不同核酸提取方法对HBV-DNA检测性能验证情况分析

目的评估2种乙型肝炎病毒(HBV)-DNA提取方法及2家检测试剂的性能,有助于选择优化提取试剂和检测试剂。方法2023年4月采用达安全自动核酸提取仪提取法(磁珠法)和手工提取法(一步法),并用达安和圣湘2种HBV-DNA试剂检测,对其进行精密度、正确度、线性范围、检出限及抗干扰能力等性能进行验证和评价。结果达安全自动核酸提取仪提取达安试剂检测、手工提取达安试剂检测和手工提取圣湘试剂检测在精密度、正确度、线性范围、检出限方面验证结果均达标;达安全自动核酸提取仪提取圣湘试剂检测在低值检测中变异系数大于5%,最低检测限验证不合格;抗干扰能力方面,全自动核酸提取仪提取的2.0 g/dL血红蛋白浓度的样本用达安和圣湘试剂检测结果均不受影响。手工提取甘油三酯浓度达3000 mg/dL的样本用达安和圣湘试剂检测的结果均不受影响。结论不同厂家的提取和检测试剂避免混用,达安和圣湘试剂对HBV-DNA定量检测的结果均符合要求。

全自动核酸提取仪对不同类型ASFV、PEDV样品的提取效果

研究以非洲猪瘟病毒(ASFV)的各类型阳性样品以及流行性腹泻病毒(PEDV)阳性样品为检测对象,评测全自动核酸提取仪对DNA和RNA核酸的提取效果,旨在帮助动物疫病检测实验室了解如何评测全自动核酸提取仪是否满足检测需求。试验选用已经过检测结果为阳性的不同类型ASFV样本和PEDV阳性的粪便拭子样品,进行10倍梯度稀释并将检测结果与已知的检测原值进行对比。结果显示,试验使用的核酸提取仪的稳定性满足需求,但敏感性较差,可能存在环境、人员、车辆等病毒含量低的样品被漏检。在抗干扰方面,试验使用的核酸提取仪对咽喉拭子的核酸提取结果存在假阴性的情况;该仪器对肛门拭子和环境样品的抗干扰性不佳,也可能出现假阴性结果;该仪器不会受样品影响而检测出假阳性结果。

小型混匀仪关键部件振动件的设计与仿真分析研究

小型混匀仪作为核酸提取仪的主要组件,需要具有较高的稳定性和耐疲劳性。目前,国内市场上大部分混匀仪的振动件都不够稳定且容易损坏。为解决上述问题,设计一种回转式结构的振动件。该振动件在高频振动位置开有相应槽口,并在重要振动位置原有材料的基础上内衬了高性能弹簧钢60Si_(2)Mn。对该结构进行受力分析、疲劳分析以及仿真分析,验证了设计的振动件能够满足高强度、稳定性以及耐久性的要求。

核酸提取仪用多轨道注射泵设计与研究

适用于核酸提取仪的多轨道注射泵是一种新型注射泵,可以将少量药液通过单轨道或多轨道等多种注射方式准确、均匀、连续地泵入体内。文章根据多轨道注射泵的特点设计了一款适用于核酸提取仪的多轨道注射泵。在分析多轨道注射泵工作原理的基础上,设计了多轨道注射泵电机、泵体和柱塞泵等关键部件,并对多轨道注射泵进行了相应的传动受力分析计算,从而验证了设计的可行性。

纳米磁珠核酸自动提取仪在手足口病病毒检测的临床应用价值研究

目的对手工核酸提取法和全自动核酸提取仪法在手足口病肠道病毒RNA荧光定量PCR检测中阳性检出率、精密度、重复性进行比较。方法回顾性研究。随机收集我院2016年6月份门诊手足口病疑似患儿咽拭子标本96例,分别采用NP968核酸提取仪和手工Trizol法处理标本后,应用美国Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR进行扩增,记录各组CT值,分析比较两种提取方法的阳性检出率,随后采用稀释法比较手足口病肠道病毒两种方法提取的阳性检出率;随机各取一份低CT值(强阳性)和高CT值(弱阳性)标本,分别用自动核酸提取法和手工法每组连续测定10次,记录提取后荧光定量PCR扩增的CT值进行精密度分析。随机取10份高CT值咽拭子标本分别采用两种提取方法提取,重复做3次计算CT值的平均值,进行重复性分析。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用T Test,阳性检出率采用χ2检验。结果稀释法分析评估NP968核酸提取阳性检出率较Trizol法高,有统计学意义(46.9%vs 39.6%,P=0.016);手足口病肠道病毒在高CT值组,NP968核酸自动提取较Trizol法提取精密度高,有统计学意义(36.70±0.17 vs 37.40±0.23,P<0.05),而低CT值组,二者无明显差异(21.40±0.16 vs 21.40±0.26,P>0.05),且NP968核酸提取仪法重复性较手工Trizol提取法好(36.39±0.27 vs 36.68±0.38,CV 0.74%vs 1.04%)。结论 NP968核酸提取仪在手足口病肠道病毒RNA提取阳性检出率、精密度、重复性方面优于Trizol手工法,并且自动核酸提取仪可以为临床诊断手足口病肠道病毒含量低的样本提供更有价值的帮助。

