宫颈癌样本中核转运蛋白IPO7表达及其在患者预后评估中的作用

目的探讨核转运蛋白(IPO7)在宫颈癌中的表达及其作为患者预后分子标志物的临床价值。方法收集2017年3月至2019年3月间于该院接受根治性子宫切除和盆腔淋巴结清扫的114例FIGOⅠB-ⅡA期宫颈癌患者的手术标本。通过免疫组织化学染色对宫颈癌组织中核转运蛋白IPO7表达进行分析,并根据表达水平将患者分为高、低表达组。评估IPO7表达与宫颈癌临床病理特征及总体生存(OS)的关系。采用单、多变量Cox回归模型进一步明确IPO7表达对宫颈癌患者OS的独立预测价值。结果核转运蛋白IPO7主要表达于细胞核或细胞膜,在114例宫颈癌组织中的阳性表达率为51.8%(59/114)。IPO7高表达组患者盆腔淋巴结转移(37.1%vs.17.3%,χ^(2)=5.485,P=0.019)和淋巴血管间隙侵犯(21.0%vs.7.7%,χ^(2)=3.928,P=0.047)比例较低表达组更加频繁,FIGOⅡA期的比例明显更高(54.8%vs.23.1%,χ^(2)=11.853,P=0.001)。生存分析结果表明,IPO7高表达患者5年OS率低于低表达患者(χ^(2)=6.206,P=0.013)。此外,单、多变量Cox回归分析发现,IPO7高表达和FIGO分期是ⅠB-ⅡA期宫颈癌患者预后不佳的独立预测因素,其风险比分别是2.814(95%CI:1.044~7.588,P=0.041)和2.660(95%CI:1.081~6.548,P=0.033)。结论核转运蛋白IPO7在宫颈癌中的高表达与侵袭性肿瘤特征及患者不良预后相关,有望成为宫颈癌预后评估与治疗的潜在分子标志。

不同浓度丙泊酚对人乳腺癌雌激素受体阳性MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的研究不同浓度丙泊酚对人乳腺癌雌激素受体阳性MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法以人乳腺癌雌激素受体阳性MCF-7细胞为研究对象,随机将其分为3组,即P_(0)组(为空白对照)、P_(25)组(给予25μg/mL丙泊酚)和P_(50)组(给予50μg/mL丙泊酚)。对3组细胞分别进行克隆形成实验、Transwell细胞迁移实验、侵袭实验、划痕愈合实验,观察各组细胞的增殖、迁移、侵袭变化情况。采用Western blot法检测不同浓度丙泊酚对人乳腺癌胞Ki-67、PD-L1的蛋白表达水平的影响;RT-qPCR法检测不同浓度丙泊酚对Ki-67、PD-L1的RNA表达水平的影响。结果与P_(0)组比较,P_(50)组人乳腺癌雌激素受体阳性MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭能力均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与P_(25)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与P_(0)组相比,P_(50)组PD-L1、Ki-67蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),其中PD-L1表达随丙泊酚浓度的增高而增高;与P_(25)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组间PD-L1、Ki-67的RNA表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论高浓度丙泊酚能促进人乳腺癌雌激素受体阳性MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移能力,该变化与相关蛋白Ki-67、PD-L1表达增强有关。

胆固醇7-羟化酶CYP7A1表达及调控相关研究进展

胆固醇7-羟化酶(cholesterol 7-alpha hydroxy-lase,CYP7A1)是胆汁酸合成代谢经典途径的限速酶.其表达不仅具有昼夜节律,而且可由基因多态性、饮食、激素、细胞因子及药物等多种因素调节.CYP7A1的基因多态性与疾病及对药物的治疗反应存在相关性,同时多种核受体参与了CYP7A1的表达的调控,共同组成了转录激活/抑制级联网络,维持体内胆汁酸合成及脂质动态平衡.本文主要对CYP7A1表达、调控及与疾病及治疗反应的相关性等方面的研究进行综述.

