MG患者胸腺移植BALB／c nu／nu裸鼠模型的建立及其功能研究

目的:通过建立MG患者胸腺移植BALB/c裸鼠动物模型,探讨MG患者胸腺对脐血干细胞分化的影响。方法:将4mm3无菌切除的MG患者胸腺和非自身免疫病正常胸腺组织行BALB/c裸鼠左肾包膜下移植,2周后给BALB/c裸鼠静脉输入脐血单个核细胞。胸腺移植60天后通过免疫组化试验检测CD3分子的表达,利用流式细胞仪检测BALB/c裸鼠外周血中人源T细胞、B细胞、NK细胞、调节性T细胞数量。结果:胸腺移植60天,移植的胸腺组织在BALB/c裸鼠肾包膜下存活,组织结构清晰,免疫组化显示移植块中的胸腺细胞表达CD3分子;流式细胞分析显示CD3+、CD4+、CD19+、CD161+细胞以及CD3+CD56+、CD4+CD25+细胞百分率在MG胸腺、正常胸腺和脐血MNC联合移植组明显高于对照组,正常组CD3+、CD19+比例增加更明显,MG组CD4+细胞比例高于先心组。结论:胸腺组织块植入BALB/c裸鼠肾被膜下,能有效存活,并参与脐血细胞在体内的分化;移植的MG胸腺与正常胸腺在脐血细胞中的作用存在差异。MG患者胸腺、脐血干细胞联合移植建立的人胸腺-裸鼠动物模型可作为MG胸腺功能研究、免疫细胞分化成熟研究的工具。

淫羊藿苷对BALB/c-nu裸小鼠雄激素依赖性前列腺癌雄激素受体信号转导通路的影响

目的研究淫羊藿苷对BALB/c-nu裸小鼠雄激素依赖性前列腺癌雄激素受体信号转导通路(P13K/Akt)的影响。方法将40只雄性BALB/c-nu裸小鼠随机均分为对照组、模型组、抑制剂组和实验组(n=10),除对照组外均采用前列腺内注射人前列腺癌细胞株(LNCaP)悬液(2×107个/mL)的方法建立LNCa P模型,2周后,4组均采用尾静脉注射相应药物的方法治疗28 d。采用Western blotting法检测前列腺癌变组织雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)和磷酸化雄激素受体(p-AR)蛋白表达;FITC-CY3法检测钙黏蛋白E(E-cadherin)和降钙素(Calcitonin)阳性率。结果与模型组比较,实验组p-Akt及p-AR蛋白均低表达(P<0.05),而Calctionin及AR-V7的阳性率均明显降低(P<0.05),E-cadherin的阳性率明显升高(P<0.05)。结论淫羊藿苷通过调控P13K/Akt信号转导通路相关因子表达而抑制LNCa P侵袭和转移。

A549肺腺癌细胞株BALB/C-nu/nu裸鼠骨转移模型的建立

目的探讨A549肺腺癌细胞株裸鼠骨转移模型建立的可行性.方法选择健康6~8周龄Balb/c-nu/nu裸鼠20只,将20只Balb/c-nu/nu裸鼠采用经皮左心室内注射法,将A549肺腺癌细胞株接种于裸鼠体内,接种后饲养观察Balb/c-nu/nu裸鼠的成瘤情况.结果全部裸鼠均完成经皮心脏肺腺癌细胞的种植,共造模成功12只,占到全部裸鼠的60%.造模成功的裸鼠成瘤天数经SPSS分析,结果符合正态分布,得出裸鼠成瘤天数的均值、标准差、及可信区间.结论通过经皮左心室内注射A549肺腺癌细胞株,建立Balb/c-nu/nu裸鼠肺腺癌骨转移模型,方法可行性强,科学可靠,成膜率高,可用于肺腺癌骨转移发病机制的研究.