乙肝病毒DNA检测2种不同核酸提取方法的性能验证情况分析

目的:对乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测的2种不同核酸提取方法,即手工法(煮沸法)和全自动核酸提取仪法(磁珠法),在使用相同的检测试剂和核酸扩增仪的条件下进行性能验证,以评价其验证结果。方法:依据《医学实验室质量和能力认可准则》《全国临床检验操作规程》等相关文件,由同一操作人员应用中山达安公司生产的HBV-DNA检测试剂盒和ABI7500实时荧光核酸扩增仪,分别采用手工法和全自动核酸提取仪法提取HBV-DNA进行临床样本的批内精密度、批间精密度、正确度、线性范围性能验证实验。结果:手工法的高值血清批内精密度为2.18%,低值血清批内精密度为3.76%;高值质控品批间精密度为3.29%。全自动核酸提取仪法的高值血清批内精密度为1.78%,低值血清批内精密度为2.44%;高值质控品批间精密度为2.84%。正确度验证分别取浓度为2.0×10^3、2.0×10^4、2.0×10^5、2.0×10^6copies/ml的可溯源标准品进行验证,手工法偏倚分别为-4.88%、-2.51%、-2.46%,-2.12%,全自动核酸提取仪法偏倚分别为-2.37%、-0.95%、0.74%、-1.33%。线性范围验证中,手工法和全自动核酸提取仪法的相关系数分别为0.9660、0.9858,均能满足临床检测的需求。结论:全自动核酸提取仪法较手工法提取核酸有利于简化HBV-DNA提取流程,实现分子生物实验室自动化提取核酸。

HBV-DNA全自动检测系统的性能验证

目的对国产HBV-DNA全自动核酸提取仪及实时荧光定量PCR试剂(磁珠法)检测性能参数进行验证,评价其是否可应用于临床检测。方法依据CNAS《医学实验室质量和能力认可准则》相关文件对检测系统的精密度、线性范围、检测线、正确度、抗干扰能力、特异性进行性能验证。结果批间及中间精密度CV均<5%,标准差(s)分别<0.24、0.32。线性范围为1.03×102~2.71×107,检测线为100 IU/mL,正确度符合要求(<靶值对数值±0.4)。血红蛋白(≤2 g/dL)、胆红素(≤28 mg/dL)、甘油三脂(≤3000 mg/dL)对检测结果无影响,特异性符合要求。结论本实验室HBV-DNA全自动检测系统符合YY/T 1182—2010《核酸扩增检测用试剂(盒)》要求,可应用于临床检测工作。

疫情期间医院配备新型冠状病毒核酸检测设备方案的探讨

目的上海市中医医院作为上海市的三甲医院为积极、快速执行国务院下达的指令,要求医院具备二级以上实验室,具备核酸检测的能力,进行核酸检测设备的疫情紧急采购。方法通过了解核酸检测原理并对核酸检测仪性能,医院现有场地情况和临床科室要求进行比较,从多个预设方案中确定一个最适合我院具体情况的方案。结果将采购全自动核酸提取仪确定为最优方案,并需额外采购5台气溶胶吸附器,放置在采样点和PCR实验室。最终在2020年6月10日完成全部工作。结论只有了解核酸检测原理,通过场地合理布局,产品性能比较,设备及时采购,才能确保新冠病毒检测工作的顺利实现。