ER-α36过表达促进人乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移能力

目的探讨雌激素受体新亚型ER-α36过表达对人雌激素受体阳性乳腺癌细胞侵袭转移潜力的影响及其机制。方法以野生型乳腺癌细胞系MCF-7/W、转染pcDNA3.1空载体的细胞系MCF-7/pcDNA3.1和转染重组载体pcDNA3.1/ER-α36的细胞系MCF-7/ER-α36为研究对象,分别用细胞黏附实验观测肿瘤细胞与细胞外基质的黏附能力、Transwell侵袭小室实验检测细胞侵袭转移能力,用Western blot法检测NF-κB P65、MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白表达。结果与MCF-7/W组细胞相比,MCF-7/ER-α36细胞的2 h细胞黏附率和24 h穿膜细胞数显著增加(P<0.05)。NF-κB P65、MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白的相对表达量及MMP-2/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1显著增高(P<0.05)。结论 ER-α36过表达能促进ER-α66阳性乳腺癌细胞的体外黏附能力和侵袭转移潜力,其机制可能与通过NF-κB途径提高MMP-2、MMP-9的表达水平及打破二者与TIMP-1之间的平衡有关。

补肾活血方通过调节MGP、BMP-7因子对慢性肾脏病大鼠血管钙化的抑制作用

目的:观察补肾活血方通过调节基质Gla蛋白(matrix Gla protein,MGP)、骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)因子对慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)大鼠血管钙化(vascular calcification,VC)的抑制作用,探讨补肾活血方抑制CKD大鼠VC的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组及中药组,每组20只,模型组与中药组大鼠实验第1~4周给予250 mg·kg-1·d-1腺嘌呤混悬液灌胃及含1. 8%高磷饲料喂养,第5~8周腺嘌呤改为隔日灌胃。中药组同时按55 g·kg-1·d-1剂量给予补肾活血方灌胃治疗,每日1次。正常组灌胃等量生理盐水。给药8周后,HE染色观察肾组织变化,茜素红染色观察主动脉钙化结节情况,检测主动脉钙含量及ALP活性,腹主动脉取血检测血清钙(Ca2+)、磷(P3-)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、全段甲状旁腺激素(i PTH),Western blot法检测主动脉α-平滑肌蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)蛋白的表达,Real-time PCR法检测主动脉MGP、BMP-7mRNA表达。结果:HE染色观察提示:中药组较模型组正常肾小球数目增多,肾小管扩张程度降低,炎性细胞数量下降,腺嘌呤结晶减少。茜素红染色观察提示:与正常组比较,模型组主动脉出现钙化结节,广泛红色颗粒物沉着;与模型组比较,中药组钙化结节减少。与正常组比较,模型组主动脉钙含量及ALP活性升高,血P3-、Scr、BUN、i PTH水平升高,血Ca水平下降(P <0. 01),主动脉ALP蛋白表达明显升高、α-SMA蛋白表达明显下降(P <0. 01),模型组主动脉MGP、BMP-7 mRNA表达下调(P <0. 01);与模型组比较,中药组主动脉钙含量及ALP活性明显降低(P <0. 05),血P3-、Scr、BUN、i PTH水平均下降(P <0. 01,P <0. 05),血Ca2+水平升高(P <0. 01),中药组主动脉ALP蛋白表达降低、α-SMA蛋白表达升高(P <0. 01),且中药组MGP、BMP-7 mRNA表达上调(P <0. 01)。结论:补肾活血方能够改善CKD大鼠肾脏组织学、肾功能、改善钙磷代谢,上调MGP、BMP-7因子表达,这可能是其抑制CKD大鼠VC的作用机制。

RSV感染小胶质细胞活化Toll样受体3、7介导炎性反应的初步研究

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠小胶质细胞(BV2)后,Toll样受体3(TLR3)和Toll样受体7(TLR7)的活化及其介导的炎性反应。方法①RSV体外感染BV2,利用免疫荧光技术分别在12、24和36 h检测细胞内RSV-F蛋白。②分别于感染4、8、12、16、24和36 h收集细胞,以未感染细胞作为正常组。用TRIzol提取细胞总RNA,通过半定量RT-PCR法检测TLR3、TLR7的mRNA转录水平的变化。③Western blot法分别检测感染4、8、12、16、24和36 h后的细胞内核转录因子(NF-κB)蛋白水平的变化。④ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的变化。结果①荧光显微镜下可以见到FITC标记RSV-F蛋白的绿色荧光随感染时间的延长而增强。②TLR3、TLR7在感染RSV后mRNA水平在观察的时间内表达均升高并呈时间依赖性关系。③各感染时间点NF-κB蛋白水平表达均升高并呈时间依赖性关系。④感染RSV后,细胞上清液中TNF-α含量均升高并呈时间依赖性关系。结论 RSV感染BV2后可以上调TLR3、TLR7,从而使下游细胞炎性因子TNF-α分泌升高,过度的炎性作用可能与神经系统症状的发生相关。

