.56%),β-转角占比最低(8.89%);序列对比和进化分析显示,与SARS-CoV-2 Nsp1序列一致性最高的是蝙蝠非典型冠状病毒WIV1(85.0%);原核表达发现Nsp1主要在沉淀中表达,经质谱鉴定目的蛋白就是Nsp1。结论本研究为新冠病毒Nsp1的表达、纯化及功能分析提供了重要借鉴,有助于进一步揭示Nsp1的生物学功能及开展相关抑制剂和抗病毒药物的研发。 展开更多
关键词 新冠病毒 nsp1蛋白 生信分析 结构与功能 进化分析
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基孔肯雅病毒nsP1单克隆抗体制备及其在快速检测中的应用
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作者 周婷婷 杨展 +3 位作者 常永和 周东明 朱进 郑峰 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2022年第2期136-140,共5页
目的基孔肯雅病毒(CHIKV)广泛分布于非洲、南亚以及东南亚地区。文章拟制备抗CHIKV nsP1蛋白单克隆抗体,建立CHIKV的现场快速检测方法。方法合成nsP1编码基因序列,构建原核表达载体pET28a-nsP1,大肠埃希菌表达并纯化获得重组nsP1蛋白,... 目的基孔肯雅病毒(CHIKV)广泛分布于非洲、南亚以及东南亚地区。文章拟制备抗CHIKV nsP1蛋白单克隆抗体,建立CHIKV的现场快速检测方法。方法合成nsP1编码基因序列,构建原核表达载体pET28a-nsP1,大肠埃希菌表达并纯化获得重组nsP1蛋白,免疫小鼠后用常规方法制备筛选可稳定分泌nsP1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.SDS-PAGE和ELISA鉴定抗体特异性,并建立免疫学检测方法。结果成功获得了6株阳性细胞株,纯化和筛选得到特异性良好的抗nsP1配对单克隆抗体,建立的双抗夹心ELISA法能特异性检测nsP1抗原,并在此基础上建立了可快速检测CHIKV的胶体金免疫层析方法。结论成功建立了针对CHIKV抗原的免疫学检测方法,为CHIKV感染早期诊断增加了技术储备。 展开更多
关键词 基孔肯雅病毒 nsp1蛋白 单克隆抗体 胶体金
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通过猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp1β的晶体结构揭示了一种新的金属依赖核酸酶
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作者 Xue F 胡小华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第6期98-98,共1页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductiveand respiratory syndrome virus,PRRSV)属于套式病毒目(Nidovirales),动脉炎病毒科(Arteriviridae),是猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrom,PRRS)的病原,PRR... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductiveand respiratory syndrome virus,PRRSV)属于套式病毒目(Nidovirales),动脉炎病毒科(Arteriviridae),是猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrom,PRRS)的病原,PRRS的流行给养猪业造成了巨大的经济损失。作为PRRSV基因组编码的第2个蛋白质,Nsp1可以通过C末端的木瓜蛋白酶样半胱氨酸蛋白酶(papain-likecysteine protease,PCP)将自己从Nsp2下游切割下来。虽然已知Nsp1与病毒毒力有关,但其在病毒感染过程的确切作用仍不清楚。本试验描述了PRRSV Nsp1天然的同型二聚体晶体结构,通过采用一个类似组装了几个已知核酸酶的折叠(其在体外用锰离子可激发较强的核酸酶活性)来研究了PRRSV Nsp1N末端的体系结构。通过标记的核酸酶,识别Nsp1的关键特性:具有C端木瓜蛋白酶样半胱氨酸蛋白酶区域(负责将Nsp1β从Nsp2上自行解离下来),连接NTD和PCP的接头(LKD),以及C末端的延展区(CTE),推测其位于PCPβ区域的结合位点相对较稳定。综合以往关于核定位的报道,多关注于Nsp1β的自处理模式及预测生物学功能,本研究为开发多靶位新药提供了模板。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非结构蛋白nsp1β 核酸酶 晶体结构
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猪流行性腹泻病毒nsp1、nsp5和N蛋白的重组腺病毒载体的构建及免疫原性比较
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作者 杨霞 王爽云 +8 位作者 于林洋 徐舸 郑继豪 王志朋 张歆明 刘燕玲 张乐宜 徐铮 宋长绪 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第3期73-78,共6页
为研究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)nsp1、nsp5和N蛋白的免疫原性,试验以复制缺陷型人腺病毒5型(AdMax系统)为载体,利用PEDV-GDgh毒株(登录号为MG983755),通过PCR方法扩增出GDgh毒株nsp1、nsp5、N基因,并将... 为研究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)nsp1、nsp5和N蛋白的免疫原性,试验以复制缺陷型人腺病毒5型(AdMax系统)为载体,利用PEDV-GDgh毒株(登录号为MG983755),通过PCR方法扩增出GDgh毒株nsp1、nsp5、N基因,并将其连接到腺病毒穿梭载体上,构建重组穿梭质粒。将3个重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体共转染至HEK-293A细胞中获得第1代重组腺病毒,分别命名为rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N。用第1代3株重组腺病毒接种HEK-293A细胞,连续传代,通过RT-PCR和Western-blot方法鉴定第3代重组腺病毒,并采用Reed-Muench法计算病毒半数组织培养感染剂量(TCID_(50))。以3株重组腺病毒的第3代病毒液免疫小鼠,收集血清并检测特异性IgG抗体水平。结果表明:试验成功构建出带有nsp1、nsp5、N基因的重组穿梭质粒;分别用重组腺病毒rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N感染正常HEK-293A细胞,可产生典型的细胞病变并观察到荧光信号;目的基因正常转录后得到的目的蛋白可正确表达;3株重组腺病毒rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N的TCID_(50)依次为1×10^(-8.35)/mL、1×10^(-8.50)/mL、1×10^(-7.66)/mL;免疫小鼠后均可产生针对目的蛋白的特异性抗体。说明试验成功构建的3株正常表达目的蛋白的重组腺病毒均具有免疫原性。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) nsp1基因 nsp5基因 N基因 重组腺病毒 免疫原性 构建 鉴定