淫羊藿素对BALB/c-nu裸鼠前列腺癌组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及E-钙黏蛋白的影响

目的观察淫羊藿素对雄激素依赖型前列腺癌模型小鼠前列腺癌组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及E-钙黏蛋白的影响并探讨其机制。方法雄性BALB/c-nu裸鼠40只,随机分为空白对照组、荷瘤组、LY294002组和淫羊藿素组,每组10只,除空白对照组外均采用含有2×107个/mL的人LNCaP前列腺癌细胞悬液前列腺内注射以建立前列腺癌LNCaP荷瘤鼠模型。2周后淫羊藿素组按80 mg/kg剂量尾静脉注射淫羊藿素治疗4周,PI3K/Akt抑制剂组尾静脉注射PI3K/Akt抑制剂LY294002,空白对照组、荷瘤组尾静脉注射等体积生理盐水。治疗结束后取前列腺组织,采用Western blotting检测磷酸化雄激素受体AR(p-AR)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)、雄激素受体剪接变异体7(AR-V7);免疫荧光双重染色(FITCCY3)法检测降钙素(Calcitonin)和钙黏蛋白E(E-cadherin)表达。结果荷瘤组前列腺组织p-AR和p-Akt均高表达,前列腺瘤组织芯片标本中AR-V7和Calctionin阳性率分别为(32.45±2.15)%和(46.31±5.01)%,E-cadherin阳性率(22.93±1.96)%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。淫羊藿素组前列腺组织p-AR和p-Akt低表达,AR-V7和Calctionin阳性率分别为(17.02±1.23)%和(29.76±2.74)%,E-cadherin阳性率为(86.27±6.75)%,与荷瘤组比较差异有统计学意义(P<0.05)。LY294002组和淫羊藿素组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论淫羊藿素具有调控P13K/Akt信号通路的作用,主要通过调控p-AR、pAkt、AR-V7和Calctionin水平而影响前列腺癌LNCa P细胞侵袭和转移。

淫羊藿素对BALB/c-nu裸小鼠人源性前列腺癌模型的影响

目的探讨淫羊藿素抑制人源性前列腺癌LNCaP细胞珠BALB/c-nu裸小鼠荷瘤组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(P13K/Akt)信号通路及其相关蛋白磷酸化的可能机制。方法将40只雄性BALB/c-nu裸小鼠按随机对照原则均分为4组[对照组、前列腺癌(PCa)组、阳性药组和实验组]并采用前列腺内注射LNCaP细胞株构建PCa动物模型。实验组每日按0.1 mL/10 g尾静脉注射0.8%淫羊藿素,阳性药组按0.1 mL/10 g尾静脉注射P13K/Akt抑制剂LY294002,对照组和PCa组注射等体积生理盐水。注射4周后比较裸小鼠体质量、前列腺瘤体湿重、体积及P13K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果与PCa组比较,实验组前列腺瘤体湿重、体积、P13K、 p-Akt、磷酸化雄激素受体(p-AR)、雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)和降钙素(Calcitonin)均较模型组降低(P<0.05),而钙黏蛋白E(E-cadherin)升高(P<0.05)。结论淫羊藿素通过调节PI3K/Akt信号通路抑制PCa的进展,且这一作用与Akt及AR磷酸化有关。