人乳腺癌组织和细胞中TNFR1表达及其对MCF-7细胞增殖、凋亡的影响

目的观察人乳腺癌组织和细胞中肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)的表达,以及抑制人乳腺癌细胞MCF-7中TNFR1表达对细胞增殖及凋亡的影响,并探讨相关机制。方法取新鲜乳腺癌组织及癌旁组织各30例、人乳腺癌细胞株(MCF-7、MDA-MB-231、T47D)和人正常乳腺细胞,采用Real-time PCR法检测组织和细胞中的TNFR1mRNA;将MCF-7细胞分为3组,A组不转染,B组转染阴性对照质粒,C组转染siRNA-TNFR1质粒,转染72 h后分别采用MTT法及流式细胞仪观察细胞增殖及凋亡,Western blot法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶8(Caspase-8)及核转录因子κB(NF-κB)。结果人乳腺癌组织和癌旁组织中TNFR1 mRNA相对表达量分别为1.41±0.08和0.38±0.05,癌组织与癌旁组织相比P<0.05;人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、T47D中TNFR1mRNA相对表达量分别为2.48±0.06、1.51±0.02、1.66±0.01,人正常乳腺细胞中TNFR1 mRNA相对表达量为1.00±0.09,人乳腺癌细胞与人正常乳腺细胞相比P均<0.05。A、B、C组细胞增殖能力(吸光度值)分别为0.96±0.09、0.93±0.11、0.62±0.05,细胞凋亡率分别为8.23%±3.50%、9.92%±3.19%、24.61%±2.46%,C组与A、B组比较P均<0.05。A、B、C组细胞中Caspase-8蛋白相对表达量分别为0.40±0.03、0.42±0.05、0.82±0.01,NF-κB蛋白表达相对量分别为0.79±0.03、0.76±0.04、0.32±0.06,C组与A、B组比较P均<0.05。结论人乳腺癌组织和细胞中TNFR基因高表达,其可能通过激活NF-κB信号通路抑制Caspase-8的表达来促进乳腺癌细胞增殖、抑制细胞亡。

miRNA-7对食管癌细胞TE-1化疗耐药的影响

目的探讨微小RNA-7(miRNA-7)过表达对食管癌细胞TE-1顺铂敏感性的影响及其可能机制。方法用Lipofectmin 2000法向食管癌细胞株TE-1转染组瞬时转染miRNA-7 mimic,向转染对照组瞬时转染mimicNegative Control,通过RT-PCR检测以上2组及空白对照组的miRNA-7以及表皮生长因子受体(EGFR)m RNA表达情况。Western blot法分别检测转染组与转染对照组总EGFR及细胞浆、细胞核内的EGFR蛋白表达。CCK-8检测转染组与转染对照组TE-1的顺铂半数抑制浓度(IC50)。免疫荧光共聚焦显微镜观察转染组与转染对照组EGFR的表达。结果转染组较转染对照组及空白对照组的mi RNA-7表达显著增高,EGFR m RNA表达下降(均P<0.001);转染组较转染对照组总EGFR降低,核内EGFR增高(均P<0.01),胞浆EGFR表达降低(P<0.05);CCK-8结果显示,TE-1中miRNA-7过表达后顺铂(48 h)IC50较转染对照组增高(P<0.01);免疫荧光示转染组较转染对照组核内EGFR增高且胞膜与胞浆EGFR表达减少。结论食管癌细胞TE-1中mi RNA-7过表达可通过EGFR核转位增多使顺铂产生耐药性。

