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适用于RPA-LFD技术检测对虾肝胰腺DNA样品的快速制备试剂研究
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作者 姚梦丽 白昌明 +1 位作者 王崇明 辛鲁生 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2024年第4期166-174,共9页
为摆脱常规核酸样品提取步骤繁琐、耗时等问题,实现真正的现场快速检测,本研究致力于研制和优化一种对虾肝胰腺中DNA样品的核酸快速制备试剂,即核酸释放剂,适用于重组酶聚合酶扩增技术(recombinasepolymeraseamplication,RPA)与侧向流... 为摆脱常规核酸样品提取步骤繁琐、耗时等问题,实现真正的现场快速检测,本研究致力于研制和优化一种对虾肝胰腺中DNA样品的核酸快速制备试剂,即核酸释放剂,适用于重组酶聚合酶扩增技术(recombinasepolymeraseamplication,RPA)与侧向流层析试纸条技术(lateralflow dipstick, LFD)结合的RPA-LFD技术检测。实验优选20~100 mmol/L Tris-HCl、50~250 mmol/L KCl、0.01%~0.10%十二烷基硫酸锂(LDS)、0.5%~2.0%聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)、1~5mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EGTA2Na)、0.5~5.0 mmol/L牛血清白蛋白(BSA)、1~5 mg/mL明胶、0.01%~0.10%海藻糖、1%~5%甜菜碱等配制成核酸释放剂。以对虾肝肠孢虫(Enterocytozoonhepatopenaei,EHP)阳性样本和阴性样本对核酸释放剂各组分间配比进行优化,采集绿豆大小的对虾肝胰腺组织加入100μL核酸释放剂,100℃加热3 min,取上清液进行RPA-LFD反应,测试各组分不同浓度配比;并以对虾急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND)阳性样品及阴性样品作为检测模板对优化后核酸释放剂再次验证。结果显示,核酸释放剂的各组分最佳配比为100 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L KCl、0.02%LDS、0.5%Triton X-100、1 mmol/L EGTA2Na、0.05%海藻糖、1 mg/mL明胶、0.5 mmol/L BSA、2%甜菜碱。RPA-LFD方法检测可显著区分阳性和阴性样品。本研究优化的核酸释放剂,适用于RPA-LFD检测对虾肝胰腺病原DNA样品的制备,有效避免了常规DNA样品繁琐、耗时的制备步骤,极大地提高了核酸水平病原检测效率。 展开更多
关键词 核酸释放剂 重组酶聚合酶扩增(RPA) 侧流层析试纸条(LFD) 虾肝胰腺 病原快速检测
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基于核酸扩增-侧流层析试纸的食源性致病菌快速检测研究进展
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作者 贠紫光 魏勇 +3 位作者 张建 崔双双 李灿 孙凤霞 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第5期412-425,共14页
食源性致病菌严重危害食品安全。传统的致病菌检测方法费时耗力,难以应对现代食品安全检测快速、简便的需求。分子生物学检测方法,如聚合酶链式反应法、等温核酸扩增法以及基于规律成簇间隔短回文重复序列的核酸检测技术等,已被广泛应... 食源性致病菌严重危害食品安全。传统的致病菌检测方法费时耗力,难以应对现代食品安全检测快速、简便的需求。分子生物学检测方法,如聚合酶链式反应法、等温核酸扩增法以及基于规律成簇间隔短回文重复序列的核酸检测技术等,已被广泛应用于食源性致病菌检测,为保障食品安全发挥了重要作用。近年来,联用核酸扩增检测技术和免疫层析技术成为食源性致病菌快速检测的研究热点。本文总结了核酸扩增和侧流层析试纸联用快速检测食源性致病菌的研究进展,重点讨论了其优缺点,并展望其未来发展方向,以期为食源性致病菌的检测和防控提供参考。 展开更多
关键词 食源性致病菌 核酸扩增 侧流层析试纸 快速检测
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超声诊断胎儿侧脑室扩张合并畸形及其与染色体异常的关系 被引量:10
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作者 黄苑铭 黄冬平 +3 位作者 钟伟 江玮 陈燕 陈以荣 《中国医学影像学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期617-622,624,共7页
