PTHrP促进RANKL诱导巨噬细胞分化为破骨细胞参与中耳胆脂瘤骨破坏

目的:骨质进行性吸收破坏是中耳胆脂瘤最重要的临床特征之一,可导致一系列颅内外并发症,而目前中耳胆脂瘤骨破坏的机制尚未明确。本研究旨在探究甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)参与中耳胆脂瘤骨破坏的机制。方法:收集后天性中耳胆脂瘤患者的25例胆脂瘤标本和13例外耳道正常皮肤组织标本。采用免疫组织化学染色方法检测PTHrP、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-kappa B ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)在中耳胆脂瘤和外耳道正常皮肤组织中的表达,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法检测中耳胆脂瘤和外耳道正常皮肤组织中是否存在TRAP阳性多核巨噬细胞。选取小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞进行干预,分为RANKL干预组和PTHrP+RANKL共同干预组,采用TRAP染色法检测2组破骨细胞的生成情况,实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测干预后2组破骨细胞相关基因TRAP、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)和活化T细胞核因子1(nuclear factor of activated T cell cytoplasmic 1,NFATc1)的mRNA表达水平,骨吸收陷窝实验检测2组破骨细胞的骨吸收功能。结果:免疫组织化学染色结果显示,PTHrP和RANKL在中耳胆脂瘤组织中的表达均显著增高,OPG表达降低(均P<0.05),且PTHrP的表达与RANKL、RANKL/OPG比值均呈显著正相关,与OPG表达呈显著负相关(分别r=0.385、r=0.417、r=-0.316,均P<0.05)。同时,PTHrP、RANKL的表达水平与中耳胆脂瘤的骨破坏程度均呈显著正相关(分别r=0.413、r=0.505,均P<0.05)。TRAP染色结果显示中耳胆脂瘤上皮周围基质中有大量TRAP阳性细胞,并存在细胞核数量为3个或3个以上的TRAP阳性破骨细胞。RANKL或PTHrP+RANKL联合干预5 d后,与RANKL干预组相比,PTHrP+RANKL联合干预组的破骨细胞数量显著增加(P<0.05),且破骨细胞相关基因TRAP、CTSK和NFATc1的mRNA表达水平均升高(均P<0.05)。骨吸收陷窝扫描电镜结果显示RANKL干预组、PTHrP+RANKL联合干预组的骨片表面均形成骨吸收陷窝;与RANKL干预组相比,PTHrP+RANKL联合干预组的骨片表面骨吸收陷窝数量显著增加(P<0.05),面积也更大。结论:PTHrP可能通过促进RANKL诱导胆脂瘤组织周围基质中的巨噬细胞分化为破骨细胞,参与中耳胆脂瘤骨破坏。

免疫化学染色图像分析法检测细胞核因子κB

目的探讨一种简便、安全、可定量的细胞核因子κB(NF-κB)活性的检测方法。方法以晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白(HSA-AGE)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC),NF-κB/p65免疫化学染色后,分析细胞NF-κB/p65核/浆的阳性染色比,以经典的凝胶迁徙率泳动分析法作对照。结果HSA-AGE可激活HUVECNF-κB,呈时间、剂量依赖关系,两种方法检测的趋势一致。结论免疫化学染色的图像分析法可用于定量检测NF-κB的活性。

核因子-κB在慢性髓细胞白血病急变期前后的变化

目的探讨核因子-κB（NF—κB）在慢性髓细胞白血病（CML）急变期前后的表达及意义。方法选择2011年2月～2013年2月于新疆喀什人民医院血液科住院治疗的25例慢性髓细胞白血病慢性期（CML—CP）（CML—CP组）、16例慢性髓细胞白血病急变期（CML—BC）患者（CML—BC组）、30例缺铁性贫血或巨幼细胞性贫血患者（对照组）为研究对象。采用凝胶迁移或电泳迁移率实验检测三组人骨髓细胞中NF-κB的表达。结果对照组患者的NF—KB活性测定均为阴性．CML—CP组也仅4例患者检测到NF—KB活性增强，CML—BC组14例患者的NF—KB活性增强。CML—BC组患者NF—κB活化率明显高于CML—CP组及对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；CML—CP组活化率高于对照组，差异有高度统计学意义（P〈0．01）。CML—BC组患者NF—KBmRNA表达水平（22．91±0．15）明显高于对照组（0）及CML—CP组（11．19±0．03），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论与慢性髓细胞白血病慢性期比较．急变期NF-κB活性增强。表达增加，可作为慢性髓细胞白血病急性病变的重要标志物。