血管紧张素(1-7)通过Dll4/TLR-4/NF-κB通路减轻巨噬细胞的炎症反应

目的探讨Notch信号通路在血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]调控动脉粥样硬化(As)炎症反应中的作用。方法诱导人单核细胞白血病细胞株分化为巨噬细胞,然后随机分为对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、Ang-(1-7)组和Ang-(1-7)+A-779组,以相应药物处理后用ox-LDL刺激建立泡沫细胞模型。利用q RT-PCR和Western blot检测Ang-(1-7)对泡沫细胞分化过程中Notch信号通路分子的影响,包括Notch受体(Notch1、Notch2、Notch3、Notch4)、Notch配体(Dll1、Dll3、Dll4、Jagged1、Jagged2)和目标基因Hes1,ELISA法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。进一步用可溶性Dll4(Dll4.Fc)激活Notch信号通路,用q RTPCR和Western blot检测Hes1和Toll样受体4(TLR-4)/核因子κB(NF-κB)通路的变化进一步验证Ang-(1-7)对Dll4通路的影响。结果给予Ang-(1-7)处理后,由ox-LDL刺激巨噬细胞产生的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α被显著抑制(P<0.05)。同时,在泡沫细胞中Notch信号通路各分子的表达发生了不同的变化。其中Notch信号通路下游靶基因Hes1 m RNA的表达量经ox-LDL刺激后均明显增加,Ang-(1-7)可部分抑制Hes1的激活,Ang-(1-7)受体拮抗剂A-779可逆转Ang-(1-7)的作用。Notch1、Notch2受体及Dll1配体的m RNA表达量在ox-LDL组明显下调,而Ang-(1-7)组明显上调(P<0.05)。而Notch3、Notch4受体及Jagged2、Dll4配体的m RNA表达量在ox-LDL组明显增加(P<0.05),给予Ang-(1-7)干预后,其表达量较ox-LDL组明显下降(P<0.05)。Dll3和Jagged1配体在各组间表达量无明显变化(P>0.05)。Western blot也可见ox-LDL刺激诱导Notch3、Notch4、Dll4和Hes1蛋白明显升高(P<0.05),Ang-(1-7)可明显下调其表达(P<0.05),而A-779能部分抑制Ang-(1-7)的作用(P<0.05)。利用Dll4.Fc激活Notch信号通路可见炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著增加(P<0.05),Hes1、TLR-4 m RNA和蛋白,以及i NOS m RNA的表达增高(P<0.05),并促进NF-κB核转位,Ang-(1-7)能明显下调其表达,A-779能部分逆转Ang-(1-7)的作用,差异有统计学差异(P<0.05)。结论Ang-(1-7)可能通过调节Dll4相关通路,从而减轻TLR-4/NF-κB通路激活所致的巨噬细胞炎症因子分泌的作用。

白癜风患者外周血单个核细胞中TLR7、TLR9、NF-κB的表达及意义研究

目的探究白癜风患者外周血单个核细胞(PBMC)中Toll样受体7(TLR7)、Toll样受体9(TLR9)、核因子-κB(NF-κB)的表达情况及其意义。方法前瞻性选取2017年4月至2018年4月沈阳市第七人民医院收治的33例白癜风患者作为观察组,33例同期健康体检者为对照组。使用流式细胞仪检测两组PBMC中的TLR7、TLR9表达情况,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组PBMC中的NF-κB表达情况。结果流式细胞仪结果显示,观察组患者PBMC中的TLR7表达量为(94.65±3.931)%,高于对照组的(92.84±3.52)%,但差异无统计学意义(P>0.05);而观察组患者PBMC中的TLR9表达量为(86.68±11.01)%,低于对照组的(90.75±5.74)%,但差异无统计学意义(P> 0.05);PCR反应结果显示,观察组患者PBMC中的NF-κB mRNA表达量为(0.96±1.52),高于对照组的(0.24±0.35),差异具有统计学意义(P <0.05)。结论白癜风患者PBMC中TLR7表达过量,TLR9则低表达,但与正常健康者的表达情况未见较大差异,而该信号通路的信号分子NF-κB表达量远高于正常健康者,推测TLR7、TLR9、NF-κB的表达与白癜风可能存在一定的关系,但具体机制需进一步探寻。