苯并[a]芘恶性转化细胞THBEc1致裸小鼠原位肺癌模型的构建及血清人源神经纤维网蛋白2对该模型的诊断价值

目的建立苯并[a]芘(BaP)恶性转化人支气管上皮细胞T-16HBE-C1(THBEc1)的裸小鼠原位肺癌模型,评估血清人源神经纤维网蛋白2(NRP2)对该模型的诊断价值。方法12只雄性ICR小鼠随机分为3组,右肺分别一次性注射无菌生理盐水20,30和40μL,观察14 d内小鼠死亡数,以确定小鼠肺内注射安全体积。16只雄性BALB/c-nu裸小鼠随机分为4组:对照组[皮下和肺内同时一次性接种人支气管上皮16HBE(HBE)细胞,皮下1×10^(6),肺内2×10^(5)]、皮下荷瘤模型组(皮下一次性接种THBEc1细胞1×10^(6))、原位肺癌模型组(肺内一次性接种THBEc1细胞2×10^(5)或5×10^(5))。接种后每7 d监测小鼠体重和皮下肿瘤体积;HE染色检测肺肿瘤和皮下肿瘤组织病理特征,计算成瘤率;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测裸小鼠血清和胸水中人源NRP2水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线确定血清人源NRP2对THBEc1细胞导致的裸小鼠原位肺癌模型的诊断价值。结果肺内注射40μL无菌生理盐水可致2/4小鼠死亡,20和30μL组未见小鼠死亡,但整体表现欠佳,故后续实验注射体积选择20μL。对照组裸小鼠均未在接种部位检出肿瘤,小鼠体重持续增长;皮下荷瘤模型组祼小鼠全部成瘤,体重显著低于对照组(P<0.05)。接种细胞后第10天,原位肺癌模型5×10^(5)细胞组裸小鼠全部成瘤(4/4);第14天,原位肺癌模型2×10^(5)细胞组裸小鼠3/4成瘤,且2个剂量组小鼠体重均低于对照组(P<0.01,P<0.05),肿瘤组织均呈鳞状细胞癌特征。ELISA结果显示,对照组裸小鼠血清人源NRP2水平均显著低于皮下荷瘤模型(4只)和原位肺癌模型(7只)裸小鼠(P<0.05)。原位肺癌模型组(4只)裸小鼠胸水中均可检出高水平的人源NRP2。ROC曲线显示,血清人源NRP2水平能有效区分THBEc1细胞在裸小鼠肺内是否成瘤,最佳截断值为123.00 ng·L^(-1)。结论通过肺内注射接种THBEc1细胞建立了裸小鼠原位肺癌模型,血清人源NRP2可用于该模型诊断。

三叶青乙酸乙酯提取物对结肠癌HT29细胞皮下移植瘤的诱导凋亡作用

目的:观察三叶青乙酸乙酯提取物对结肠癌HT29细胞皮下移植瘤的诱导凋亡作用,探讨其可能的作用机制,为三叶青在临床上应用于结肠癌的治疗提供实验依据。方法:以HT-29结肠癌细胞荷瘤裸鼠为模型。实验分5组,模型组、阳性对照组及三叶青提取物低、中、高剂量组,各组裸鼠给予相应药物或生理盐水灌胃14 d。观察各组裸鼠的一般情况,以及对HT29细胞皮下移植瘤的抑瘤率;HE染色后观察肿瘤组织细胞形态学改变,免疫组织化学方法检测瘤组织内Caspase-3的蛋白表达水平。结果:三叶青提取物中、高剂量组及阳性组瘤重较模型组减轻(P<0.05),阳性组瘤重最轻;中药各组随着剂量的增加,抑瘤率上升。与模型对照组比较,各给药组荷瘤鼠瘤细胞凋亡程度增强;三叶青提取物中、高剂量组瘤组织Caspase-3蛋白表达水平显著上调。结论:三叶青乙酸乙酯提取物可抑制结肠癌HT29细胞皮下移植瘤的生长,作用机制之一为上调Caspase-3蛋白的表达,诱导结肠癌HT29细胞皮下移植瘤凋亡。

肠复康对人大肠癌HT-29细胞增殖的影响及作用机制研究

目的 研究中药复方肠复康对人大肠癌细胞增殖的影响及探讨其作用机制。方法 建立人大肠癌HT 2 9裸鼠移植瘤模型。设立肠复康低、中、高剂量组和空白组。给药 8周后比较瘤重、抑瘤率及病理变化。免疫组化染色结合图像分析系统半定量检测移植瘤Ki 6 7阳性细胞数和血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的积分光密度。 结果 肠复康低、中、高剂量组抑瘤率分别为33.13%、4 7.2 6 %、6 6 .0 1%。肠复康各组移植瘤细胞核数量较少 ,细胞及细胞核形态更加规则。肠复康各组Ki 6 7阳性细胞数及VEGF表达均低于空白组。结论 肠复康具有抗人大肠癌HT 2 9裸鼠移植瘤细胞增殖的作用 ,其机理可能与促进癌细胞分化及抑制VEGF的表达有关。