目的探讨胎儿侧脑室扩张合并畸形及其与染色体异常的关系,为临床咨询提供参考。资料与方法回顾性分析150例经超声诊断为侧脑室扩张胎儿的超声图像、染色体核型分析及高分辨微阵列比较基因组杂交技术(aCGH)结果。结果150例侧脑室扩张胎儿... 目的探讨胎儿侧脑室扩张合并畸形及其与染色体异常的关系,为临床咨询提供参考。资料与方法回顾性分析150例经超声诊断为侧脑室扩张胎儿的超声图像、染色体核型分析及高分辨微阵列比较基因组杂交技术(aCGH)结果。结果150例侧脑室扩张胎儿中,孤立性侧脑室扩张81例,合并胎儿超声软指标30例,合并其他中枢神经系统畸形22例,合并其他畸形17例。以上4组染色体核型分析中,异常核型13例,a CGH异常15例。各组染色体异常及aCGH检出率差异有统计学意义(P<0.05),其中超声软指标组染色体及aCGH异常率显著高于单纯性侧脑室扩张组(P<0.05),其余各组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论产前超声发现侧脑室扩张应仔细检查胎儿各系统。合并胎儿超声软指标或其他结构畸形时,染色体异常的几率明显增加;孤立性侧脑室扩张也需排除染色体异常并定期超声随访。 展开更多
关键词 侧脑室 扩张 病理性 超声检查 产前 染色体畸变 微阵列分析 核酸杂交 胎儿
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口蹄疫病毒核酸试纸条检测方法的建立 被引量:6
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作者 龚真莉 蒋韬 +3 位作者 祁淑芸 陈国栋 刘艳红 李勇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第9期2292-2297,共6页
本研究通过核酸探针与免疫层析相结合的方法,建立了一种简单、敏感、特异的检测口蹄疫病毒的方法。试验利用RT-PCR方法获得口蹄疫病毒3D核苷酸片段,在引物中设计了灵敏度高、特异性好的核酸探针——生物素和地高辛,使扩增产物结合探针... 本研究通过核酸探针与免疫层析相结合的方法,建立了一种简单、敏感、特异的检测口蹄疫病毒的方法。试验利用RT-PCR方法获得口蹄疫病毒3D核苷酸片段,在引物中设计了灵敏度高、特异性好的核酸探针——生物素和地高辛,使扩增产物结合探针。利用胶体金的放大原理将链霉亲和素与金颗粒形成胶体金混合物,从而与RT-PCR产物中的生物素探针结合。硝酸纤维素膜上端标记生物素化山羊抗兔IgG作为指控条带,下端标记抗地高辛抗体以捕获RT-PCR产物中的地高辛探针。组装金标试纸条,检测RT-PCR产物,结果表明该核酸试纸条可以检测到0.3×10^-3-3×10^-3μg/μL,敏感性高于琼脂糖凝胶电泳,两种方法的符合率高,核酸试纸条检测方法是一种敏感性高、成本低且费时短的新型检测方法。该方法为口蹄疫病毒检测提供了一种新的思路。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3D基因 核酸试纸条 生物素探针 地高辛探针
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食品中单增李斯特菌PCR-NALF检测方法 被引量:2
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作者 王丽丽 赵瑜 +2 位作者 唐慧林 何艳玲 林松 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期194-197,共4页
建立了一种快速检测单增李斯特菌的聚合酶链式反应-核酸层析(PCR-NALF)方法,该方法通过一对标记生物素和地高辛的引物,对提取自样品中的DNA进行扩增,然后用包被亲和素和抗地高辛抗体的层析试纸条对扩增产物进行检测,并通过肉眼可见的... 建立了一种快速检测单增李斯特菌的聚合酶链式反应-核酸层析(PCR-NALF)方法,该方法通过一对标记生物素和地高辛的引物,对提取自样品中的DNA进行扩增,然后用包被亲和素和抗地高辛抗体的层析试纸条对扩增产物进行检测,并通过肉眼可见的红色条带进行结果判读,从而替代电泳实现便捷检测。在特异性试验中,其他李斯特菌和常见致病菌均呈现阴性反应,与电泳结果一致。与传统微生物检测法(GB/T 4789.30-2008)相比无显著性差异(χ^2=0,P〉0.05)。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 聚合酶链式反应 核酸层析 胶体金
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应用核酸层析技术快速检测奶粉中阪崎肠杆菌的研究 被引量:2
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作者 王丽丽 杨海荣 +1 位作者 赵瑜 何艳玲 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2013年第6期39-42,共4页
