ntPCR-RFLP检测HBV阿德福韦耐药变异-rtA181V变异

目的:建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV)阿德福韦(ADV)耐药变异- rtA181V变异的快速检测方法．方法:根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物,使野生株(rt181 A)PCR产物中含有Blp Ⅰ酶切位点(5’GCTNAGC3’),而变异株(rt181V)无此限制性酶切位点．选取4份应用ADV治疗1 a以上出现HBV DNA反跳的临床耐药慢性乙型肝炎患者血清,经PCR扩增、Blp Ⅰ酶切、30 g／L琼脂糖凝胶电泳,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析．并选择经该方法鉴定的野生株及变异株各一例进行 HBV RT区基因序列分析及对照质粒的构建．结果:自4份血清标本中检测到2例rtA181V变异．所建立的ntPCR—RFLP方法灵敏度高,可以检测到103 copies／L的HBV DNA;特异性强,其 RFLP分析结果与DNA测序结果一致．结论:应用ntPCR-RFLP方法检测rtA181V 变异具有灵敏、特异、简便的优点,适用于 ADV耐药变异的临床监测工作．

应用ntPCR-RFLP技术检测乙型肝炎病毒阿德福韦耐药变异

目的建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV)阿德福韦(ADV)耐药变异-rtN236T变异及rtA181V变异的快速检测方法。方法根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物,使野生株rt236N PCR产物中含有DraⅠ酶切位点(5'-TTTAAA-3'),而变异株rt236T无此限制性酶切位点;使野生株rt181A PCR产物中含有BlpⅠ酶切位点(5'-GCTNAGC-3'),而变异株rt181V无此限制性酶切位点。选取4份应用ADV治疗1年以上出现HBV DNA反跳的临床耐药慢性乙型肝炎患者血清,经PCR扩增、限制性内切酶酶切及凝胶电泳,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析。并选择经该方法鉴定的野生株及变异株各1例进行HBV RT区基因序列分析。结果建立的ntPCR-RFLP方法可以检测到102copies/L的HBV DNA;RFLP分析结果与DNA测序结果一致,4份血清标本中检测到1份rtN236T变异,2份rtA181V变异。结论应用ntPCR-RFLP方法检测HBV阿德福韦耐药变异具有灵敏、特异、简便的优点,适用于HBV耐药变异的监测。

家族性乙型肝炎病毒基因型分布与临床转归关系的研究

目的调查家族性乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布,分析基因型与临床转归的相关性。方法以136例家族性乙型肝炎患者为研究对象,用S基因巢式聚合酶链反应-限制片段长度多态性(ntPCR-RFLP)基因型分型方法测定HBV基因型。结果家族性乙型肝炎患者HBV基因分型为C型124例、B+C混合型7例、B型3例、未确定型2例;C型在原发性肝癌(HCC)中占有绝对优势(100.0%),其次为肝硬化(LC,96.0%),慢性乙型肝炎(CHB,95.3%),慢性乙型肝炎携带者(ASC,66.7%),与C型相比基因型B型、B+C混合型仅在ASC和CHB中存在,其所占比例分别为9.5%、23.8%和1.2%、2.3%。山西地区家族性乙型肝炎患者中未发现A～H中其他基因型的存在。结论山西地区家族性HBV基因型主要以C型为主,有少量B型和B+C混合型;C型感染所致的肝病预后差。