人鼻咽癌CNE－2Z细胞的不同转移潜能克隆株在严重联合免疫缺陷小鼠体内的检验和比较研究

将人类鼻咽癌不同克隆株的细胞悬液移植在严重联合免疫缺陷（ＳＣＩＤ）小鼠和ＢＡＬＢ／ｃ（ｕｎ／ｕｎ）裸小鼠的颈背侧皮下，５６ｄ后处死全部动物进行观察。结果发现，在ＳＣＩＤ小鼠体内移植后ＣＮＥ２Ｌ２为高转移克隆株，其淋巴结转移率为１００％，肺转移率为７１％；而ＣＮＥ２Ｌ４为低转移克隆株，其肺转移率为１３％，淋巴结未见癌转移。这是从１个细胞母系中新筛选出的１个高转移和１个低转移的癌细胞克隆株。实验结果还显示，同ＢＡＬＢ／ｃ（ｕｎ／ｕｎ）裸小鼠相比，ＳＣＩＤ小鼠的恶性表型的表达能力高。另外，皮下移植时肿瘤细胞的数量可能与转移表型的表达有相关性，移植的瘤细胞数越多，转移率越高，反之亦然。

疣状瓶霉致nu／nuBALB／c小鼠皮下慢性感染模型的建立

目的 建立疣状瓶霉（Phialophora verrucosa，P. verrucosa）致无胸腺（nu/nu）BALB/c小鼠皮下慢性感染模型，探讨T淋巴细胞在抵御形成侵袭性感染中的作用。方法 经皮下接种100 μl P. verrucosa菌丝或孢子悬液（CFU = 5.0 × 108/ml）至足垫，每3天测量其肿胀程度。分析BALB/c和nu/nu BALB/c小鼠感染灶的病理特征。通过组织真菌培养分析P. verrucosa在上述两类小鼠感染灶内的存活状态。结果 BALB/c小鼠接种菌丝或孢子12 d内足垫呈一过性肿胀，50 d后基本恢复正常；nu/nu BALB/c小鼠接种菌丝或孢子后足垫肿胀明显、伴反复破溃和结痂，迁延不愈。病理提示，BALB/c小鼠菌丝或孢子接种灶均表现为局限性感染特征，灶内P. verrucosa亦维持接种时形态；nu/nu BALB/c小鼠菌丝或孢子接种灶中，P. verrucosa以单一菌丝或伴硬壳细胞混合形态形成侵袭性感染。真菌培养提示，P. verrucosa在BALB/c小鼠足垫21 d后接种灶中不能生长；在nu/nu BALB/c小鼠接种灶中则可持续存活。结论 以nu/nu BALB/c小鼠成功建立P. verrucosa致皮下暗色丝孢霉病实验室模型；与BALB/c小鼠相比，nu/nu BALB/c小鼠更易感染。

破坏血管和肿瘤细胞毒性药物联合应用治疗胃癌的实验研究

本研究联合应用血管破坏药物，加强肿瘤细胞毒性药物抗肿瘤疗效。利用局部注射途径，采用乳剂型制剂，减少药物副作用，尽可能使药物长久地留置于癌肿周围，为临床治疗胃癌提供实验依据。结果表明：中药乳剂性质稳定，对免耳血管有明显的破坏作用，导致出血性改变，对CAM血管生长有明显的抑制效应，联合应用中药乳剂和丝裂霉素C能提高抗肿瘤疗效。