结合PCP与胶体金免疫层析试纸条技术建立了核酸层析检测技术用于奶粉中阪崎肠杆菌的快速检测。该技术根据寡-1,6-葡萄糖苷酶基因设计引物,并分别标记生物素和地高辛,通过试纸条上肉眼可见的红色条带对扩增结果进行判断。通过11株阪崎肠... 结合PCP与胶体金免疫层析试纸条技术建立了核酸层析检测技术用于奶粉中阪崎肠杆菌的快速检测。该技术根据寡-1,6-葡萄糖苷酶基因设计引物,并分别标记生物素和地高辛,通过试纸条上肉眼可见的红色条带对扩增结果进行判断。通过11株阪崎肠杆菌及27株常见致病菌的检测结果说明其特异性强,阪崎肠杆菌纯菌培养检测灵敏度达到103mL-1,人工污染样品检测限达到0.08 g-1,检测奶粉样品时与传统方法(GB/T 4789.40-2010)相比,无显著性差异(x2=0,P>0.05)。该方法灵敏度高、快速、特异性强,可以很好地应用于奶粉以及其他食品中阪崎肠杆菌的检测与鉴定。 展开更多
关键词 阪崎肠杆菌 聚合酶链式反应 核酸层析 胶体金 奶粉
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基于微流控芯片的核酸检测技术 被引量:9
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作者 姚梦迪 吕雪飞 邓玉林 《生命科学仪器》 2017年第4期22-28,共7页
核酸检测,作为一种分子诊断技术,包括核酸提取、扩增和检测,对微生物分析、医学诊断、及时就医等起着根本性的作用。目前核酸检测存在工作量大、成本高、而且耗时长等问题,显著影响了其在诊断中的应用。微流控芯片技术以及侧向流层析试... 核酸检测,作为一种分子诊断技术,包括核酸提取、扩增和检测,对微生物分析、医学诊断、及时就医等起着根本性的作用。目前核酸检测存在工作量大、成本高、而且耗时长等问题,显著影响了其在诊断中的应用。微流控芯片技术以及侧向流层析试纸条,具有制作成本低、设备小型化、分析速度快、灵敏度高等特点,且结果可传送给最终用户,在医疗诊断中具有巨大的发展潜力。鉴于前人的相关研究成果,本文首先介绍了微流控技术在核酸检测中的意义,其次介绍了以微流控芯片为平台的核酸提取技术、扩增技术,以及核酸检测技术,在文章最后展望了将核酸的提取、扩增、检测技术集成到一个微装置中的可行性。 展开更多
关键词 核酸提取 核酸扩增 核酸检测 侧向流层析试纸条 微流控芯片
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基于核酸横流生物传感器的沙门氏菌快速、可视化检测方法 被引量:4
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作者 王月 吴海燕 +6 位作者 孙秀伟 付兵 王奎宇 常洪标 万家余 陈志宝 武志敏 《黑龙江八一农垦大学学报》 2018年第6期63-68,81,共7页
为了建立沙门氏菌的快速、可视化检测方法,根据核酸横流生物传感器(lateral flow nucleic acid biosensor,LFNAB)的检测原理,对沙门氏菌核酸扩增产物进行改良。以沙门氏菌DNA为模板,通过PCR技术和DNA酶的介导,将生物素-三磷酸碱基脱氧... 为了建立沙门氏菌的快速、可视化检测方法,根据核酸横流生物传感器(lateral flow nucleic acid biosensor,LFNAB)的检测原理,对沙门氏菌核酸扩增产物进行改良。以沙门氏菌DNA为模板,通过PCR技术和DNA酶的介导,将生物素-三磷酸碱基脱氧核苷酸(Biotin-dNTP)引入DNA链中,使高拷贝的DNA双链携带一定含量的生物素分子。在DNA链上,由于上游引物修饰的异硫氰酸荧光素抗原(FAM)和dNTP上携带的生物素分子(Biotin),导致新产生的PCR产物可采用LFNAB进行检测。实验证明,Biotin-dUTP最佳的使用量是脱氧胞嘧啶核苷三磷酸(dTTP)和Biotin-dUTP混合物的总量的5%,且LFNAB的样品检验效果清晰直观、肉眼可见,能够检测出101 CFU·mL-1浓度的沙门氏菌。 展开更多
关键词 核酸横流生物传感器 沙门氏菌 生物素化双链DNA 灵敏性比较 可视化检测
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利用侧流核酸试纸条快速检测非洲猪瘟病毒 被引量:13
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作者 王之莹 于文杰 +2 位作者 谢瑞彬 乔璐 陈爱亮 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第4期294-299,共6页
为满足基层普通实验室或养殖场等资源有限的实验室对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的检测需求,该研究开发了一种简单、快速、低成本的检测技术,可以用肉眼观察检测结果。研究将传统聚合酶链式反应(polymerase chain rea... 为满足基层普通实验室或养殖场等资源有限的实验室对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的检测需求,该研究开发了一种简单、快速、低成本的检测技术,可以用肉眼观察检测结果。研究将传统聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)与胶体金试纸条技术结合,开发一种低成本的侧流核酸测定试纸条(lateral flow nucleic acid assay,LFNAA)。该体系设计了独特的尾引物,避免了传统核酸试纸条的半抗原标记及抗体的使用。