乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品的研制

目的建立乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品,确定其质量标准。方法通过对24份病原体培养物的复核、确证,全基因组测序及基因分型,组成乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品,经多家实验室的协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品由10份阴性、14份阳性、1份最低检出限和1份精密度样品组成。质量标准为10份阴性参考品应均检出阴性;14份阳性参考品应至少检出13份阳性;精密度考品重复检测10次,要求均为乙型脑炎病毒阳性,且其检测值的CV应不大于5.0%;最低检出限参考品要求1∶102倍稀释及以上浓度时应为乙型脑炎病毒阳性。参考品的均匀性及稳定性均符合要求。结论该参考品可用作乙型脑炎病毒核酸检测试剂的质量控制及评价。

某血筛核酸检测系统一代二代检测能力比对分析

目的分析比较科华血筛核酸检测系统一代和二代的检测能力。方法收集2015年3月—2022年8月科华血筛核酸检测系统一代检测数据指标以及2022年9月—2023年9月科华血筛核酸检测系统二代检测数据指标,检测数据指标包括检测标本数、混检反应性pool数、拆分反应性标本数及试剂使用率等,对数据进行统计分析,比较科华血筛核酸检测系统一代和二代的检测能力。结果科华系统一代和二代混检反应性率差异无统计学意义(P>0.05),有效拆分率和标本反应性率差异有统计学意义(P<0.05)。一代、二代HBV DNA有效拆分率差异无统计学意义(P>0.05)。科华试剂利用率二代高于一代,差异有统计学意义(P<0.05)。结论科华血液核酸筛查系统二代有效拆分率和标本反应性率都有所提升,可以进一步保障输血安全,同时试剂利用率提高可以降低检测成本。

血液筛查实验室核酸检测试剂损耗控制的探讨

目的分析核酸实验室试剂损耗,对存在的报废因素进行改进,减少核酸检测系统的试剂报废。方法对60 000份核酸检测试剂的使用情况进行全面的分析,并结合实际的检测过程,分析存在的各种试剂报废因素,探讨减低试剂报废所采取的措施。结果消耗60 000份检测试剂,发布检验报告52 809份,试剂利用率88.02%,总消耗率为11.98%。结论影响试剂损耗的因素有日常质控、参加室间质评、复检、鉴别、环境监测、系统故障、人为因素、标本等多方面的因素。

3种新型冠状病毒核酸检测试剂对120份样本检测结果的比较与分析

目的对市售的3种国产新型冠状病毒核酸检测试剂(实时荧光RT-PCR法)的检测结果进行比较和分析,以供检测机构参考。方法采用3种核酸检测试剂(实时荧光RT-PCR法)对120份新冠肺炎病人和密切接触者的咽拭子、尿液、唾液和粪便样本进行平行检测,运用SPSS20软件采用卡方检验对检测结果进行分析。结果120份样本中,3种试剂阳性率分别为42.50%(51/120)、39.17%(47/120)和41.67%(50/120),阳性检出率无统计学差异(χ2=0.298,P>0.05),对4种样本检测阳性检出率,差异无统计学意义(P>0.05)。3种试剂检测结果一致的有89份。检测结果一致性从高到低为:A试剂和C试剂>B试剂和C试剂>A试剂和B试剂。结论由于不同厂家试剂灵敏度和准确性不同导致检测结果和检测一致性存在差异,提示试剂厂家需进一步优化性能,提高检测灵敏度和准确性,同时各检测机构应采取多种质控方法以确保新冠病毒核酸检测准确性,以便更好地为疫情防控、病人救治提供科学依据。

两种检测模式对核酸检测试剂有效利用率的影响

目的比较两种血液检测模式下核酸检测试剂有效利用率。方法统计本实验室2013年度执行与血液批放行设置对应的检测批于48 h内完成检测(模式1)和2015年度执行血液隔离放行"循环满架"72 h内完成检测(模式2)两个阶段的核酸试剂使用情况,比较两种模式下核酸试剂有效利用率。结果模式2试剂总有效利用率为87.70%,显著高于模式1的81.72%(χ~2=34.734,P<0.05);模式2的混检阳性拆分单检试剂有效利用率为78.06%,高于模式1的70.86%(χ2=66.635,P<0.05)。结论模式2的核酸试剂有效利用率较高,混检后阳性拆分是影响试剂有效利用率的主要原因,模式2适用于本站血液检测批放行。