MiR-9-5p调控瞬时受体电位M7对心肌缺血/再灌注大鼠的保护作用

目的探讨miR-9-5p调控瞬时受体电位M7(TRPM7)对心肌缺血/再灌注(MIR)大鼠的作用。方法将32只SD大鼠分为假手术组、模型组、miR-9-5p过表达组及空载体对照组,通过左冠状动脉结扎法建立MIR模型,假手术组不结扎,miR-9-5p过表达组和空载体对照组于模型建立前24 h分别尾静脉注入miR-9-5p agomir和agomir NC。通过HE染色观察各组大鼠心肌损伤情况;Real-time PCR检测各组大鼠心肌组织中miR-9-5p表达水平;酶联免疫吸附测定法检测各组大鼠血清中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)、乳酸脱氢酶(LDH)水平以及心肌组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况;双荧光素酶实验验证miR-9-5p与TRPM7的关系;免疫印迹法检测各组大鼠TRPM7、Bcl-2、Bax、磷酸化核因子κB 65(p-NF-κB p65)、toll样受体4(TLR4)蛋白表达。结果MiR-9-5p在大鼠心肌组织中低表达(P<0.05);miR-9-5p过表达能够降低CK-MB、cTnI、LDH表达水平,改善大鼠心肌损伤程度;与模型组相比,miR-9-5p过表达组心肌细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA、IL-6、TNF-α及IL-1β含量均下降,而Bcl-2蛋白表达和SOD含量上升(P<0.05);双荧光素酶实验结果显示,TRPM7为miR-9-5p的靶基因,且miR-9-5p过表达组TRPM7、p-NF-κB p65、TLR4蛋白表达均较模型组降低(P<0.05)。结论MiR-9-5p通过调控TRPM7抑制心肌缺血再灌注导致的心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症反应,并抑制TLR4/NF-κB通路。

局灶性脑缺血大鼠脑室下区mGluR7与PCNA的表达

目的：动态观察代谢型谷氨酸受体7型（mGluR7）及增殖细胞核抗原（PCNA）在局灶性脑缺血大鼠不同再灌注时段前脑侧脑室的脑室下区（SVZ）中的表达,探讨神经发生的机制。方法：42只体重为280-300 g的雄性SD大鼠随机分为假手术组、再灌注不同时间段（6 h、24 h、72 h、7 d、14 d、28 d）组,每组各6只。采用改良的线栓法制备大脑右侧中动脉阻塞（MCAO）2 h的大鼠短暂局灶性脑缺血模型,用免疫组化方法检测各组SVZ的mGluR7和PCNA的表达变化。结果：与对照组相比,缺血侧SVZ的mGluR7阳性细胞于再灌注24 h开始增加（P〈0.05）,再灌注72 h达到高峰,以后逐渐回落至正常水平。再灌注72 h时非缺血侧mGluR7阳性细胞亦有明显升高（P〈0.05）。此外,mGluR7阳性细胞还可明显见于梗死区周围,尾壳核、隔外侧核、梨状内核、部分大脑皮质等区域;再灌注24 h,无论缺血侧还是非缺血侧PCNA的阳性标记细胞数目均明显增加,高峰出现在再灌注7 d（P〈0.01）,并维持较高水平至再灌注14 d,再灌注28 d时数量虽已下降,但仍明显高于对照组（P〈0.05）。再灌注72 h、7 d时,缺血侧PCNA阳性表达细胞数显著高于非缺血侧（P〈0.05）。结论：短暂脑缺血能刺激SVZ的细胞增殖和mGluR7的表达上调,后者可能参与此处由短暂局灶性脑缺血引发的神经发生过程。

血管紧张素-(1-7)/Mas受体轴通过调控NF-κB通路保护心肌细胞对抗高糖诱导的损伤

目的：探讨血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]/Mas受体轴能否通过抑制核因子-κB（NF-κB）通路对抗高糖（HG）引起的心肌细胞损伤。方法：应用细胞计数检测试剂盒（CCK-8）检测心肌细胞存活率;双氯荧光素（DCFH-DA）染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧（ROS）水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相测定凋亡细胞的形态及数量的变化;JC-1染色法测定线粒体膜电位（MMP）;应用免疫蛋白印迹法测定NF-κB p65和cleaved caspase-3蛋白的表达水平。结果：应用35 mmol/L葡萄糖分别处理H9c2心肌细胞30、60、90、120和150 min均能明显增加磷酸化（p）NF-κB p65的水平,其中60 min时,表达水平增加最明显;1μmol/L Ang-（1-7）与HG共同处理心肌细胞60 min能抑制HG对p-NF-κB p65表达的上调作用;0.1-30μmol/L的Ang-（1-7）与HG分别共处理心肌细胞24 h均能抑制HG的细胞毒性,使细胞存活率增多;另一方面,1μmol/L Ang-（1-7）能抑制HG引起的细胞凋亡、氧化应激、线粒体损伤等,使凋亡细胞数量、cleaved caspase-3表达、ROS生成水平及MMP丢失减少;但是10μmol/L Ang-（1-7）/Mas受体拮抗剂A-779能明显阻断上述的Ang-（1-7）的心肌细胞保护作用;与Ang-（1-7）的作用相似,100μmol/L PDTC（NF-κB抑制剂）与HG共处理心肌细胞24 h也能显著抑制上述的HG损伤作用。结论：Ang-（1-7）/Mas受体轴可通过抑制NF-κB通路对抗HG诱导的心肌细胞损伤。