经过PCR扩增后产生一端带着单链寡核苷酸尾巴的双链DNA产物,能够与胶体金标记的寡核苷酸捕获探针结合,从而在试纸条上形成可以用肉眼观察的目标产物。该LFNAA试纸条能够在猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CFSV)、猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪圆环病毒1型(Porcine circovirus 1,PCV1)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus virus,PPV)中特异的鉴定出ASFV的存在,其灵敏度与琼脂糖凝胶电泳的分析结果一致,均能达到103 copies/μL。因此,仅需要一台普通PCR仪,即可对ASFV进行快速灵敏的鉴定(<2 h),其低成本、操作简便的特点非常适合资源有限的实验室中非专业人员的操作。此外,该技术可进一步结合等温扩增技术,能够在食品安全和医学诊断中实现更快更简便的现场检测。 展开更多
关键词 动物 养殖 非洲猪瘟(ASFV) 传统PCR技术 侧流核酸测定(LFNAA) 尾引物 低成本
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Rapid Detection of Wheat Blast Pathogen Magnaporthe oryzae Triticum Pathotype Using Genome-Specific Primers and Cas12a-mediated Technology 被引量:7
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作者 Houxiang Kang Ye Peng +11 位作者 Kangyu Hua Yufei Deng Maria Bellizzi Dipali Rani Gupta Nur Uddin Mahmud Alfredo S.Urashima Sanjoy Kumar Paul Gary Peterson Yilin Zhou Xueping Zhou Md Tofazzal Islam Guo-Liang Wang 《Engineering》 SCIE EI 2021年第9期1326-1335,共10页
Wheat blast,caused by the fungus Magnaporthe oryzae Triticum(MoT)pathotype,is a devastating disease persistent in South America and Bangladesh.Since MoT generally fails to cause visual symptoms in wheat until the head... Wheat blast,caused by the fungus Magnaporthe oryzae Triticum(MoT)pathotype,is a devastating disease persistent in South America and Bangladesh.Since MoT generally fails to cause visual symptoms in wheat until the heading stage when the infection would have advanced,disease control by fungicide application solely based on the detection of visual symptoms is ineffective.To develop an accurate and sensitive method to detect MoT at the seedling and vegetative stages for disease control,we sequenced the genomes of two MoT isolates from Brazil and identified two DNA fragments,MoT-6098 and MoT-6099,that are present in the MoT genome but not in the genome of the rice-infecting Magnaporthe oryzae Oryzae(MoO)pathotype.Using polymerase chain reaction(PCR),we confirmed the specificity of the two markers in 53 MoT and MoO isolates from South America and Bangladesh.To test the efficiency of the two markers,we first established a loop-mediated isothermal amplification(LAMP)method to detect MoT at isothermal conditions,without the use of a PCR machine.Following this,we used the Cas12a protein and guide