HBsAg、抗-HCV、抗-HIV酶免阴性及单试剂反应性献血者核酸检测结果分析

目的通过对HBsAg、抗-HCV、抗-HIV酶免结果双阴性及单试剂反应性献血者进行核酸检测(NAT),分析两种检测方法的结果差异和鉴别试验的反应性项目,为假反应性献血者的归队提供理论依据。方法分别用两种酶免试剂对献血者血液进行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV血清学检测,对酶免阴性及单试剂反应性标本8人份混样进行HBV、HCV、HIV三联核酸定性检测,对NAT呈反应性的标本进行鉴别试验确定反应性的具体标本。结果 31 065份血液标本中酶免双试剂阴性30254份,单试剂反应性241份,其中进口试剂180份,国产试剂61份,主要集中在HCV和HIV进口试剂,两者差异有统计学意义;进行8人份混样NAT检测共有54份呈反应性,包括46份HBV、3份HCV、5份HIV。拆分鉴别实验检出39份HBV,其中ELISA阴性标本鉴别出37份阳性,单试剂反应标本中鉴别出2份,未拆分出HCV、HIV阳性标本,总拆分阳性率为72.2%。结论酶免单试剂反应性结果的假阳性率较高,核酸检测能提高对病毒的检测能力,有效降低经输血途径传播病毒的风险,选择两者互补的检测模式,对酶免单试剂反应性献血者进行追踪随访和复查,可为假反应性献血者的归队提供理论支撑,有利于献血者的召回。

2014年广州地区无偿献血者血液核酸检测试剂损耗原因

目的:分析核酸实验室试剂损耗的原因,对存在的问题分析以及改进,以达到减少损耗的目的,降低检测成本。方法:对广州血液中心2014年334 492人份核酸试剂检测有效报告数和试剂损耗数进行统计,分析试剂损耗的各种因素,探讨对减少试剂损耗的措施。结果:2014年消耗334 492人份核酸试剂,发布有效检验报告数294 465人份,试剂利用率88.03%,总消耗率11.97%,包括日常质控检测损耗率9.32%,系统故障率1.89%,鉴别实验损耗率0.74%以及其他损耗0.02%。结论:影响试剂损耗的原因有日常质控检测的消耗,系统的硬件、软件的故障,鉴别实验使用,人为的操作失误等其他多方面的因素。其中日常质控检测的消耗,系统的硬件、软件的故障是最主要因素。

乙肝表面抗原双试剂阳性HBV-DNA核酸检测阴性结果分析

目的通过分析献血者乙肝表面抗原检测双试剂阳性而核酸检测阴性的结果,探讨1遍血清学联合1遍核酸检测的新检测策略对血液安全的意义。方法对2017—2019年献血者标本中乙肝表面抗原血清学双试剂阳性的标本,无论核酸检测系统采取的是混样模式还是单检模式都同时进行核酸检测。阴性的标本使用原检测系统再进行重复检测。结果 2017—2019年献血者检测标本共计25.8万人份,乙肝表面抗原双试剂阳性标本共计195份,核酸HBV DNA阳性标本172份,阴性标本23份,其中核酸单检系统阴性标本8份,核酸混检系统阴性标本15份。单检系统的8份标本再次进行检测,至少有1次为阳性的标本有5份,混检系统的15份标本再次进行检测,至少有1次为阳性的标本有9份。结论无论单检核酸检测系统还是混检核酸检测系统都会出现乙肝表面抗原双试剂阳性而核酸检测阴性的结果,其中混检系统较单检系统的标本数量要多近1倍。重复检测结果为阳性标本的比例约为60%,为低浓度标本的机会性检出。因此采取1遍血清学联合1遍核酸进行乙肝检测的新检测策略,无论是核酸检测系统还是血清学检测系统都应进行系统的评估,比较与实验室原有检测策略的差异,避免漏检的发生,减低输血传播疾病的风险。