右美托咪定通过α7nAChR介导的TLR4/NF-κB通路减轻脂多糖诱导的急性肺损伤

目的探讨右美托咪定是否通过α7烟碱乙酰胆碱受体(α7nAChR)介导的Tol l样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路减轻脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)。方法24只Wistar大鼠随机分为对照组、急性肺损伤组、右美托咪定治疗组与α7nAChR抑制剂α-BGT组,每组6只。麻醉后,对照组腹腔注射生理盐水;急性肺损伤组股静脉注射LPS(10 mg/kg)诱导ALI模型;右美托咪定治疗组给予LPS后即刻股静脉持续输注右美托咪定[5μg/(kg.h)]至实验结束;α7nAChR抑制剂α-BGT组在输注右美托咪定前半小时腹腔注射1μg/kgα-BGT,其余处理同右美托咪定治疗组。LPS注射后12 h处死大鼠,收集血液和肺组织。HE染色观察肺组织病理学变化并进行损伤评分。抽取颈动脉血检测氧分压(PaO_(2))、碳酸氢根(HCO_(3)^(–))及乳酸(Lac)水平;测定肺组织湿/干重比(W/D)和髓过氧化物酶(MPO)活性;计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中总细胞、中性粒细胞及巨噬细胞数;ELISA法检测血液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10水平;Western blotting检测肺组织中α7nAChR、TLR4、p-NF-κB蛋白表达水平。结果肺组织病理学观察见右美托咪定治疗可明显减轻LPS诱导的肺泡壁和肺组织间隔增厚以及炎性细胞浸润,降低肺损伤病理评分(P<0.01)。与对照组比较,急性肺损伤组PaO_(2)、HCO_(3)^(–)水平降低,Lac、W/D、TNF-α、IL-6、IL-10水平及MPO活性升高,总细胞、中性粒细胞及巨噬细胞计数增多,肺组织中α7nAChR、TLR4、p-NF-κB蛋白表达水平升高(P<0.01);与急性肺损伤组比较,右美托咪定治疗组PaO_(2)、HCO_(3)^(–)、IL-10水平升高,Lac、W/D、TNF-α、IL-6水平及MPO活性降低,总细胞、中性粒细胞及巨噬细胞计数减少,肺组织中α7nAChR蛋白表达水平升高,TLR4、p-NF-κB蛋白表达水平降低(P<0.01)。而右美托咪定的作用可被α7nAChR抑制剂α-BGT部分逆转。结论右美托咪定可能通过α7nAChR介导的TLR4/NF-κB通路减轻LPS诱导的ALI。

NCOA7在缺氧条件下通过AhR调控OSCC细胞糖酵解过程

目的:研究核受体辅激活蛋白7(NCOA7)在缺氧条件下对口腔鳞癌细胞糖酵解过程的调节作用。方法:采用免疫荧光双染的方法检测口腔鳞癌组织中NCOA7和芳香烃受体(AhR)的表达。用氯化钴构建人舌鳞癌细胞株(SCC9)的缺氧模型。通过siRNA转染、RT-PCR和蛋白印迹等方法分析NCOA7与AhR的相互调节作用及对细胞糖酵解水平的影响。结果:NCOA7和AhR在口腔鳞癌组织细胞核中表达均高于癌旁组织(P<0.0001)。在缺氧条件下,NCOA7的沉默增强了SCC9细胞的糖酵解水平(P<0.05),而激活AhR可以部分逆转这一过程(P<0.05)。结论:NCOA7在缺氧条件下可通过AhR干预口腔鳞癌的糖酵解水平。