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猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白1α多克隆抗体的制备及应用
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作者 赵慧君 赵旭阳 +11 位作者 史西保 陈静 范小敏 司朝朝 王丽 李青梅 常晓博 李雪莹 付建蒙 徐雅甜 邓瑞广 张改平 《安徽农业科学》 CAS 2019年第12期115-119,131,共6页
以真核质粒pcDNA3.1-flag-nsp1α为模板,利用PCR扩增出nsp1α基因片段,构建原核重组载体pET32a-nsp1α,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态,1mmol/LIPTG在37℃诱导表达6h,成功获得以包涵体形式存在的重组蛋白,能够与小鼠抗His标签单克隆抗... 以真核质粒pcDNA3.1-flag-nsp1α为模板,利用PCR扩增出nsp1α基因片段,构建原核重组载体pET32a-nsp1α,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态,1mmol/LIPTG在37℃诱导表达6h,成功获得以包涵体形式存在的重组蛋白,能够与小鼠抗His标签单克隆抗体反应;包涵体复性后作为抗原免疫新西兰大白兔,3次免疫后20d获得兔多抗血清。通过间接ELISA、Westernblot、间接免疫荧光、免疫组化等试验获得了高效价的兔多抗血清,该血清能够特异性地识别真核质粒表达的nsp1α以及PRRSVBJ4株。该试验成功表达了pET32a-nsp1α重组蛋白,并制备了高效价、高特异性的兔抗nsp1α多克隆抗体。 展开更多
关键词 PRRSV nsp1α 多克隆抗体
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Low phosphorus promotes NSP1–NSP2 heterodimerization to enhance strigolactone biosynthesis and regulate shoot and root architecture in rice 被引量:3
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作者 Kun Yuan Hao Zhang +21 位作者 Chaoji Yu Nan Luo Jijun Yan Shuang Zheng Qingliang Hu Dahan Zhang Liquan Kou Xiangbing Meng Yanhui Jing Mingjiang Chen Xinwei Ban Zongyun Yan Zefu Lu Jian Wu Yu Zhao Yan Liang Yonghong Wang Guosheng Xiong Jinfang Chu Ertao Wang Jiayang Li Bing Wang 《Molecular Plant》 SCIE CSCD 2023年第11期1811-1831,共21页
Phosphorus is an essential macronutrient for plant development and metabolism,and plants have evolved ingenious mechanisms to overcome phosphate(Pi)starvation.However,the molecular mechanisms underlying the regulation... Phosphorus is an essential macronutrient for plant development and metabolism,and plants have evolved ingenious mechanisms to overcome phosphate(Pi)starvation.However,the molecular mechanisms underlying the regulation of shoot and root architecture by low phosphorus conditions and the coordinated utilization of Pi and nitrogen remain largely unclear.Here,we show that Nodulation Signaling Pathway 1(NSP1)and NSP2 regulate rice tiller number by promoting the biosynthesis of strigolactones(SLs),a class of phytohormones with fundamental effects on plant architecture and environmental responses.We found that NSP1 and NSP2 are induced by Oryza sativa PHOSPHATE STARVATION RESPONSE2(OsPHR2)in response to low-Pi stress and form a complex to directly bind the promoters of SL biosynthesis genes,thus markedly increasing SL biosynthesis in rice.Interestingly,the NSP1/2–SL signaling module represses the expression of CROWN ROOTLESS 1(CRL1),a newly identified early SL-responsive gene in roots,to restrain lateral root density under Pi deficiency.We also demonstrated that GR24^(4DO) treatment under normal conditions inhibits the expression of OsNRTs and OsAMTs to suppress nitrogen absorption but enhances the expression of OsPTs to promote Pi absorption,thus facilitating the balance between nitrogen and phosphorus uptake in rice.Importantly,we found that NSP1p:NSP1 and NSP2p:NSP2 transgenic plants show improved agronomic traits and grain yield under low-and medium-phosphorus conditions.Taken together,these results revealed a novel regulatory mechanism of SL biosynthesis and signaling in response to Pi starvation,providing genetic resources for improving plant architecture and nutrient-use efficiency in low-Pi environments. 展开更多
关键词 RICE Pi deficiency STRIGOLACTONE nsp1 and nsp2 CRL1 nitrogen and Pi absorption
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