欧盟和美国血筛试剂批签发监管制度研究及启示

目的:对我国血筛试剂的批签发检验和监管思路提出建议。方法:研究欧盟和美国对血筛试剂批签发检验和监管的法规及实施现状,结合我国国情及国外监管经验,对我国血筛试剂监管提出建议。结果与结论:为保证血筛试剂质量,欧盟和美国都制定了严格的法律法规,对血筛试剂实施批签发管理。依据《生物制品批签发管理办法》,我国已对血清学检测血筛试剂实施批签发,但核酸检测血筛试剂尚未开展批签发。建议加快推动落实批签发工作,适时增加时限性输血相关传染病标志物的检测试剂批签发项目,指定检验机构开展全部项目检验,以进一步完善我国血筛试剂监管,保障人民用血安全。

7种国产沙眼衣原体核酸检测试剂的平行比较

目的了解国产沙眼衣原体核酸检测试剂的检测性能,更好地为临床服务。方法选取7种国产试剂平行检测不同浓度的衣原体纯培养物,并对101例临床拭子样本中的DNA同步进行扩增。根据试剂性能比较结果,选取E试剂和D试剂作为参考试剂,比较各种检测试剂对临床DNA样本的检测性能。结果 2种参考试剂对101份DNA样本检测的结果一致,其他5种试剂与2种参考试剂比较,敏感性为88.89%～100%,特异性为97.59%～100%,各种检测试剂与参考试剂的检测敏感性有一定的差异,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论7种沙眼衣原体核酸检测试剂的敏感性有差异,且部分试剂在检测低浓度样本时性能欠佳,需要进一步优化其扩增条件以提高扩增的敏感性和特异性;建议增加对无创性样本的考量,以更好地适应大规模的筛查需求。

肺炎链球菌核酸检测试剂国家参考品的研制及验证

目的研制肺炎链球菌核酸检测试剂国家参考品,并进行适用性验证。方法选择10株肺炎链球菌和10株非肺炎链球菌细菌制备成阳性参考品、阴性参考品、重复性参考品和最低检出限参考品。对参考品的分装均匀性和稳定性进行评估。采用4家企业生产的肺炎链球菌核酸检测试剂盒对制备的肺炎链球菌国家参考品进行准确性、特异性、重复性和最低检出限验证。结果参考品的分装均匀度良好,循环阈值的变异系数均在5.00%以内。2~8℃、室温(25℃)和37℃放置3、7 d及反复冻融3、5次都不影响参考品的稳定性。4家企业的试剂盒的准确性、特异性及重复性检测结果均符合要求。1家企业的试剂盒的最低检出限为1.0×104个/mL,其他3家企业的试剂盒的最低检出限为1.0×103个/mL。结论研制完成一套肺炎链球菌核酸检测试剂国家参考品,能够用于肺炎链球菌核酸检测试剂盒的质量控制和评价。

HIV抗原抗体筛查结合核酸定量补充实验检测策略的临床应用评价

目的对艾滋病病毒（HIV）4代区分抗原抗体试剂筛查结合核酸定量补充实验的HIV检测策略临床应用进行评价。方法 2015年9月1日至2017年5月31日,HIV4代区分抗原抗体试剂筛查有反应的病例样本1 122例,用3代试剂双份复检、蛋白印迹法（WB）抗体确证,抗体不确定或阴性的样本采用核酸定量检测或随访检测。按2015版《全国艾滋病检测技术规范》中区分抗原抗体的抗体诊断策略对数据进行统计,分析4代试剂早期感染检出能力和HIV核酸定量检测作为补充实验的可行性。结果 1 122例样本中,非性病门诊筛查样本中,有反应的66例,均为Ag^-/Ab~＋;性病门诊筛查样本中,有反应的1 056例,其中4代试剂筛查Ag~＋/Ab~＋病例3例,Ag~＋/Ab^-32例。性病门诊的32例Ag~＋/Ab^-病例中,3代试剂Ab^-病例13例,占性病门诊初筛有反应病例的1.23%;26例进行了核酸定量检测,核酸检测率占81.3%（26/32）;抗体确证结果显示,WB阳性6例,WB阳性率为18.8%（6/32）。所有32例病例经WB抗体确证和/或核酸定量检测,结合CD4~＋T淋巴细胞和流行病史,均诊断为HIV感染。4代试剂筛查单独抗原有反应的,与HIV诊断阳性符合率为100%。按新的策略,共74例需进行核酸定量补充实验或随访检测,对补充实验选用核酸定量和随访的病例人数进行卡方检验,χ2=3.28,P=0.07,选择做核酸检测和随访检测的病例不具有统计学意义。结论 HIV区分抗原抗体试剂用作初筛结合核酸定量检测,作为补充实验的检测策略可提高HIV早期感染的检出率,在高危人群中具有推广的可行性,不同实验室宜根据检测对象的特点对HIV检测策略进行临床评估后选用。