S100A4、TLR7及NF-κBp65在子宫内膜癌中表达及对病情进展和预后的评估作用

目的探讨S100钙结合蛋白A4(S100A4)、Toll样受体7(TLR7)及细胞核因子-κBp65(NF-κBp65)在子宫内膜癌中表达及对病情进展和预后的评估作用。方法收集2015年3月—2018年3月收治的78例子宫内膜癌为子宫内膜癌组,并选取同期行手术治疗的子宫内膜不典型增生85例为对照组。比较两组S100A4、TLR7及NF-κBp65表达情况,并分析三者与子宫内膜癌病理特征的关系。随访3年,比较不同S100A4、TLR7及NF-κBp65表达子宫内膜癌患者的预后情况,并分析三者对患者预后死亡的预测价值。结果子宫内膜癌组S100A4、TLR7、NF-κBp65阳性率均高于对照组(P<0.01)。国际妇产科联盟(FIGO)分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移的子宫内膜癌患者S100A4、TLR7、NF-κBp65阳性率分别高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05,P<0.01)。S100A4、TLR7、NF-κBp65阳性表达患者病死率分别高于S100A4、TLR7、NF-κBp65阴性表达患者(P<0.05,P<0.01)。S100A4、TLR7、NF-κBp65及三者联合检测预测子宫内膜癌患者预后死亡的曲线下面积分别为0.958、0.754、0.832、0.966;三者联合检测的敏感度、特异度高于S100A4、TLR7、NF-κBp65单一检测(P<0.05)。结论S100A4、TLR7及NF-κBp65在子宫内膜癌组织中高表达,与病情进展和预后相关,三者联合检测可评估患者预后。

核受体共激活因子7在槟榔碱诱导的上皮间充质转化中的生物学功能

目的研究核受体共激活因子7(nuclear receptor coactivator 7,NCOA7)在口腔黏膜下纤维性变(OSF)中的表达及意义,并探讨其在人口腔角质细胞株HOKs间充质转化过程中的作用。方法收集OSF组织30例及正常口腔黏膜组织15例,采用免疫印迹法检测NCOA7、上皮间充质转化相关标记物在OSF组织及正常黏膜组织中蛋白水平的表达情况;以Western blot法检测槟榔碱刺激后HOKs中NCOA7、上皮及间充质标记物的蛋白水平变化。结果 NCOA7在30例OSF组织高表达(P<0.05);同时在细胞基底层出现间充质标记物的阳性表达。NCOA7在槟榔碱刺激的HOKs中高表达,且具有槟榔碱浓度依赖性(P=0.004 3);随着槟榔碱浓度的升高,上皮标志物表达逐渐下调,间充质标记物表达逐渐升高。结论口腔黏膜下纤维性变组织中高表达的NCOA7,可能参与调控上皮细胞间充质转化过程,进一步促进纤维化进程。

LncRNA uc.48^(+)通过激活P2X7R/NF-κB通路促进骨关节炎软骨组织的炎症

目的:研究LncRNA uc.48^(+)对骨关节炎(OA)软骨组织炎症的调节作用并探讨机制。方法:关节腔注射碘乙酸钠(MIA)诱导SD大鼠OA模型,记录注射后21d内膝关节注射侧的机械痛阈值(MWT)和热缩足潜伏期(PWTL),用OS染色观察21d关节软骨组织病理变化,实时定量PCR(qRT-PCR)检测软骨LncRNA uc.48^(+)和P2X7R的水平。使用质粒pcDNA3.1构建LncRNA uc.48^(+)的过表达载体(pc-LncRNA uc.48^(+))以及空载体(pc-null)。大鼠分为sham组(n=10)和MIA组(n=50),其中MIA组中随机选40只,并随机分为pc-null组、pc-LncRNAuc.48^(+)组、pc-LncRNA uc.48^(+)+核苷酸P2X受体7(P2X7R)通道拮抗剂(AZD9056)组、pc-LncRNA uc.48^(+)+核因子κB(NF-κB)抑制剂(Helenalin)组(n=10)。Western blot检测以上各组中P2X7R、P65、磷酸化P65(p-P65)、基质金属蛋白酶(MMP)-13、P物质(SP)的水平。ELISA检测软骨组织前列腺素(PG)E2、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β。体外软骨细胞转染pc-LncRNA uc.48^(+)或pc-null 24h检测P2X7R、P65、p-P65表达。结果:与造模前比,MIA注射1~21d大鼠MWT和PWTL降低,关节PGE2、TNF-α、IL-1β都升高(均P<0.05);MIA组1~-21d LncRNA uc.48^(+)持续上调,同时P2X7R mRNA也上调(均P<0.05)。MIA的大鼠中,pc-LncRNAuc.48^(+)组的PGE2、TNF-α、IL-1β、P2X7R、P65、p-P65水平都高于pc-null组(均P<0.05),而pc-LncRNA uc.48^(+)+AZD9056组的PGE2、TNF-α、IL-1β、P65、p-P65、MMP-13、SP水平都低于pc-LncRNAuc.48^(+)组(均P<0.05);另外,pc-LncRNA uc.48^(+)+Helenalin组的PGE2、TNF-α、IL-1β、MMP-13、SP水平都低于pc-LncRNAuc.48^(+)组(均P<0.05);然而,pc-LncRNA uc.48^(+)+Helenalin组的P2X7R水平和pc-LncRNAuc.48^(+)组无差异(P>0.05)。结论:LncRNA uc.48^(+)通过激活P2X7R/NF-κB信号通路通路促进骨关节炎软骨组织的炎症。