不同提取方法及3种试剂盒对SARS-CoV2核酸检测效果评估

目的对3种SARS-CoV2核酸检测试剂盒、4种病毒核酸提取试剂盒以及2种自动核酸提取仪对新型冠状病毒核酸检测效果进行比较分析。方法采集新冠病毒弱阳性病人咽拭子标本,比较3种SARS-CoV2核酸检测试剂盒的灵敏度;以不同浓度新型冠状病毒阳性对照质粒为模板,使用4种核酸提取试剂盒、2种自动核酸仪对模板进行提取后进行RT-qPCR扩增实验,比较提取试剂盒及提取仪的提取效率。结果 A品牌SARS-CoV2核酸检测试剂盒灵敏度最高;磁珠法对病毒核酸提取效率高于离心柱法;核酸自动提取仪中品牌H(进口品牌)性能更佳。结论在新型冠状病毒的实验室诊断中,各种商业试剂盒质量参差不齐,实验室选择性能稳定、品质优越的核酸提取仪以及灵敏度、特异性、重复性最佳的核酸检测试剂盒对于实验室检测结果的可靠性更为重要,既可以为临床诊治提供参考,更能为传染病防控措施提供方向。

全自动核酸提取仪联合真空浓缩仪在法医学中的应用

目的探讨全自动核酸提取仪联合真空浓缩仪在法医学DNA提取中的应用价值。方法采集人外周静脉血稀释成40、80、120、160、200、240、280和320倍的梯度样本,并对每一梯度的样本分别进行无抑制剂、加黑机油、加铁锈、加果酸、加锡纸、加靛蓝6种处理。应用全自动核酸提取仪对上述样本进行DNA纯化提取,提取后的DNA洗脱液取6μL直接进行扩增,剩余部分使用真空浓缩仪进行浓缩,浓缩前后的DNA均使用Investigator 26plex QS试剂盒进行扩增、检测。结果添加果酸的梯度样本仅在40倍稀释时获得完整STR分型结果,另外5种方式处理的梯度样本在40~160倍稀释时均获得完整的STR分型。DNA浓缩后的STR分型结果显示,平均峰高和基因座检出率均有一定程度的提高,但是效果并不明显。结论全自动核酸提取仪具有高效的抑制剂去除能力和DNA提取效率,真空浓缩仪可在一定程度上浓缩DNA,两者联合使用可提高法医学检材的检验成功率。

4种全自动核酸提取仪提取全血DNA效率的比较

目的比较4种全自动核酸提取仪在全血基因组检测中的核酸提取效果。方法分别用4个厂家的全自动核酸提取仪按预定的提取程序自动执行全血核酸提取,并与本实验室手工提取的核酸进行纯度和浓度比较。结果 4种全自动核酸提取仪提取全血核酸的260/280值均满足纯度1.7~2.0要求,并且核酸提取浓度高于本实验手工提取法或与本实验室手工提取法相当。结论 这4种全自动核酸提取仪提取效果优,自动化程度高,能满足临床标本应用。

(自动)核酸提取仪温度校准的几点建议

主要介绍了(自动)核酸提取仪温度校准过程中遇到的一些问题以及针对这些问题的解决方案,同时总结归纳了几种(自动)核酸提取仪温度校准过程中的注意事项。

自动核酸提取仪校准结果不确定度评定

自动核酸提取仪采用核酸提取试剂完成对样本核酸的提取,在新冠疫情期间,广泛应用于核酸检测实验,其质量直接影响样品核酸提取效率和检测结果的准确性。本文介绍了自动核酸提取仪的定义、结构原理和作用,并对其温度、振动频率和核酸提取回收率进行不确定度评定和分析。

基于主客观因素组合赋权的核酸提取仪界面设计人机可靠性评价

针对核酸提取仪人机界面的人机可靠性评价问题,提出了基于主客观因素组合赋权的定量评价方法。根据标准化工厂分析风险人的可靠性分析(Standardized Plant Analysis Risk Human Reliability Analysis, SPAR-H)方法,构建了核酸提取仪界面设计人机可靠性评价体系;将优劣解距离法(Technique for Order Preference by Similarity to Ideal Solution, TOPSIS)和引入基尼系数的客观赋权法(Criteria Importance Through Intercriteria Correlation, CRITIC)相结合,组合赋权评价体系中的各性能影响因子;通过权重值修正性能影响因子的水平乘数,使其更适于核酸提取仪界面设计人机可靠性评价;通过实例及统计学检验方法,验证了基于主客观因素组合赋权所构建的核酸提取仪界面设计人机可靠性评价体系具有可靠性。