RNAs(gRNAs)to target the MoT-6098 and MoT-6099 sequences.The activated Cas12a showed indiscriminate single-stranded deoxyribonuclease(ssDNase)activity.We then combined targetdependent Cas12a ssDNase activation with recombinase polymerase amplification(RPA)and nucleic acid lateral flow immunoassay(NALFIA)to develop a method that accurately,sensitively,and cost-effectively detects MoT-specific DNA sequences in infected wheat plants.This novel technique can be easily adapted for the rapid detection of wheat blast and other important plant diseases in the field. 展开更多
关键词 Wheat blast Magnaporthe oryzae Triticum Cas12a nucleic acid rapid lateral flow immunoassay Field detection
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食品中金黄色葡萄球菌核酸层析检测技术的研究 被引量:1
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作者 王丽丽 赵瑜 +1 位作者 于重楠 唐慧林 《食品工程》 2013年第4期28-33,共6页
核酸层析检测技术是将PCR与免疫层析技术相结合,用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测。该技术根据金黄色葡萄球菌nuc基因序列,设计特异性的引物,分别标记生物素和异硫氰酸荧光素(FITC),用胶体金免疫层析技术进行检测。通过12株金黄色葡... 核酸层析检测技术是将PCR与免疫层析技术相结合,用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测。该技术根据金黄色葡萄球菌nuc基因序列,设计特异性的引物,分别标记生物素和异硫氰酸荧光素(FITC),用胶体金免疫层析技术进行检测。通过12株金黄色葡萄球菌及26株常见致病菌的检测结果说明其特异性强,检测灵敏度达到5×103 cfu/mL,样品检测限达到0.5 cfu/g,与传统方法(GB/T 4789.10-2010)结果相比较,无显著性差异(x2=0,P>0.05),可以应用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测与鉴定。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 聚合酶链式反应 胶体金 核酸层析 食品
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基于核酸等温扩增的侧流层析试纸条在病原微生物检测中的研究进展 被引量:5
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作者 陆璐 邱万伟 +2 位作者 丁巧玲 钱立生 刘国东 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第5期1462-1470,共9页
传统的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增方法具有较高的灵敏度、特异性和技术成熟性,但PCR仪成本高、操作复杂,且易出现假阳性。因此更为简单、便捷、低成本的基于核酸等温扩增的试纸条快速检测技术逐渐发展起来。目前... 传统的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增方法具有较高的灵敏度、特异性和技术成熟性,但PCR仪成本高、操作复杂,且易出现假阳性。因此更为简单、便捷、低成本的基于核酸等温扩增的试纸条快速检测技术逐渐发展起来。目前,核酸等温扩增技术被应用于细菌、病毒等病原微生物的检测,其在食品安全中食源性致病菌的监管等方面也有着广阔的应用前景,因此受到广泛的关注。本文介绍了侧流层析技术的检测原理,总结了目前常用的核酸等温扩增技术及其在食源性致病菌检测方面的应用,并对其发展前景进行了展望,以便于掌握该技术的发展趋势,为相关学术研究提供研究思路。 展开更多
关键词 核酸 等温扩增 侧流层析技术 试纸条 快速检测 食源性致病菌
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功能核酸侧流层析传感器及其食品安全快速检测应用 被引量:1
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作者 汪德颖 齐小花 +2 位作者 盛万里 裴佳欢 邹明强 《质量安全与检验检测》 2023年第5期24-30,共7页