RANKL和IL-17A在中耳胆脂瘤中的表达及相关性研究

目的观察破骨细胞分化因子(RANKL)和白介素-17A(IL-17A)在中耳胆脂瘤组织中的表达,探讨二者在中耳胆脂瘤骨质破坏机制中的作用。方法采用免疫组织化学两步法和计算机图像定量分析法,检测RAN-KL、IL-17A在25例中耳胆脂瘤上皮、16例胆脂瘤周围肉芽组织及15例正常外耳道皮肤中的表达,同时观察二者的表达与临床听小骨骨质破坏程度的相互关系。结果(1)RANKL、IL-17A在胆脂瘤上皮及胆脂瘤周围肉芽组织中表达增高,分别与正常对照组比较,差异均有统计学意义(tRANKL=9.864、5.630,均P<0.05;tIL-17A=13.905、9.011,均P<0.05),且二者的表达与骨质破坏程度相关。(2)在胆脂瘤上皮及胆脂瘤周围肉芽组织中,RANKL与IL-17A的表达呈正相关(r上皮=0.692,r肉芽=0.538,P<0.05)。结论RANKL及IL-17A在中耳胆脂瘤组织中呈高表达,与骨质破坏程度成正比,表明其与胆脂瘤骨质破坏机制密切相关;RANKL与IL-17A表达有相关性,提示二者之间可能存在相互作用。

破骨细胞在中耳胆脂瘤骨质破坏中的作用

目的探讨破骨细胞(OC)在胆脂瘤骨质破坏中所起的作用。方法通过免疫组织化学技术和计算机图像定量分析法,检测破骨细胞分化因子(RANKL)和骨保护素(OPG)在27例胆脂瘤和11例外耳道皮肤中的表达。光镜观察8例胆脂瘤周围破坏听小骨和2例正常听小骨的形态学;透射电镜观察5例胆脂瘤周围破坏听小骨和2例正常听小骨的超微结构。结果RANKL的阳性表达量在胆脂瘤中为(0.2470±0.2101),在外耳道皮肤为(0.0452±0.0789)(P<0.05);RANKL/OPG比值在胆脂瘤中为(1.3790±1.1380),在外耳道皮肤为(0.3581±0.3768)(P<0.05);OPG在胆脂瘤中的阳性表达量为(0.2026±0.0949),在外耳道皮肤中的阳性表达量为(0.2627±0.1724)(P>0.05)。胆脂瘤周围破坏听小骨中有活性OC存在以及其参与骨破坏作用的证据。结论OC在胆脂瘤的骨质破坏中发挥一定的作用。

破骨细胞分化因子及其相关因子在慢性化脓性中耳炎肉芽组织中的表达

目的探讨破骨细胞核因子кB受体活化因子配体(Receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand,RANKL,又称破骨细胞分化因子)和其配体核因子-κB受体活化因子(Receptor activator of nuclear factor-kappa B,RANK)及骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)在慢性化脓性中耳炎肉芽组织中的表达情况。方法选择2015年2月至2018年4月在本院接受治疗的慢性化脓性中耳炎患者37例(慢性化脓性中耳炎组)、中耳胆脂瘤患者44例(中耳胆脂瘤组)、外伤性鼓膜穿孔患者20例(对照组)作为研究对象。采用免疫组织化学法检测慢性化脓性中耳炎组和中耳胆脂瘤组患者的肉芽组织以及对照组患者外耳道皮肤中RANKL、RANK、OPG的表达情况。结果3组患者均可见RANKL、RANK、OPG的表达;慢性化脓性中耳炎组、中耳胆脂瘤组RANKL、RANK表达水平高于对照组,OPG/RANKL低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);中耳胆脂瘤组RANKL、RANK表达水平高于慢性化脓性中耳炎组,OPG/RANKL低于慢性化脓性中耳炎组,差异均有统计学意义(P<0.05),3组患者OPG表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。OPG/RANKL与慢性化脓性中耳炎组和中耳胆脂瘤组的骨质破坏程度呈显著负相关(r=-0.582,-0.621,P=0.025,0.011)。结论RANKL、RANK、OPG在正常外耳道皮肤及慢性化脓性中耳炎和中耳胆脂瘤患者肉芽组织中均有表达,表达水平与骨质破坏程度有关,RANKL、RANK表达水平的升高和OPG表达水平的降低在慢性化脓性中耳炎和中耳胆脂瘤的骨质破坏机制中发挥了重要作用,OPG与RANKL的比值则可作为一个可靠的评价骨质破坏的指标。

破骨细胞分化因子及其相关因子在中耳胆脂瘤组织中的表达

目的:检测破骨细胞分化因子(RANKL)及其配体核因子-κB受体活化因子(RANK)及假性受体骨保护素(OPG)在胆脂瘤型中耳炎组织中的表达水平,探讨RANKL在胆脂瘤型中耳炎骨质破坏机制中的作用。方法:应用免疫组织化学SP法检测RANKL、RANK和OPG在30例中耳胆脂瘤组织和20例正常外耳道皮肤中的表达。结果:RANKL、RANK在胆脂瘤组织中表达增高,阳性细胞主要位于胆脂瘤周围组织,与正常对照组比较差异有统计学意义(t=7.758、6.482,均P<0.05);OPG的表达无明显变化,与正常对照组比较差异无统计学意义。OPG/RANKL在胆脂瘤组织中较正常对照组明显降低(t=8.183,P<0.05)。结论:RANKL及RANK在中耳胆脂瘤周围组织中表达增高,与骨质破坏密切相关。