三七总皂苷抑制小鼠星形胶质细胞活化缓解完全弗氏佐剂所致炎性痛

目的探讨三七总皂苷(PNS)对完全弗氏佐剂(CFA)所致慢性炎性疼痛小鼠模型的镇痛作用及可能机制。方法48只C57BL/6J雄性小鼠随机分成生理盐水对照组(Ctrl)、CFA组(CFA)、CFA+PNS组、CFA+地塞米松(DEX)组(CFA+DEX)。采用Von Frey纤维丝检测小鼠机械疼痛;采用免疫组织化学法检测脊髓后角胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性星形胶质细胞数目和形态结构变化;采用Western blotting检测各组小鼠相应节段脊髓GFAP、核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1、白细胞介素(IL)-1β和IL-18的表达。结果与Ctrl组相比,CFA组小鼠机械痛阈值在第1、3、5、7、14天明显下降,小鼠脊髓NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达均显著增加。PNS干预可缓解模型小鼠机械痛觉,下调小鼠脊髓NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达,且与CFA+DEX组表达差异无显著性。免疫组织化学结果显示,与Ctrl组相比,CFA组小鼠脊髓后角GFAP阳性细胞数目显著增多;PNS干预后CFA+PNS组小鼠脊髓后角GFAP阳性细胞数目减少;DEX干预后对小鼠脊髓后角GFAP阳性细胞数目没有明显影响。Western blotting结果显示,与Ctrl组相比,CFA组小鼠脊髓GFAP表达明显增加;PNS干预后CFA+PNS组小鼠脊髓GFAP表达明显减少,DEX干预后对小鼠脊髓后角GFAP表达没有明显影响。结论PNS对炎性痛具有较好的缓解作用,其机制可能与抑制星形胶质细胞活化以及减少NLRP3炎性小体激活有关。

外周血清NLRP3、HMGB1水平与急性ST段抬高型心肌梗死患者PCI术后缺血再灌注损伤的关系

目的分析外周血清核苷酸寡聚化结构域样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平与急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的关系。方法选取2020年1月—2021年7月武汉亚洲心脏病医院ICU收治接受PCI的STEMI患者165例,根据PCI术后是否发生MIRI分为MIRI组103例和非MIRI组62例。比较2组临床资料及外周血清NLRP3、HMGB1水平,多因素逐步Logistic回归分析STEMI患者PCI术后MIRI影响因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析外周血清NLRP3、HMGB1水平对STEMI患者PCI术后MIRI的预测价值。结果MIRI组患者年龄、罪犯血管为右冠状动脉比例、Killip分级、血尿素氮、血肌酐、B型脑钠肽、住院天数、心血管不良事件发生率均高于非MIRI组,收缩压、舒张压、eGFR、ACEI/ARB/ARNI使用比例低于非MIRI组(P<0.05)。外周血清NLRP3、HMGB1水平MIRI组术前高于非MIRI组;术后即刻2组均降低,但MIRI组高于非MIRI组;术后24 h 2组均再次升高,且MIRI组高于非MIRI组(P均<0.05)。多因素Logistic逐步回归分析显示,年龄大、罪犯血管为右冠状动脉、B型脑钠肽高、血清NLRP3高、血清HMGB1高为STEMI患者PCI术后发生MIRI的独立危险因素[OR(95%CI)=1.052(1.010~1.096)、1.037(1.007~1.068)、1.003(1.001~1.004)、1.440(1.232~1.684)、1.728(1.312~2.276)],而收缩压、舒张压高为独立保护因素[OR(95%CI)=0.684(0.579~0.808)、0.551(0.406~0.746)]。ROC曲线显示,血清NLRP3、HMGB1及二者联合预测STEMI患者PCI术后MIRI的曲线下面积(AUC)分别为0.769、0.740、0.835,二者联合预测的AUC大于单项预测(Z=2.297、3.149,P=0.022、0.002)。结论PCI术后发生MIRI的STEMI患者外周血清NLRP3、HMGB1水平升高,为MIRI发生的独立危险因素,可作为PCI术后MIRI预测指标。

小儿柴桂退热口服液对脂多糖致肺损伤模型小鼠的作用及机制

目的探讨小儿柴桂退热口服液对脂多糖诱导的肺损伤模型小鼠的作用及机制。方法将60只雄性KM小鼠随机分为空白对照组(A组,生理盐水),模型对照组(B组,生理盐水),小儿柴桂退热口服液低、中、高剂量组(C_(1)组、C_(2)组、C_(3)组,8,16,32 mg/kg),阳性对照组(D组,5 mg/kg连花清瘟胶囊),各10只。除A组外,其余各组小鼠均一次性尾静脉注射脂多糖5 mg/kg,以复制肺损伤模型,建模成功后均灌胃相应药物或生理盐水,每天1次,连续3 d。检测小鼠肺组织干/湿质量比;苏木素-伊红染色,显微镜下观察小鼠肺组织的病理形态;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血浆中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用全自动血细胞分析仪检测小鼠的血常规指标;采用免疫印迹(Western blot)法检测小鼠肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)、核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和IL-1β的蛋白表达水平。结果与B组比较,C_(2)组、C_(3)组小鼠肺组织干/湿质量比及外周血白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、淋巴细胞(LYMPH)均显著升高(P<0.05),外周血红细胞比容(HCT)、中性粒细胞计数比例(NEUT%)及肺组织中NLRP3蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);C_(1)组、C_(2)组、C_(3)组小鼠血浆中IL-1β和TNF-α及肺组织中IL-1β和NF-κB蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论小儿柴桂退热口服液可减轻脂多糖诱导的肺损伤模型小鼠肺组织的炎性损伤程度,其作用机制可能与调控NF-κB/NLRP3信号通路有关。

NLRP3炎性小体通路活化对足细胞迁移及骨架重构的影响

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体通路对足细胞迁移及骨架重构的调控作用。方法将人足细胞分为空白组、正常对照(IgG)组、狼疮肾炎(LN)患者IgG组和MCC950+LN患者IgG组。空白组加入等量PBS,正常对照IgG组加入10 mg·L^(-1)正常对照者IgG,LN患者IgG组加入10 mg·L^(-1)LN患者IgG,MCC950+LN患者IgG组用1μmol·L^(-1)NLRP3阻滞药MCC950预处理1 h后加入10 mg·L^(-1)LN患者IgG。以蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞NLRP3炎性小体通路蛋白表达水平;以划痕实验、Transwell检测细胞迁移能力;以黏附实验检测细胞黏附能力。结果空白组、正常对照IgG组、LN患者IgG组、MCC950+LN患者IgG组细胞NLRP3/磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)蛋白相对表达水平分别为0.30±0.33、0.92±0.24、1.08±0.15和0.65±0.21;Caspase1 p20/Caspase1分别为0.44±0.19、0.50±0.09、0.82±0.03和0.52±0.18;细胞迁移率分别为(39.00±6.71)%、(33.66±7.15)%、(11.48±4.50)%和(36.16±9.73)%;迁移细胞数目分别为140.67±45.63、133.00±45.74、57.33±6.11和115.67±22.94;黏附率分别为(92.69±6.19)%、(88.08±8.98)%、(48.11±7.05)%和(77.22±5.62)%。LN患者IgG组上述指标与空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);LN患者IgG+MCC950组上述指标与LN患者IgG组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论LN患者血清IgG可使足细胞NLRP3炎性小体通路活化,并导致足细胞迁移、黏附能力受损,骨架重排。