病毒核酸检测试剂的性能评估和临床试验

随着种类繁多的病毒核酸检测试剂的大规模研发和应用,这些产品的注册和申报流程得到了越来越多的重视,而试剂的性能评估与临床试验一直以来都是申报过程中的重要环节,本文概述了性能评估和临床试验所包括的主要项目,操作规范以及相关的技术要求,为生产企业科学合理地进行核酸类诊断试剂的研制与开发提供指引。

ELISA检测单试剂反应性献血者跟踪检测结果分析

目的:了解攀枝花地区酶联免疫吸附试验(ELISA)检测单试剂反应性献血者情况,探讨在攀枝花地区通过献血者追踪检测对单试剂反应性献血者回归的意义,为指导制定相应的献血者归队策略,进一步稳定和扩大献血者队伍提供依据。方法:对2017-01-01-2018-01-31收集的18154例无偿献血者ELISA及核酸检测结果进行统计分析,并对其中单试剂反应性的献血者从检出后第6个月、12个月仍用2次ELISA加1次核酸的方法进行2次跟踪检测。结果:18154例献血者ELISA检测不合格共计264例(1.45%),其中双反应性144例(0.79%),单反应性120例(0.66%)。在对115例单试剂反应性献血者的跟踪检测中有12例(10.4%)ELISA及核酸检测均为非反应性,2例抗-HIV确认为阴性,97例(84.3%)ELISA仍然为单试剂反应性,其余6例(5.2%)转化为双试剂反应性。结论:通过追踪检测提示,在未开展确证实验,不改变检测试剂和检测方法的前提下,跟踪检测对献血者回归、稳定献血者队伍意义不大。但能提示开展核酸检测的情况下,只采用1种ELISA检测试剂进行初筛,可能存在漏检的风险,同时进行2次ELISA检测仍有必要。

基于分块法和盒码法的多准则病毒混检决策方法

目的探讨在新型冠状病毒样本混合检测中,阳性样本存在性和普遍性问题的最优解决方案,为低风险群体的核酸筛查提供更为快捷有效的检测方案。方法针对混检过程中不同阳性样本数情形下的时间要求、试剂盒数与最大检测样本数三者之间关系问题建立数学模型,分别从编码和非编码方式寻找最优检测方法。对是否存在阳性样本、单个阳性样本、多个阳性样本三种情形分别进行探究,并分析各情形下的检测试剂需求量。结果显示阳性样本存在性和单阳性样本时盒码法检测样本效率高,多阳性样本时非编码方式中的最优分块法检测样本效率高。最优分块法在各类情形中的检测试剂需求量优于其他方法。结论研究结果可直接应用于低密度感染人群,其中盒码法适用于检测资源充足、排查是否存在阳性样本情形;最优分块法适用于阳性样本较少、检测资源有限情形,同时满足混检技术大幅度提升情形,以60696样本混检为例,可用于低于8.34%阳性率区域。研究内容适用于中低风险地区和部分高风险地区,对于低风险地区疫情初期检测资源不足、疫情中期区域排查、区域限时检测具有重要实用价值,同样适用于其他可进行混合检测的病毒样本。