食品消费的全球化及食源性疾病的增加,凸显了食品危害监测和食品安全评估的重要性,灵敏、便捷、低廉的生物传感快速检测技术成为食品安全研究热点。功能核酸(FNAs)由于具有高结合亲和力、特异性识别和催化活性、易于修饰等多种功能,被... 食品消费的全球化及食源性疾病的增加,凸显了食品危害监测和食品安全评估的重要性,灵敏、便捷、低廉的生物传感快速检测技术成为食品安全研究热点。功能核酸(FNAs)由于具有高结合亲和力、特异性识别和催化活性、易于修饰等多种功能,被集成到侧向层析分析中构建简单且可持续的纸基层析生物传感器,以实现快速、无抗体、经济高效的靶标检测。本文主要介绍基于不同功能核酸的侧流层析传感器,包括基本原理、从样品预处理到信号转导的构建过程及在食品安全检测中的应用,对未来研究方向进行展望,以期为有效预防控制食品安全问题提供一种生物传感快速检测路径。 展开更多
关键词 功能核酸 核酸侧流层析传感器 快速检测 食品安全
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基于双拖尾重组聚合酶恒温扩增技术的核酸杂交试纸条快速检测驴肉中的马源性成分 被引量:3
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作者 陈阳 任星彤 +3 位作者 贾世龙 吴凌亚 王继成 柳海宾 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第11期3467-3474,共8页
目的建立快速、操作简单、价格相对低廉的重组聚合酶恒温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术结合核酸杂交试纸条快速检测驴肉中马源性成分的可视化检测技术。方法将双拖尾重组聚合酶恒温扩增技术与核酸杂交试纸条相结... 目的建立快速、操作简单、价格相对低廉的重组聚合酶恒温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术结合核酸杂交试纸条快速检测驴肉中马源性成分的可视化检测技术。方法将双拖尾重组聚合酶恒温扩增技术与核酸杂交试纸条相结合。针对马线粒体细胞色素b(cytb)基因设计拖尾RPA引物,这对特殊引物使RPA扩增子带有两个单链拖尾序列,这两个单链拖尾序列可以特异性地被金纳米探针和试纸条上的检测探针识别并捕获,形成一条肉眼可见的红色条带,从而对马源性成分进行检测。结果该方法整个扩增(15 min)和检测(5 min)过程在20 min即可完成,对马肉的检出限达到0.010%,且仅对马肉核酸有特异性扩增,与其他8个物种的核酸均无交叉反应。20份市售驴肉样品中有2份存在马源性成分,且该方法与PCR结合凝胶电泳的检测结果具有很好的一致性。结论该方法特异性强、灵敏度高,可实现驴肉中马源性成分的可视化快速检测。 展开更多
关键词 肉类真实性 双拖尾扩增 核酸杂交试纸条 马源性成分 可视化检测
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可视化核酸检测技术RPA-LFD的研究和应用进展 被引量:8
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作者 于灵芝 陶凌云 魏晓锋 《实验动物与比较医学》 CAS 2021年第6期547-553,共7页
重组酶聚合酶扩增技术(recombinase ploymeraseamplication,RPA)是一种新型恒温核酸扩增技术,与PCR相比,操作简便,反应快速,灵敏度高,特异性强,无需精密仪器,是一种可以替代PCR的核酸检测技术,被认为是目前最有潜力成为快速分子诊断的... 重组酶聚合酶扩增技术(recombinase ploymeraseamplication,RPA)是一种新型恒温核酸扩增技术,与PCR相比,操作简便,反应快速,灵敏度高,特异性强,无需精密仪器,是一种可以替代PCR的核酸检测技术,被认为是目前最有潜力成为快速分子诊断的工具。RPA与横向流动试纸条(lateral flowdipstick,LFD)结合的RPA-LFD技术,可实现扩增产物的可视化检测,在病原体现场核酸快速检测中具有良好的应用前景,这为实验动物的质量监督检验提供了一种新的方法。本文对RPA-LFD这一新型核酸检测方法的技术原理、研究现状、技术瓶颈及用于现场核酸提取的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 重组酶聚合酶扩增技术 横向流动试纸条 现场核酸提取 动物疫病现场监测
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双拖尾重组聚合酶恒温扩增技术结合核酸杂交侧流条快速检测牛肉中的鸡、鸭、猪源性成分 被引量:1
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作者 曹婷婷 袁毅 +1 位作者 王晶 柳海宾 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第15期119-128,共10页