转移性人小细胞肺癌裸鼠模型的建立

目的建立转移性人小细胞肺癌(SCLC)的裸鼠模型,探讨其用于人SCLC的治疗研究的可行性。方法 RPMI 1640培养基培养的人SCLC细胞株NCI-H446用无血清培养液重悬成1×107个/mL,取0.1 mL细胞悬液接种于BALB/c-nu裸鼠胫骨结节骨髓腔内,构建裸鼠模型并观察腿部肿瘤生长情况及肺等器官的转移情况。免疫组化染色检测小细胞肺癌标志物CD56及神经上皮干细胞标志物netsin的表达情况。结果经胫骨结节骨髓腔注射的方法注射细胞后裸鼠腿部均形成原位瘤,肺部转移6/6只,肝、脾等脏器未见转移灶。肿瘤组织细胞CD56阳性率>75%,nestin阳性率为4%～12%。结论经胫骨结节骨髓腔注射的方法可以形成弥散性肺部肿瘤,其他各器官则未见肿瘤块,可以为人SCLC实验性治疗的研究提供一种高效的实验模型。

急性B淋巴细胞白血病微小残留病动物模型的建立

目的:建立急性B淋巴细胞白血病微小残留病动物模型。方法:通过皮下注射2×10^(7)个Nalm-6细胞形成移植瘤,观察裸鼠体重、活动状态及成瘤状况,取裸鼠外周血、骨髓、肝脾等组织进行病理检查,了解皮下造模的成功是否伴有全身转移情况。结果:裸鼠皮下注射2×10^(7)个Nalm-6细胞,11.0±2.5 d后可观察到(3-4)×(3-4)mm肿瘤,体重降低,活动不受限,病理切片观察到肝脏、脾脏、骨髓有肿瘤细胞浸润。结论:采用裸鼠成功建立急性B淋巴细胞系白血病皮下肿瘤的动物模型。

卡氏肺孢子虫感染裸小鼠的实验研究

用醋酸可的松诱导Wistar大鼠获得卡氏肺孢子虫感染,取大鼠肺组织含虫匀装直接接种于NCS系裸小鼠两侧肺0.05ml,以及接种保存于-70℃低温中5月以上的含虫肺匀奖和分离纯化后的虫体,均使裸小鼠获得感染,发生卡氏肺孢子虫肺炎。在国内首先建立起裸小鼠卡氏肺孢子虫肺炎实验模型。

重庆地区小鼠诺如病毒的感染及其对免疫功能影响的初步研究

目的:建立实时荧光定量RT-PCR检测方法,普查重庆市实验小鼠诺如病毒(murine Norovirus,MNV)的感染情况及其对BABL/c-nu小鼠免疫功能影响的初步研究。方法:(1)根据GenBank中收录的MNV全基因组序列,设计MNV特异性引物,检测其特异性、灵敏度、重复性和稳定性,并和两个实验动物质量检测单位对123份小鼠临床样本开展比对检测,以最终构建荧光定量RT-PCR检测方法。(2)应用该方法比较小鼠不同肠道排泄物(盲肠内容物、新鲜粪便和排出体外24 h粪便)中MNV的检出情况。(3)应用该方法普查重庆市实验小鼠感染MNV的情况。(4)6~8周的BABL/c-nu小鼠被随机分为3组(n=3):正常对照组、MNV感染30 d组、MNV感染60 d组,收集各组小鼠血清及肝、肺、脾、结肠,HE染色观察各脏器的病理变化;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清、脾和结肠肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)及干扰素-γ(interferon gamma,IFN-γ)的含量。结果:(1)建立的荧光定量RT-PCR方法特异性强,与同种属其他病毒均不发生交叉反应,方法的灵敏度、重复性和稳定性良好,与另外两个实验动物质检单位的检测结果吻合度高达98%。(2)新鲜粪便与盲肠内容物中MNV的检出结果完全一致;24 h的陈旧粪便也能准确反映出该笼小鼠MNV的感染情况。(3)重庆市实验小鼠存在较高的MNV感染率,且封闭群和近交系小鼠MNV感染率无品系特异性(68.3%vs.70.6%,χ^2=0.116,P=0.733),但基因修饰小鼠比普通小鼠更易感染MNV(78%vs.64%,χ^2=6.434,P=0.011)。(4)与正常对照组小鼠相比,BABL/c-nu小鼠自然感染MNV后肝、肺、脾和结肠均出现不同程度的炎症细胞浸润和明显的组织病理变化,且结肠组织的TNF-α、IFN-γ水平明显升高(F=21.682,P=0.002;F=77.223,P=0.000)。结论:本研究建立的实时荧光定量PCR方法可靠,且可通过小鼠粪便样本,日常监测MNV的感染情况等;重庆市实验小鼠有较高的MNV感染率,且BABL/c-nu小鼠感染MNV会对动物实验结果造成干扰。因此,各实验动物单位应该重视MNV的传播和防控,加强实验动物的饲养管理,降低实验动物感染MNV的风险。