磁珠法提取丙肝RNA的交叉污染风险评价

目的考察EX3600核酸自动提取仪提取丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)时防交叉污染的能力。方法使用EX3600核酸自动提取仪以阴性、阳性相交的方式上样提取HCV-RNA,通过对提取样本进行PCR定量检测确定阴性样本在提取过程中是否被阳性样本污染。结果阳性样本均检出,阴性样本均未检出。结论本研究在一定程度上证明了EX3600自动核酸提取仪的防污染能力,为保证结果的准确性提供依据。

基于核酸自动提取仪的FQ-PCR法在人巨细胞病毒核酸定量检测中的临床应用

目的 评价基于核酸自动提取仪的实时荧光PCR（FQ-PCR）法在人巨细胞病毒（HCMV）核酸定量检测中的性能。方法 取高浓度值的HCMV标准品进行梯度稀释,评价灵敏度;取低值、中值、高值标准品评价精密度;取高浓度的HCMV抗凝血浆梯度稀释验证线性范围;使用HCMV DNA阴性抗凝血浆稀释标准品至最低灵敏度浓度500 copy/ml,验证最低检出限;取高浓度血浆样本和生理盐水,进行交叉污染验证试验。分别用核酸自动提取仪与手工法提取50份血浆标本的HCMV核酸,评价两方法的线性关系。结果 灵敏度方面,呈良好的线性关系（r=0. 998）。精密度方面,3个样本的重复性实验CV值均〈5%。线性范围验证显示在5. 0×10^2copy/ml-5. 0×10^7copy/ml时呈现良好的线性关系（r=0. 991,P 〈0. 05）。实验不存在交叉污染情况。2种核酸提取方法具有良好的相关性。结论 基于安普利Anadas9850全自动核酸提取仪的FQ-PCR法在HCMV核酸定量检测中性能良好,能够较好地满足临床检测需求。

三种全自动核酸提取仪提取2019-nCoV RNA性能比较研究

目的比较3种全自动核酸提取仪的检测结果,探讨国产全自动核酸提取仪对2019-nCoV RNA的检测性能。方法分别用甲(进口)、乙(国产)、丙(国产)3台全自动核酸提取仪,选用康彻思坦生物2019-nCoV RNA(液体)质控品S5(批号202007002,参考水平1000 cp/mL)作为实验对象,对该质控品进行10~1000倍系列稀释,配制成不同浓度的质控品作为实验样本。其中甲提取仪使用甲配套试剂,乙、丙属于同一厂家不同型号,均使用其配套试剂和第三方试剂,用以评价防污染能力、精密度、准确性、重复性、检测下限及线性相关性。结果以进口品牌甲作为参考标准进行比较;使用乙配套试剂时,乙、丙与甲的线性相关系数分别为:0.980、0.995(N端);0.991、0.983(ORF1ab端);使用第三方试剂时,乙、丙与甲的线性相关系数分别为:0.999、0.915(N端);0.997、0.825(ORF1ab端)。结论国产品牌乙、丙提取仪提取2019-nCoV RNA可以实现全自动操作,相关性较好,系统性能可与国际水平相当,且提取时间较甲短,在标本数量较多时,有明显优势。

核酸提取仪校准技术案例分析及探讨

针对核酸提取仪校准过程中存在的问题,依据JJF 1874-2020《(自动)核酸提取仪校准规范》,解析了核酸提取仪的关键计量特性和量传溯源体系。以常见核酸提取仪为例,开展了核酸提取仪温度、振动频率和核酸提取回收率等四类计量特性的计量校准方法和不确定度评定案例分析,温度示值误差0.5℃(55℃点)和0.7℃(70℃点),温度均匀性0.3℃(55℃点)和0.5℃(70℃点),温度稳定性±0.1℃,振动频率稳定性±0.1 Hz,核酸提取回收率82.9%,回收率一致性6.3%,回收率重复性4.5%。评定了温度示值误差和核酸提取回收率的不确定度。相比JJF 1874-2020《(自动)核酸提取仪校准规范》中核酸提取回收率的不确定度评定示例,增加了微量分光光度计测量不确定度、移液器和电子天平引入的不确定度分量。总结了核酸提取仪温度测量装置、振动频率测量装置的类型和优缺点,分析了核酸回收率的影响因素,以及核酸回收率测量过程使用恒一提取方法和提取试剂的重要性。对校准过程中的问题和难点,提出了针对性的解决方案和优化方法,为核酸提取仪校准工作的开展提供方法参考。探讨了核酸提取仪交叉污染率的概念和检测方法,实验测得交叉污染率为0.0%。