目的 建立双拖尾重组聚合酶恒温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)结合核酸杂交侧流条(nucleic acid hybridization-lateral flow strip, NAH-LFS)快速检测牛肉中鸡源、鸭源、猪源性成分的可视化检测技术。方法 采用多重... 目的 建立双拖尾重组聚合酶恒温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)结合核酸杂交侧流条(nucleic acid hybridization-lateral flow strip, NAH-LFS)快速检测牛肉中鸡源、鸭源、猪源性成分的可视化检测技术。方法 采用多重双拖尾RPA技术与NAH-LFS相结合,对鸡、鸭、猪线粒体D环区域设计特异性拖尾RPA引物,扩增出双拖尾的RPA产物。鸡、鸭、猪3个物种RPA产物的拖尾序列分别与红、黄、蓝3种颜色的金纳米探针和侧流条上的检测探针杂交。结果 鸡、鸭、猪3个物种RPA产物与探针杂交后形成肉眼可见的红、黄、蓝3色条带,整个RPA扩增(15 min)和侧流条检测(5 min)过程在20 min内即可完成。该方法对牛肉中鸡、鸭、猪肉的检出限达0.01%,且仅对鸡、鸭、猪肉DNA有特异性,与其他10个物种的DNA均无交叉反应。采集50份市售牛肉样品,使用该方法进行真实性检测:10份牛肉干、10份生牛肉、10份酱牛肉中未检测出其他动物源性成分, 10份牛肉馅料中检测出1份含猪源性成分, 10份牛肉片中检测出1份含鸡源性成分。该方法与聚合酶链式反应结合凝胶电泳的检测结果具有很好的一致性。结论 RPA技术结合NAH-LFS具有特异性强、灵敏度高、操作简单的优点,可实现牛肉中鸡、鸭、猪源性成分的同时可视化快速检测。 展开更多
关键词 肉类鉴定 双拖尾重组聚合酶扩增 核酸杂交侧流条 可视化检测
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核酸分子杂交-流式细胞术检测HPV E6/E7 mRNA初步研究 被引量:1
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作者 张亚旭 崔延伟 刘紫烟 《检验医学》 CAS 2023年第1期46-50,共5页
目的探讨核酸分子杂交-流式细胞术检测HPV E6/E7 mRNA的可靠性和应用价值。方法收集2018年10月—2019年10月广东省妇幼保健院和中山大学附属第一医院妇科普通门诊常规宫颈癌筛查结果异常的361例已婚女性患者的子宫颈上皮脱落细胞样本,... 目的探讨核酸分子杂交-流式细胞术检测HPV E6/E7 mRNA的可靠性和应用价值。方法收集2018年10月—2019年10月广东省妇幼保健院和中山大学附属第一医院妇科普通门诊常规宫颈癌筛查结果异常的361例已婚女性患者的子宫颈上皮脱落细胞样本,并进行新柏氏液基细胞学检测(TCT)、HPV DNA检测、HPV E6/E7 mRNA检测和组织病理学检查。结果HPV E6/E7 mRNA检测阳性率随组织病理学检查结果严重级别的升高而增加。与HPV DNA比较,HPV E6/E7 mRNA有较高的特异性(72.73%)和阳性预测值(47.06%)。当TCT结果为ASCUS时,依据HPV E6/E7 mRNA结果进行阴道镜检分流的正确率为66%。结论HPV E6/E7 mRNA检测与组织病理学检查有较高的一致性,且阴道镜镜检分流正确率和判断子宫颈组织高度病变的特异性、阳性预测值均较高。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 E6/E7 mRNA 宫颈癌 核酸分子杂交 流式细胞术
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基于量子点微球和RPA技术的ASFV抗体-核酸快速现场联检方法的建立
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作者 赵伊然 单衍可 +7 位作者 李嘉豪 何昭群 王欣艺 温墩 王米拉 储蕊 赵东明 刘斐 《中国农业科学》 CAS 2024年第24期4990-5002,共13页
【背景】非洲猪瘟(African swine fever,ASF)作为世界动物卫生组织(world organization for animal health,WOAH)规定必须通报的疫病之一,同时也是我国一类动物疫病,因缺乏有效疫苗和治疗方法,早期、有效、快速和敏感的检测对防控ASF至... 【背景】非洲猪瘟(African swine fever,ASF)作为世界动物卫生组织(world organization for animal health,WOAH)规定必须通报的疫病之一,同时也是我国一类动物疫病,因缺乏有效疫苗和治疗方法,早期、有效、快速和敏感的检测对防控ASF至关重要。目前,非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)常用临床检测方法主要包括荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)、酶联免疫吸附测定试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)等,但这些技术均需要复杂的操作、昂贵的仪器以及较长的检测时间,不适用于现场快速检测。此外,ASFV感染后宿主体内的抗体和核酸含量在不同时间段有明显的差异,因此单独检测ASFV核酸或抗体可能会导致假阴性的存在。