遗传性T淋巴细胞免疫缺陷在百草枯所致肺纤维化中的作用

目的研究T淋巴细胞免疫缺陷在百草枯所致肺纤维化中的作用。方法选择BALB/C(nu/nu)裸鼠与BALB/C(nu/+)小鼠作为实验动物模型,按照20 mg/kg的百草枯一次性灌胃,灌胃1 h后用GC-MS检测血浆中百草枯的药物浓度,在小鼠中毒第7天和第28天取肺组织做病理切片,H&E,MASSON染色。结果2个品系的小鼠在染毒1 h后血浆中的百草枯药物浓度,差异无统计学意义(P>0.05)。第28天的病理切片H&E、MASSON染色显示出2个品系的小鼠在肺纤维化程度方面,差异有统计学意义(P<0.05)。结论T淋巴细胞参与了百草枯所致的肺纤维化的过程,但是T淋巴细胞的缺失没有完全避免百草枯诱导的肺纤维化。T淋巴细胞免疫缺陷不是百草枯所致肺纤维化的决定性因素。

甲型H1N1流感病毒感染不同免疫缺陷小鼠的比较

目的宿主免疫系统的功能状态在病毒的感染中起着至关重要的作用,本实验观察了不同免疫缺陷小鼠感染甲型H1N1流感病毒的差异。方法使用六个品系的近交系小鼠,经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,分析其在病毒感染后存活率、体重变化和肺组织病理改变的异同。结果感染H1N1病毒的6种小鼠在观察的14 d内,野生型的C57BL/6小鼠感染开始体重缓慢下降,感染后期有所回升,有半数存活;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后体重随病情发展快速下降,死亡率均为100%。野生型C57BL/6小鼠感染初期为较弥漫的间质性肺炎,后期病变逐渐局限;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后出现弥漫的中重度间质性肺炎,细支气管上皮有变性坏死,但炎症细胞明显少于C57BL/6小鼠。结论在甲型H1N1流感病毒的初次感染中固有免疫和特异性免疫分别在感染的初期和后期起主要作用,宿主免疫系统的功能状态影响着甲型H1N1病毒感染和预后。

马利佐米联合替莫唑胺治疗恶性胶质瘤的效果分析

目的 探讨马利佐米联合替莫唑胺对小鼠胶质瘤细胞增殖及生存期的影响。方法 32只NU/NU裸鼠颅内移植入人类神经胶质瘤细胞系U-251,4 d后随机分为联合药物组(马利佐米+替莫唑胺)、马利佐米组、替莫唑胺组及空白组,第1天、第4天、第8天、第11天、第15天尾静脉注射相应药物,比较各组的移植瘤体积、生存期、生存率。结果 移植后20 d,联合药物组的移植瘤体积显著小于其他三组(P <0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,联合药物组、马利佐米组、替莫唑胺组和对照组的中位生存时间分别为66天、 32天、 33天和23天;Log-rank检验显示,联合药物组的生存率显著高于其他三组(P <0.05)。结论 马利佐米联合替莫唑胺治疗胶质瘤模型小鼠有显著的抑制肿瘤生长作用,可提高生存率及延长生存时间。