核受体辅活化蛋白7与自噬体蛋白LC3的相互作用

目的:探索核受体辅活化蛋白7(nuclear receptor co-activator 7,NCOA7)与微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)的相互作用,并确定其结合位点。方法:在胃癌AGS细胞中行质谱分析,在HEK293细胞中行GST-LC3沉淀实验,分别检测两种细胞中LC3结合蛋白;采用分子克隆法构建NCOA7不同截短体和点突变体;免疫印迹法检测NCOA7的截短体ΔN462,ΔN650,ΔN650-I749/750A质粒蛋白的表达水平;GST-LC3与NCOA7突变体的沉淀实验鉴定NCOA7与LC3的结合位点。结果:质谱分析和GST-LC3沉淀实验结果表明,NCOA7是LC3结合蛋白。免疫印迹结果显示,NCOA7不同截短体和点突变体质粒蛋白均有表达。GST-LC3与NCOA7突变体的沉淀结果显示,NCOA7 N端WEDL基序和C端WEII基序是LC3结合位点。WEII基序与LC3结合受到NCOA7的651~720位氨基酸结构抑制,是一个可调节的LC3结合位点。结论:NCOA7是LC3结合蛋白,其N端WEDL和C端WEII与LC3结合。

卵巢癌患者化疗后骨髓抑制并发肺部感染病原菌特点及与外周血单核细胞Nrf2 mRNA和TLR7 mRNA的相关性

目的观察卵巢癌患者化疗后骨髓抑制并发肺部感染病原菌特点,并分析其与外周血单核细胞(PBMC)Nrf2 mRNA、TLR7 mRNA表达的相关性。方法选取我院30例化疗后骨髓抑制并发肺部感染的卵巢癌患者(并发肺部感染组)及同期30例化疗后骨髓抑制无肺部感染的卵巢癌患者(未并发肺部感染组)为研究对象,观察并发肺部感染患者病原菌特点,检测两组患者化疗后PBMC Nrf2 mRNA、TLR7 mRNA的表达水平,分析Nrf2 mRNA、TLR7 mRNA与骨髓抑制的关系及Nrf2 mRNA、TLR7 mRNA对骨髓抑制并发肺部感染的预测价值。结果共检出病原菌30株,其中革兰阳性菌12株(40.00%),革兰阴性菌18株(60.00%),且以铜绿假单胞菌为主(20.00%)。白细胞减少0~Ⅰ度患者、中性粒细胞减少0~Ⅰ度患者Nrf2 mRNA水平显著高于白细胞减少Ⅱ~Ⅲ度患者和中性粒细胞减少Ⅱ~Ⅲ度患者,而TLR7 mRNA水平显著低于白细胞减少Ⅱ~Ⅲ度患者和中性粒细胞减少Ⅱ~Ⅲ度患者(均P<0.05)。白细胞减少、中性粒细胞减少与Nrf2 mRNA表达水平呈负相关,与TLR7 mRNA表达水平呈正相关(均P<0.05)。并发肺部感染组患者Nrf2 mRNA水平显著低于未并发肺部感染组,而TLR7 mRNA水平显著高于未并发肺部感染组(均P<0.05)。Nrf2 mRNA对骨髓抑制并发肺部感染预测的敏感度为80.2%,特异度为71.3%;TLR7 mRNA的敏感度为83.5%,特异度为70.9%;两者联合预测的敏感度为88.4%,特异度为78.6%。结论卵巢癌患者化疗后骨髓抑制与PBMC Nrf2 mRNA、TLR7 mRNA存在显著联系。骨髓抑制并发肺部感染的病原菌以革兰阴性菌为主,患者PBMC Nrf2 mRNA水平显著降低,TLR7 mRNA水平显著升高,两者联合检测对骨髓抑制并发肺部感染具有较高的预测价值。