【目的】通过研发一种基于量子点微球和重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)的ASFV抗体-核酸联检试纸条,实现ASFV抗体和核酸的现场同时检测,以提高检测的灵敏度、特异性,降低检测成本,节约检测时间。【方法】通过结合量子点荧光免疫层析技术及RPA技术建立了同时检测ASFV抗体及核酸的侧向流层析试纸条,配套便携式荧光分析仪可实现ASFV抗体-核酸的快速现场联检。本研究优化了量子点偶联蛋白量及检测线包被浓度等条件。在此基础上,确定了该检测方法的cutoff值、敏感性、特异性及重复性,并将所建立的ASFV联检试纸条与市售ELISA试剂盒、qPCR检测试剂盒对临床样品进行检测,比较检测结果,验证该方法的符合率,评价该试纸条的实用性。【结果】联检试纸条使用方便、快速,整个检测过程可在30 min内完成。且与其他6种常见猪传染性病毒之间不存在交叉反应,特异性良好。核酸检测灵敏度可达10 copies/μL,抗体检测灵敏度可达1:3 200。抗体和核酸检测批内变异系数均小于10%,批间变异系数均小于15%,重复性良好。经市售ELISA试剂盒、qPCR试剂盒分别验证,符合率均为100%。除此之外,在临床样品检测中发现,有2份抗体检测阳性的样品其对应的猪只核酸检测为阴性,且这2头猪无明显临床症状,该结果进一步证明了通过抗体和核酸联检能够提高检测的准确性,减少假阴性的存在。【结论】核酸-抗体联检单次试验成本与病原核酸抗体分别检测总成本相比有所降低,节约了检测成本和时间,对于ASF急性发作、慢性感染检测均敏感,避免了仅检测单个核酸或单个抗体的局限性。此方法对操作环境要求低,使用的荧光分析仪便于携带,易于操作,整个操作过程无需过多昂贵的实验仪器和专业技术人员,降低了对检测设备的精密要求,适用在偏远地区以及基层中开展ASFV检测工作。因此,该方法有望成为未来猪场ASFV即时检测的可靠方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 核酸检测 抗体检测 侧向流免疫试纸条
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核酸侧流层析传感器的构建及其在食品安全快速检测中的应用 被引量:8
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作者 罗云波 程楠 许文涛 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1-12,共12页
近年来检测技术作为食品安全监管的重要技术手段而备受关注,特别是操作简便,成本低廉,灵敏、准确的快速检测技术已成为研究热点。本文主要介绍新型核酸侧流层析传感器快速检测平台,包括基本原理、构建策略以及在食品检测中的应用情况,... 近年来检测技术作为食品安全监管的重要技术手段而备受关注,特别是操作简便,成本低廉,灵敏、准确的快速检测技术已成为研究热点。本文主要介绍新型核酸侧流层析传感器快速检测平台,包括基本原理、构建策略以及在食品检测中的应用情况,并对未来研究方向进行展望,以期促进核酸侧流层析传感器在食品安全快速检测领域的发展。 展开更多
关键词 核酸侧流层析传感器 功能核酸 食品安全 快速检测
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重组酶聚合酶扩增技术的研究进展 被引量:17
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作者 孙魁 邢微微 徐东刚 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期802-804,807,共4页
重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),是Piepenburg等于2006年首先提出的一种新型的恒温核酸扩增技术,其最显著的优势就是可在25~43℃的恒温下实现特定核酸序列的扩增,且能在5~20 min观察结果。RPA技术... 重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),是Piepenburg等于2006年首先提出的一种新型的恒温核酸扩增技术,其最显著的优势就是可在25~43℃的恒温下实现特定核酸序列的扩增,且能在5~20 min观察结果。RPA技术设备要求低,扩增过程不仅可采用传统的反应管,还可在纸片等反应载体上进行。通过结合探针或横向流动试纸条(LFD)等方法,可实现扩增产物的定量分析或可视化判别。RPA作为一种操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性强、无需精密仪器的检测技术,是目前最有潜力成为快速分子诊断的工具,其在床旁诊断及防疫现场检测中都具有良好的应用前景。该文介绍了RPA技术在反应条件、产物检测等方面的优势及发展,总结了此技术近几年在实际应用中的情况,展望了RPA技术在床旁诊断及疾病防控中的未来方向。 展开更多
关键词 恒温核酸扩增技术 重组酶聚合酶扩增技术 横向流动试纸条分析 床旁诊断 疾病防控
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